Wright dėmių pagrindas, medžiagos, technika ir panaudojimas



The Wrigth dėmės yra dažymo technika, kurią sukūrė amerikietis patologas Jamesas Homeras Wrightas (1902 m.) iš Romanowsky dėmės. Kaip Romanowsky dėmės buvo nestabilios, Wrigth į metanolį įtraukė tirpiklį ir fiksatorius.

Ši spalva yra polichromatinė, o tai reiškia, kad ji sukuria keletą spalvų, priklausomai nuo struktūros, kurią dažai sugeria. Šis dažymo būdas buvo plačiai naudojamas atliekant diferencinius baltųjų kraujo kūnelių kiekius ir tiriant raudonųjų kraujo kūnelių, trombocitų ir leukocitų morfologiją periferiniame kraujyje ir kaulų čiulpuose..

Jo taikymas yra labai svarbus, nes skirtingose ​​kraujo ląstelėse gali būti pastebėta anomalijų, palengvinančių ligų, pvz., Leukemijos, bakterinių ar parazitinių infekcijų diagnozę..

Galbūt tai yra labiausiai paplitusios programos, kuriose naudojamas šis metodas, tačiau jos nėra vienintelės. Jis taip pat yra naudingas ne tik kraujo, bet ir kaulų čiulpų mėginiuose, pavyzdžiui, nosies išsiskyrimo, išmatų gleivių, skreplių, odos mėginiuose..

Indeksas

  • 1 Wright'o dėmės pamatas
  • 2 Medžiagos
    • 2.1 Paruošimas
    • 2.2 Buferinis buferinis tirpalas
    • 2.3 Papildomos medžiagos, reikalingos dažymui atlikti
  • 3 „Wright“ dėmių komponentai
    • 3.1 Metanolis
    • 3.2 Amortizatorius
    • 3.3 Eozinas (Y)
    • 3.4 Mėlyna mėlyna
  • 4 Technika
  • 5 Naudingumas
    • 5.1 Hematologija
    • 5.2 Nosies sekrecija
    • 5.3 Parazitologija
    • 5.4 Kvėpavimo takų infekcijos
    • 5.5 Bakteriologija
    • 5.6 Mikologija
  • Kaip kraujo mėginio struktūros pastebimos su Wright dėmėmis??
  • 7 Rekomendacijos geram dažymui
  • 8 Dažniausios spalvos klaidos
    • 8.1 Labai blyškus dažymas
    • 8.2 Spalvos nuosėdos
    • 8.3 Ištepti labai raudonai arba mėlyna spalva
  • 9 Saugojimo režimas
  • 10 Nuorodos

Wright dėmių pagrindas

Wright'o dėmė gimė iš Romanowsky dėmės, kurią sudaro metilo alkoholio tirpalas iš rūgšties dažiklio (eozino Y) ir bazinio (metileno mėlyna) ir jo oksidacijos produktų..

„Wright“ dėmėje naudojamų dažiklių mišinys sukelia Romanowsky žinomą efektą, tai reiškia, kad ji suteikia gražią violetinę spalvą leukocitų branduoliams ir neutrofilinėms granulėms, o raudonieji kraujo kūneliai yra dažyti rožine spalva..

Komponentai, atsakingi už Wright dėmės tipų spalvų diapazoną, yra mėlynas B ir eozinas Y. Stebėtas efektas priklausys nuo dažiklių prijungimo prie cheminių struktūrų ir mėlynos B ir eozino Y sąveikos..

Rūgštinės struktūros, tokios kaip nukleino rūgštys, branduoliniai baltymai ir reaktyvios nesubrendusios kai kurių ląstelių citoplazmos, nustato mėlyną B (pagrindinį dažiklį).

Nors pagrindinės struktūros, tokios kaip hemoglobinas, segmentuotų eozinofilų granulės, be kitų ląstelių struktūrų, fiksuoja eozino Y (rūgšties dažus).

Dažymo rezultatą gali įtakoti įvairūs veiksniai, pvz., Wright dažų pH, buferis ir plovimo tirpalas; taip pat dažymo ir fiksavimo laiką.

