Pjūvis iki gegužės Grünwald-Giemsa pamatų, technikos ir naudojimo



The Gegužė Grünwald-Giemsa dėmė o Pappenheimas yra diferencinė dažymo technika, maišanti Giemsa ir May Grünwald reagentus. Jis naudojamas norint diferencijuoti normalias ir nenormalias kraujo ląsteles periferiniame kraujyje ir kaulų čiulpuose, taip pat histologinių sekcijų ir citologinių mėginių dažymui..

Abu reagentai - Gemsa ir May Grünwald - yra pagaminti iš Romanowsky tipo dažymo metodo, pagrįsto rūgščių ir bazinių dažų deriniu..

Giemsa techniką pagerino stabilizuodamas eozino, metileno mėlynojo ir jo darinių mišinį su glicerinu. Priešingai, gegužės mėn. Grünwaldas naudoja eoziną ir metileno mėlyną, kaip tirpiklį naudodamas metanolį. Šis strateginis derinys davė puikių rezultatų.

Nors, stebint ląstelių morfologiją, veikia panašiai kaip „Giemsa“ ir „Wright“ spalvos, šis metodas pagerina ankstesnius, koreguodamas parazitų, sukeliančių maliariją, Chago ligą, leishmaniozę ir trichomonozę, spalvą..

Be to, jis pasirodė esąs labai naudingas spermos skysčio citologinio tyrimo metodas. Jis buvo pabrėžtas ne tik parodant spermos morfologines charakteristikas, bet ir leidžia atskirti didelio efektyvumo leukocitus, epitelines ląsteles ir spermatogenezės ląsteles..

Indeksas

  • 1 Fondas
    • 1.1 Dažų įvairovė
  • 2 Technika
    • 2.1 Medžiagos
    • 2.2 Koncentruotas dažų tirpalas May Grünwald
    • 2.3 Koncentruotas Giemsa dažiklis
    • 2.4 Buferinio tirpalo paruošimas pH 7,2
    • 2.5 Kraujo tepinėlis arba kaulų čiulpų dažymo procedūra
    • 2.6 Išplėstinė spermos skysčio dažymo technika
    • 2.7 Svarbios specifikacijos
  • 3 Naudojimas
    • 3.1 Makšties citologija
    • 3.2 Spermos mėginys
  • 4 Nuorodos

Fondas

Technologija seka Romanowsky dėmių pamatus, kuriuose rūgštiniai dažai turi selektyvų afinitetą ląsteliniams pagrindiniams komponentams, o rūgštiniai komponentai pritraukia bazinius dažiklius.

Kitaip paaiškinta, kad ir ląstelių struktūros, ir dažikliai turi teigiamus arba neigiamus elektros krūvius; lygūs mokesčiai atstumiami ir skiriami skirtingi mokesčiai.

Pavyzdžiui, baziniai dažai, tokie kaip metileno mėlynas, yra teigiamai įkrauti ir juos traukia neigiamo krūvio struktūros. Štai kodėl šis dažiklis dengia branduolius, turinčius daug DNR ir RNR, turinčių neigiamo krūvio fosfatų grupes.

Be to, segmentuotos bazofilų granulės ir mononukleáris baltųjų kraujo kūnelių citoplazmos, kuriose yra RNR, yra dažytos.

Taip pat rūgšties dažai turi neigiamą krūvį, todėl jis jungia teigiamo krūvio struktūras, tokias kaip eritrocitai ir segmentuotų eozinofilų granulės. Kalbant apie segmentuotų neutrofilų granules, jie sutvirtina abu dažus.

Spalvų įvairovė

Šiuo metodu kartu egzistuoja ortochromatinių dažiklių ir metachromatikos reakcijų derinys. Ortochromatiniai preparatai (eozinas ir metileninis mėlynas) jungiasi prie ląstelių struktūros, su kuria jie yra susiję, ir suteikia stabilią spalvą, kuri nesikeičia.

