Kinyouno dažymo pagrindas ir metodai



The Kinyouno dažymas Tai dažymo technika, naudojama dažų rūgštims bakterijų ir rūgščių parazitų dažymui. Jis gimė iš Ziehl-Neelseno spalvos modifikavimo; Abu metodai yra interpretuojami vienodai, tačiau skiriasi dviem elementais: ruošiant pagrindinį reagentą ir tuo, kad Kinyoun technika nenaudoja šilumos.

Dėl šios priežasties jis taip pat žinomas kaip šaltai modifikuotas Ziehl-Neelsen arba Kinyoun šaltas dažymas. Jis skirtas dažymui Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium leprae, netipinės mikobakterijos, Nocardias sp, Cryptosporidium parvum, Cryptosporidium meleagridis, Cryptosporidium felis, Cryptosporidium muris ir Cyclosporas cayetanensis.

Verta paminėti, kad Nocardias truputį dengia šį metodą, nes jie yra iš dalies rūgštims atsparus alkoholis, todėl šiam žanrui modifikuota metodika.

Savo ruožtu Kinyoun šalto technika buvo derinama su trichromo technika, modifikuota Didiero, siekiant nustatyti kokcidijas (Cryptosporidium parvum e Isospora belli) ir mikrosporidijų sporos (Enterocytozoon bieneusi ir Encephalitozoon intestinalis).

Indeksas

  • 1 Fondas
  • 2 Technika
    • 2.1 Medžiagos
    • 2.2 Kinyoun fenicated fuchsin paruošimas
    • 2.3 Alkoholio rūgšties paruošimas
    • 2.4 Metileno mėlynojo kontrasto dažų paruošimas
    • 2.5 Kinyouno dėmių technika
    • 2.6. Specialaus Ninardijos technika
    • 2.7 Didžiojo modifikuotas fenolio ir trichrominio fuksino metodas
    • 2.8 Kokybės kontrolė
  • 3 Kinyoun technika lyginant su Ziehl technika -Neelsen
  • 4 Nuoroda

Fondas

Pagrindinis dažymo reagentas yra karbolio fuksinas arba fuchsinas fenicada, turintis savybę, kad jis jungiasi su karbolio rūgštimis, esančiomis vaškinės ląstelės sienelėje, turinčioje daug lipidų (mikolio rūgščių) mikobakterijų ir tam tikrų parazitų..

Tokia sąjunga nėra neutralizuojama rūgštimi; todėl mikroorganizmai yra apibrėžiami kaip rūgštims atsparus alkoholis.

Skirtingai nei Ziehl-Neelsen technika, kuri fiksuoja dažus per šilumą, Kinyoun technikoje šis žingsnis nėra būtinas, nes šiam metodui paruoštas fenolio fuksino tirpalas turi didelę fenolio koncentraciją..

Fenolis ištirpina ląstelių sienelės lipidinę medžiagą, leidžiančią patekti į karbolio fuksino spalvą. Po dažų prasiskverbimo, jis lieka fiksuotas, nepaisant skalbimo su alkoholio rūgštimi.

Tokiu būdu atsparūs rūgštims atsparūs mikroorganizmai ima būdingą raudoną spalvą, o viskas, kas nėra atsparus rūgštims, tampa spalvos ir dažoma mėlyna spalva..

Technika

Medžiagos

- Modifikuotas fenolio fuksinas.

- Alkoholio rūgštis.

- Mėlyna mėlyna.

Kinyoun fenicated fuchsin paruošimas

- Pagrindinė fuchsin: 4 gr.

- Fenolis: 8 ml.

- Alkoholis (95%): 20 ml.

- Distiliuotas vanduo: 100 ml.

Bazinis fuksinas alkoholyje turi būti ištirpintas lėtai, nuolat maišant. Vėliau kristalizuotas fenolis ištirpinamas vandens vonioje 56 ° C temperatūroje. Ištirpę įpilkite 8 ml į pirmiau paruoštą fuchsino tirpalą.

Alkoholio rūgšties paruošimas

- Koncentruota druskos rūgštis: 3 ml.

- Etanolis (95%): 97 ml.

Jis turi būti matuojamas, sujungtas ir sumaišytas.

Metileno mėlynojo kontrasto dažų paruošimas

- Metilenas mėlynas: 0,3 g.

- Distiliuotas vanduo: 100 ml.

Jis pasveriamas ir ištirpinamas.

Kinyoun dėmių technika

1- Paruoškite tepinėlį tiesiai iš mėginio, kuris gali būti skreplis, plaučių skystis, šlapimo nuosėdos, smegenų skystis arba išmatos; arba iš mikroorganizmų suspensijos, gautos iš grynų kolonijų, sukurtų pirminės kultūros terpėje.

2 - Tvirtinkite tepinėlį su šiluma.

3 - Padėkite tepinėlį ant dažymo tilto ir uždenkite Kinyoun fenolio fuchsino reagentu. Leiskite jam sėdėti 3 ar 5 minutes.

4- Nuplaukite distiliuotu vandeniu.

5 - Balinimo su rūgštiniu alkoholiu 3 minutes ir nuplaukite distiliuotu vandeniu.