Todėl kiekvienas reagentų paruošimo etapas yra labai svarbus ir turi būti atliekamas rūpestingai.

Medžiagos

Wright dažymas. 100 ml reikia:

Pasverkite 0,3 g Wright dažų, matuokite 97 ml metanolio ir 3 ml glicerolio.

Paruošimas

Skiedinyje įpilkite didelį Wright dažų kiekį ir lėtai įpilkite glicerolio, kol milteliai visiškai ištirps..

Tada pridedamas metanolis, sumaišomas ir pilamas į gintaro butelį.

Prieš naudodami tirpalą, reikia purtyti su švelniu judesiu ir filtru.

Buferinis buferis

Litru distiliuoto vandens, 3,76 g dinatrio hidrofosfato (Na2HPO4   2H20) plius 2,1 g kalio dihidrofosfato (KH)2PO4).

Labai gerai sumaišykite, kol visi ištirpinti reagentai ištirps. Nustatykite pH iki 7.2. Supilkite į stiklainį ir laikykite kambario temperatūroje.

Papildomos medžiagos, reikalingos dažymui atlikti

Be to, norint atlikti dažymo metodą, reikalingos kitos medžiagos: lapai, turintys daiktus arba uždengiantys daiktus, spalvos tiltas, pisetas su vandeniu arba skalbimo buferiu, chronometras, skirtas dažymo laikams ir kai kuri džiovinimo medžiaga (sugeriantis popierius, marlė arba medvilnė).

Wright dėmių komponentai

Metanolis

Alkoholis (metanolis) tarnauja kaip kraujo tepinėlis fiksavimui.

Iš esmės tai yra redukcinis reagentas, dehidratorius ir koaguliacinis fiksatorius. Todėl jo funkcija yra baltymų koaguliacija ir jų netirpumas, bet jų nesutrumpinimas.

Metanolis yra plačiausiai naudojamas reagentas tepalams nustatyti visose laboratorijose, nes jis duoda geresnių rezultatų nei etanolis. Ideali koncentracija yra 99%.

Amortizatorius

Buferinis tirpalas (buferinis tirpalas) atlieka dažų pH reguliavimą arba išlaikymą, nes pH koreguojamas iki 7,2 yra būtinas, kad ląstelių struktūros gerai sugeria dažus.

Kita vertus, metanolio fiksacija praeina ląsteles ir buferis padeda jas hidratuoti.

Eozinas (Y)

Eozinas turi afinitetą pagrindiniams komponentams, nes jis yra rūgštis. Du eozino tipai yra labai panašūs vienas į kitą, todėl galima naudoti vieną iš dviejų, gaunant tą patį rezultatą.

Vienas iš jų yra eozinas Y, geltonas eozinas arba tetrabromofluoresceinas, o kitas eozinas B, melsvasis eritrozinas B arba dibromodinitrofluoresceinas. Tačiau eozinas Y yra dažniausiai naudojamas.

Svarbiausia šio dažiklio savybė yra jos neigiamas poliškumas, todėl jį traukia ląstelinės struktūros, turinčios teigiamą krūvį.

Mėlyna mėlyna

Tai pagrindinė spalva. Jos pagrindinė nuosavybė yra metachromasija, ty ne visos struktūros bus dažytos ta pačia spalva, tai priklauso nuo cheminės sudėties, kuri yra spalvinga.

Kai kurie taps šviesūs arba tamsiai mėlyni ir kiti tamsiai violetiniai arba šviesiai alyviniai.

Technika

1-Atlikite mėginio plitimą taip, kad plona plėvelė išliktų ant slydimo arba dangčio.

2-Leiskite orui išdžiūti maždaug 2 valandas.

3-Įdėkite sausą tepalą ant dažymo tilto arba dažymo dėklo, kai mėginys išsiskleidžia į viršų.

4-Uždenkite lapą „Wright“ dažais lašai, kol jis užsandarins visą paviršių. Palikite 5 - 8 minutes.

5-Dažai turi visiškai uždengti skaidrę, neišsipylę per kraštus. Jei dažymo metu jis pradeda išgaruoti, reikia pridėti papildomų lašų.