Kita vertus, metachromatikai (metileno mėlynos azure A ir azure B deriniai) skiriasi nuo originalios spalvos, kai jie yra susieti su konkrečia struktūra, ir netgi gali būti įvairių atspalvių.

Galiausiai gegužės Grünwaldo tirpalo žingsnis reikalauja vandens, nes be jo dažai įsiskverbia į struktūras, bet nebus tvirtinami. Kad tai įvyktų, dažai turi tapti poliariniais arba jonizuotais, todėl turi sugebėti nusodinti ir prijungti prie susijusių struktūrų.

Technika

Medžiagos

- Skaidrių skaidrės.

- Dažymo tiltai.

- May-Grünwald sprendimas.

- Giemsa dėmė.

- Distiliuotas vanduo.

Koncentruotas dažų tirpalas gali būti Grünwald

Turime pasverti 0,25 g eozino-metileno mėlynos (dažų pagal May Grünwald) ir ištirpinti 100 ml metanolio. Po to mišinys maišomas 1 valandą ir paliekamas 24 valandas. Baigė laiką, jis filtruoja.

Taikant šią techniką, „May Grünwald“ dažai turi būti atskiesti taip: 200 ml praskiestų dažų matuojamas 30 ml koncentruoto tirpalo, pridedama 20 ml buferinio tirpalo ir 150 ml distiliuoto vandens, sureguliuoto iki pH 7,2-7,3. , Tada jis sumaišomas ir filtruojamas.

Koncentruotas Giemsa dažiklis

Pasverkite 0,5 g azur-eozino-metileno mėlynos (dažų pagal Giemsa), ištirpinkite 50 ml metanolio ir įpilkite 50 ml glicerino į mišinį.

Norėdami atlikti techniką, 1:10 praskiedžiama buferiniu tirpalu ir palikite 10 minučių. Jei reikia, jį galima filtruoti.

Buferinio tirpalo paruošimas pH 7,2

Jie turi būti sveriami:

- 40 mg kalio di-vandenilio fosfato (KH2PO4).

- 151 mg dinatrio vandenilio fosfato 12-hidratas (Na2HPO4).

Abu junginiai ištirpinami 100 ml vandens.

Kraujo tepinėlis arba kaulų čiulpų dažymo procedūra

Yra du būdai: klasikinis ir greitas.

Klasikinis režimas

  1. Tepalą uždenkite 2 ar 3 minutes praskiesto May-Grünwald tirpalu.
  2. Nuplaukite buferiniu distiliuotu vandeniu, kad pašalintumėte ankstesnį sprendimą.
  3. Uždenkite tuo pačiu buferiniu tirpalu ir palikite 1 minutę. Idėja yra ta, kad ankstesnė dažai yra pritvirtinti prie konstrukcijų ir tuo pačiu metu ląstelės yra hidratuotos.
  4. Į buferinį vandenį įpilkite 12 lašų praskiestų Giemsa tinktūros ir sumaišykite, kad maišytumėte ir homogenizuotumėte. Leiskite stovėti 15 ar 20 minučių.
  5. Nuplaukite tepinėlį buferiniu distiliuotu vandeniu ir išdžiovinkite.
  6. Fokusuokite ir stebėkite optiniu mikroskopu kraujo ląsteles, kurios yra nudažytos naudojant 40X tikslą. Jei reikia, galima naudoti 100X.

Greitas režimas

  1. Uždenkite tepinėlį su May Grünwald dažikliu, atskiestu 1 minutę.
  2. Nuplaukite buferiniu distiliuotu vandeniu.
  3. Uždenkite buferiniu vandeniu ir palikite stovėti 1 minutę.
  4. Praskiestą Giemsa dažą įdėkite ir palikite 5 minutes.
  5. Nuplaukite buferiniu distiliuotu vandeniu ir išdžiovinkite.

Čia aprašyti metodai yra orientacinis vadovas, tačiau reikia atsižvelgti į tai, kad procedūros ir dažymo laikas skiriasi priklausomai nuo komercinio namo, tiekiančio reagentus. Patartina vadovautis kiekvienos komercinės paskirties namų griežtai nurodytais veiksmais.