6 - Balinti vėl rūgštiniu alkoholiu 1 arba 2 minutes, kol nuvalysite daugiau dažų.

7- Nuplaukite distiliuotu vandeniu ir leiskite nusausinti, stumdami stiklą vertikalioje padėtyje.

8- Uždenkite preparatą metileno mėlyną ir palikite 4 minutes.

9- Nuplaukite distiliuotu vandeniu ir išdžiovinkite.

10 - Patikrinkite esant 40X ir tada 100X.

Jei norite pagerinti ir pagreitinti rūgštinių mikroorganizmų dažymą, įpilkite 1 lašą drėkinamosios medžiagos (pvz., Tergitolio Nr. 7) 30 arba 40 ml Kinouno fenolio fuksino..

Kai kurios laboratorijos keičia mėlynos spalvos kontrastinį dažiklį ryškiai žaliai arba pikininei rūgščiai; pirmoji fone suteikia žalią spalvą, o antroji - geltona spalva.

Kinyoun technika ypatinga Nocardias

Siekiant pagerinti Nocardia bakterijų dažymą, naudojamas Kinyouno dažymo modifikavimas. Technika yra tokia:

1 - Tris minutes padengti tepinėlį su Kinyoun fenicated fuchsin.

2 - Nuplaukite distiliuotu vandeniu.

3 - Trumpai balinkite 3% paruoštu rūgštiniu alkoholiu, kol nebelieka dažų.

4- Nuplaukite distiliuotu vandeniu.

5- Uždenkite preparatą metileno mėlyną ir palikite 30 sekundžių.

6- Nuplaukite distiliuotu vandeniu ir išdžiovinkite.

Didžiojo modifikuotas fenolio ir trichrominio fuksino metodas

Šis metodas rekomenduojamas analizuojant išmatų mėginius ieškant kokcidijų ir sporų Microsporidium sp tuo pačiu metu Laikomasi tokios procedūros:

1 - 10 minučių dengia tepinėlį su Kinyoun fenolio fuksinu.

2- Pašalinkite dažus ir nuplaukite distiliuotu vandeniu.

3 - Baliklis 30 sekundžių su alkoholio druskos rūgštimi.

4- Nuplaukite distiliuotu vandeniu.

5- Trikromo tirpalu užtepkite 30 minučių 37 ° C temperatūroje.

6 - Nuplaukite distiliuotu vandeniu.

7- 10 sekundžių spalvos sumažinimas acto rūgštimi.

8- Nuplaukite tepinėlį 30 sekundžių naudodami 95% etanolį.

Kokybės kontrolė

Kaip teigiama kontrolė, tepinėliai yra paruošiami su Mycobacterium tuberculosis ir nudažyti paruoštais reagentais, siekiant patikrinti, ar bakterijos yra tinkamos spalvos (raudonos fuksija).

Neigiami kontroliniai įtaisai taip pat gali būti naudojami ruošiant tepinėlį bet kokiu štamu, kuris nėra atsparus rūgštingam alkoholiui, taip patvirtinant, kad visas mėginys atitinka kontrasto spalvą.

Kinyoun technika lyginant su Ziehl technika -Neelsen

Kinyoun technika yra paprastesnė, nes pašalina šildymo žingsnį, tačiau pagrindinis jo privalumas yra tai, kad jis neleidžia garams, labai toksiškiems ir sukelia vėžį ilgą laiką. Taigi, Kinyoun dažymas yra saugesnis dažymo personalo.

Svarbu atsižvelgti į tai, kad būtina pasirūpinti, kad reagentai nepatektų tiesiogiai prie odos, nes jie yra ėsdinantys ir balinantis yra degus..

Kalbant apie trūkumus, neigiamas tepimas nebūtinai reiškia, kad mikroorganizmas nėra. Be to, ląstelių detrito buvimas gali sukelti klaidingus teigiamus rezultatus, kurie sukelia painiavą diagnozėje.

Nuoroda

  1. Taikomoji klinikinė chemija (2016). „BK Kinyoun Kit“ galima įsigyti adresu: cromakit.es
  2. Orozco-Rico Miguel. Kinyoun dėmės ir du Coccidia ŽIV. Medicinos žurnalas MD. 2011 m. 3 (2): 137
  3. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A (2009). Mikrobiologinė Bailey & Scott diagnozė. 12 red. Argentina Panamericana S.A Redaktorius.
  4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologinė diagnostika. (5-asis red.). Argentina, Redakcijos Panamericana S.A..
  5. Vikipedijos kūrėjai. "Kinyoun dėmė". Vikipedija, „Laisvas enciklopedija“. Wikipedia, „The Free Encyclopedia“, 2018 m. Vasario 8 d. 2019 m. Sausio 5 d.
  6. Combol A, Fernández N, Figueredo E, Acuña A, Zanetta E. Spalvos technikos diegimas tuo pačiu metu diagnozuojant Coccidia ir Microsporidia. Respublikos universiteto Higienos institutas. Montevidėjas. Urugvajus Galima rasti adresu: higiene.edu.uy