6-Vėliau pridėkite vienodą kiekį amortizatoriaus, truputį užpūsti, kol pasirodys būdingas metalinis blizgesys. Paimkite 10–15 minučių.

7-Nuplaukite vandentiekio vandeniu, įdėkite minkštą purkštuką tol, kol lapas atrodo rausvai.

8-Su spiritu, įmirkytu alkoholiu, pašalinkite dažus, pritvirtintus prie slydimo galo.

9-Leiskite tepiniui gerai išdžiūti, prieš įdėdami panardinimo alyvą, kad ją būtų galima pamatyti mikroskopu.

Naudingumas

Hematologija

Tai idealiai tinka periferinio kraujo tepimui, tiriant storas kraujo tepinėlis ir tiriant kaulų čiulpų mėginius.

Dėl cheminių šio dažų derinio savybių ląstelių struktūros gali būti lengvai atpažįstamos, nes jos gali atskirti skirtingas ląstelių rūšis.

Nosies sekrecija

Šis metodas yra labai naudingas diagnozuojant alerginį rinitą, nustatant nosies sekrecijos ląsteles (epitelines ląsteles, segmentuotas eozinofilus, polimorfonuklidines)..

Parazitologija

Šia prasme jis buvo naudingas tyrimui Leishmania sp poodinių ląstelių audinių histiocituose odos opose. Taip pat jis naudojamas leukocitų nustatymui išmatose (išmatų leucogramoje)..

Šiuo atveju gydytojui įdomu žinoti, ar išmatose esanti leukocitozė yra polimorfonuklidinė arba mononukleinė. Ši išmatų išmatų leopograma padės nustatyti, ar tai yra atitinkamai bakterinė ar virusinė infekcija.

Kita vertus, kraujyje cirkuliuojančių parazitų galima rasti eritrocitų viduje arba laisvoje plazmoje. Norimi parazitai Plasmodium spp, Trypanosoma cruzii ir filarijas, ir veterinarijoje tai naudinga ieškant Theileria equi ir Babesia caballi, kūdikių sukėlėjai, ypač arklių.

Wright ir Giemsa dėmės gali diferencijuoti hemoparazitus nuo įprastų ląstelių komponentų. Tam galite naudoti dviejų tipų sklaidos tipus:

Bauda

Kraujas išsiskleidžia kaip plona plėvelė ant skaidrių. Nusidažo Wright dėmės, atskleidžiančios branduolio ir citoplazmos savybes.

Storas lašas

Ši metodika yra naudojama parazitų buvimui tirti didesniu kraujo kiekiu.

Dėl to ant stiklelio dedamas didelis kraujo lašas. Jei ten, jūs turėtumėte defibrinuoti, iš didesnio ir didesnio apskritimo iš centro, naudodami kito skaidrių kraštą.

Galiausiai, norint stebėti parazitus storu tepalu, eritrocitai turi būti lizuojami vandeniu.

Kvėpavimo takų infekcijos

Kvėpavimo lygmeniu šis metodas taip pat yra naudingas, nes ląstelių, esančių skreplių mėginiuose, bronchų ar bronchoalveolinio skalavimo, svarba nustatant diagnozę..

Taip pat čia galima išskirti polimorfonukuliarines ląsteles ir mononukliarines ląsteles.

Bakteriologija

Šio metodo naudojimas bakteriologijoje yra ribotas, nes bakterijų dažymui nėra naudinga, todėl jų dažymui naudojami kiti specializuoti dažymo būdai..

Tačiau jis buvo naudojamas ieškant epitelio ląstelių, kurių inkliuziniai kūnai yra Chlamydia trachomatis šlaplės ar endocervikinės gleivinės tepinėliai, nors reikia pripažinti, kad tai nėra geriausias būdas.

Taip pat galima stebėti spiralinės bakterijos tarp raudonųjų kraujo kūnelių Borrelia burgdorferi infekuotiems pacientams, taip pat morulinėms ar inkliuzinėms kūno dalims Ehrlichia sp limfocitų, monocitų ar neutrofilų citoplazmoje.