Spermos skysčio išplėstas dažymo būdas

1. Uždenkite ploną sluoksnį May Grünwald tirpalu 4 minutes.

2- Pašalinkite dažus ir nuplaukite distiliuotu vandeniu.

3 - Įdėkite atskiestą Giemsa sluoksnį (1:10) distiliuotame vandenyje 15 minučių.

4- Pašalinkite dažus ir nuplaukite distiliuotu vandeniu.

5- Leiskite išdžiūti ir stebėkite po mikroskopu.

Svarbios specifikacijos

Metodas reikalauja, kad reagentai ir skalbimo tirpalai būtų sureguliuoti iki 7,2-7,3, kad dažų, esančių ląstelių struktūrose, afinitetai neiškraipytų ir nesikeistų galutinės spalvos..

Naudojimas

Klinikinės laboratorijos šią metodiką naudoja periferinio kraujo ir kaulų čiulpų, audinių sekcijų ir citologijų tepimui.

Hematologiniame lauke šis metodas yra gyvybiškai svarbus tiriant ląstelių anomalijas pagal formą, dydį ir skaičių. Tai labai vertinga priemonė tam tikrų ligų, tokių kaip leukemija ir anemija, diagnozavimui.

Be to, jis yra puikus naudingumas ieškant hematologinių laukų parazitų (Plasmodium sp ir Trypanosoma cruzi) arba histologinis (Leishmanias sp).

Makšties citologija

Kaip makšties citologija, šis metodas yra ypač naudingas stebint Trichomonas vaginalis. Tai yra svarbi išvada, nes jos buvimas imituoja karcinomos nuotraukas in situ kuris tada išnyksta, kai parazitas pašalinamas.

Spermos mėginys

Tai buvo puiki spermos mėginių tyrimo priemonė, nes ji suteikia vertingos informacijos apie spermos kokybę.

Duomenys, kuriuos jis siūlo, turi būti susiję su skaičiumi ir morfologija, taip pat su tuo pačiu metu esančiomis ir gyvybiškai svarbiomis ląstelėmis, pvz., Gemalo ląstelėmis, leukocitais ir epitelinėmis ląstelėmis..

Atlikus šią analizę galima apibūdinti spermos galvos, kaklo, vidurinės dalies ir pagrindinio gabalo anomalijas..

Be to, jie taip pat gali padėti parodyti hemospermijos atvejus (raudonųjų kraujo kūnelių buvimą spermoje) ir leukospermiją arba pirospermiją (leukocitų skaičiaus padidėjimas spermoje)..

Nuorodos

  1. Costamagna S, Prado M. Naujo testo, gegužės Grünwald-Giemsa ir gramatinių spalvų bei kultūros laikmenų patvirtinimas, siekiant diagnozuoti Trichomonas vaginalis. Parazitolis. 2001 m. 25 (1-2): 60-64. Yra: scielo.
  2. Merck KGaA laboratorija. Gali būti Grünwald eozino metileno mėlyna mikroskopijai.
  3. „Gegužės-Grünwald-Giemsa dėmės“. Vikipedija, laisva enciklopedija. 2018 m. Lapkričio 15 d., 14:37 UTC. 2019 m. Sausio 8 d., 04:29: en.wikipedia.org
  4. Laboratoriniai stikliniai chemikalai. Reagentai histologiniams metodams, hematologijai ir mikrobiologijai. Prieinama adresu: glasschemicals.com
  5. Retamales E, Manzo V. Rekomendacija kraujo tepimui dažyti kraujo skaitymui. Nacionalinė ir referencinė biomedicinos laboratorija. Čilės visuomenės sveikatos institutas.
  6. Sarabia L. Spermiograma pagal PSO kriterijus. Anatomijos ir biologijos raidos programa. Medicinos fakultetas Čilės universitetas Galima rasti adresu: pp.centramerica.com