Mikologija

The Histoplasma capsulatum yra patogeniškas grybelis, dažnai diagnozuotas mikroskopiniu įvairių audinių mėginių stebėjimu, nudažytas Wright dėmėmis.

Kaip kraujo mėginio struktūros pastebimos su Wright dėmėmis?

Rekomendacijos geram dažymui

Kraujo mėginių išplėtimas turi būti išdžiovintas spontaniškai. Tepalai turėtų būti kiek įmanoma plonesni, kad būtų galima geriau užfiksuoti dažus ir išvengti pernelyg didelių dažų.

Aukštos kokybės dažymui rekomenduojama dažyti per dvi valandas po tepimo paruošimo. Kita vertus, idealus mėginys yra kapiliarinis kraujas be antikoagulianto.

Tačiau, jei naudojamas veninis kraujas, jis turėtų būti naudojamas kaip EDTA antikoaguliantas, o ne heparinas, nes pastarieji gali deformuoti ląstelių struktūras.

Norint išvengti nusidėvėjimo, paruoštas dažiklis turi būti laikomas sausose vietose.

Skalbimo metu rekomenduojama naudoti vandenį, kurio pH yra neutralus.

Galiausiai patartina išbandyti dažymo metodus, kurie yra naudojami laboratorijoje kiekvieną kartą.

Tai daroma dažant mėginius ar išplėstinius modelius kaip kokybės kontrolę. Šis žingsnis yra svarbus, nes tai užtikrina, kad dažymas yra tinkamai paruoštas ir dažymo laikas yra gerai standartizuotas.

Jei modelio lapas yra blogai nudažytas, yra problemų, kurias reikia išspręsti.

Dažniausiai pasitaikančios klaidos

Labai šviesus dažymas

Labai blyški tepalai, dažniausiai dėl labai trumpo dažymo laiko arba labai perdėtos plovimo. Jis koreguojamas pailginant kontaktinį laiką su dažikliu arba sumažinant skalbimo laiką.

Dažai nusodina

Dažų nuosėdų buvimas tepinėlėje gali sukelti keletą priežasčių, tačiau dažniausiai pasitaikančios priežastys yra nefiltruotų dažų naudojimas, dažymas ant nelygių spalvų tiltų, naudojant nešvarius lakštus su dulkėmis ar riebalais Baigti dažymą.

Ištepti labai raudonai arba mėlyna spalva

Buferis yra atsakingas už dažiklio pH. Dažai, kurių pH yra mažesnis už nurodytą (rūgštį), bus labai raudoni.

Jei dažų pH yra aukščiau (šarminis), bus gaunamas labai melsvas tepalas.

Saugojimo režimas

Reagentas turi būti laikomas kambario temperatūroje.

Nuorodos

  1. Gutiérrez V. „Wright“ dažymo metodo ir Elisa testo, skirto Ehrlichiosis canina diagnozavimui San Pedro Sula mieste, Hondūre, lyginamasis tyrimas. 2008 m. Baigiamajame darbe kreiptis dėl veterinarijos gydytojo pavadinimo. San Carlos de Guatemala universitetas.
  2. López-Jácome L, Hernández-Durán M, Colín-Castro C, Ortega-Peña S, Cerón-González G, Franco-Cendejas F. Bazinis dažymas mikrobiologijos laboratorijoje. Neįgalumo tyrimai. 2014 m. 3 (1): 10-18.
  3. „Wright dėmės“. Vikipedija, laisva enciklopedija. 2018 m. Gegužės 18 d., 12:05 UTC. 2018 m. Gruodžio 8 d., 20:37
  4. Calderón A, Cardona J, Vergara Ó. Dažnių dažnumas Babesia spp. Montería, Córdoba (Kolumbija) arkliai. Rev. udcaactual išsklaidyti.  2013 m .; 16 (2): 451-458.
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A (2009). Mikrobiologinė Bailey & Scott diagnozė. 12 red. Argentina Panamericana S.A Redaktorius.
  6. Retamales E, Mazo V. Visuomenės sveikatos institutas Čilė. Rekomendacijos kraujo tepimui dažyti kraujo skaitymui.