Tetrationato sultinio pagrindas, paruošimas ir naudojimas



The tetrationat sultinį arba TT sultinys yra selektyvi skystos kultūros terpė Salmonella padermių sodrinimui ir regeneravimui. Jį sukūrė Müeller ir vėliau jį pakeitė Kauffmann, todėl yra tie, kurie jį vadina Müeller-Kauffmann sultiniu.

Originalioje terpėje buvo proteozės peptonų, kalcio karbonato ir natrio tiosulfato. Kauffmann pridėjo tulžies druskas ir sukūrė kitą modalumą su ryškiai žalia spalva. Šios medžiagos slopina koliforminių bakterijų augimą, palieka laisvą terpę patogeninėms bakterijoms, šiuo atveju Salmonella, augimui..

Modifikacija buvo labai sėkminga, nes žymiai padidino terpės jautrumą. Todėl šiuo metu ji yra naudinga ieškant salmonelių bet kokio tipo mėginyje, bet ypač kietoms ar skystoms išmatoms ir maistui..

Jo paruošimą sudaro dvi fazės; komercinė terpė yra bazė tetrationato sultinio gamybai, o paskui, kad susidarytų tetrationatas, pridedama jodo jodo tirpalo, kad būtų užbaigta terpė..

Amerikos visuomenės sveikatos asociacija (APHA) rekomenduoja naudoti tetrionato sultinį, papildytą ryškiai žalios spalvos, kad būtų praturtinti mėginiai, ieškant salmonelių, nes jis yra selektyvesnis nei tetrationato sultinys ir selenito sultinys.

Apskritai, tetrationato sultinys yra idealus, kai įtariama, kad Salmonella genties bakterijos yra nedideliais kiekiais arba kad jomis piktnaudžiaujama slopinančiomis medžiagomis arba pramoniniais procesais, kurie sumažina jų gyvybingumą..

Indeksas

  • 1 Fondas
  • 2 Paruošimas
    • 2.1 - Tetrationatas
    • 2.2 -Varietiškas tetrationato sultinys su ryškiai žalia spalva
  • 3 Naudokite
  • 4 Kokybės kontrolė
  • 5 rekomendacijos
  • 6 Nuorodos

Fondas

Šie peptonai atitinka kazeino kasos virškinimą ir gyvūnų audinių virškinimą. Tai yra anglies, azoto ir maistinių medžiagų šaltinis bakterijų augimui.

Savo ruožtu natrio tiosulfatas reaguoja su joduoto tirpalu ir sudaro tetrationatą. Tai slopina koliforminių bakterijų augimą ir skatina bakterijų, kuriose yra tetrationato reduktazės, vystymąsi, tarp jų ir Salmonella gentis, bet taip pat ir Proteus..

Tulžies druskos taip pat veikia kaip daugelio gramteigiamų bakterijų ir kai kurių gramneigiamų bakterijų (coliformų) slopinanti medžiaga..

Kalcio karbonatas absorbuoja toksiškas medžiagas, susidariusias susidarius sieros rūgščiai. Šia prasme kalcio karbonatas neutralizuoja rūgštingumą, palaikant stabilios terpės pH.

Ryškiai žalios modalumo atveju ši medžiaga padidina tetrationato sultinio selektyviąją galią, slopindama kitus mikroorganizmus, išskyrus Salmonella gentį..

Paruošimas

-Tetrationate sultinys

Jodo jodo tirpalas

Pasverkite:

  • 6 g jodo.
  • 5 g kalio jodido.

Kalio jodidas yra ištirpinamas maždaug 5 ml sterilaus distiliuoto vandens, tada jodas šiek tiek pridedamas, kai mišinys kaitinamas. Visiškai ištirpus, jis pripildomas steriliu distiliuotu vandeniu, kol pasiekia 20 ml galutinį tūrį.

Pusė bazės tetrationato sultims

Pasverkite 46 g dehidratuotos terpės ir suspenduokite 1 litru sterilaus distiliuoto vandens. Sumaišykite ir pašildykite, kol visiškai ištirps, jis gali virti tik kelias minutes. Negalima sterilizuoti autoklave. Vidutinės terpės bazei leidžiama atvėsti iki maždaug 45 ° C ir tuo metu pridedama 20 ml joduoto tirpalo..

Pridėjus tirpalą, iodurada turi būti naudojama nedelsiant. Jei nenorite naudoti viso mišinio, atlikite šiuos veiksmus:

10 ml bazinės terpės pasiskirsto į mėgintuvėlius, ir tik 0,2 ml joduoto tirpalo pridedama prie mėginių, kurie turi būti inokuliuojami mėginiais..

Tie, kurie nenaudojami, vis dar gali būti laikomi šaldytuve, tačiau, kadangi terpė nėra sterilizuojama, idealas yra paruošti reikiamą kiekį..

Medžiagos spalva prieš pridedant joduoto jodo tirpalo yra pieno baltos spalvos su baltomis nuosėdomis ir pridedant jos yra rudos, su tankiomis nuosėdomis. Nustatytos nuosėdos yra normalios ir atitinka kalcio karbonatą, kuris neištirpsta. Galutinis terpės pH yra 8,4 ± 0,2.

-Tetrationato sultinio variantas su ryškiai žalia spalva

Tetrationato sultinio paruošimui ryškiai žaliai atliekami visi aukščiau aprašyti veiksmai, bet papildomai į mišinį pridedama 10 ml ryškiai žalios spalvos tirpalo, paruošto 0,1%..

Ryškiai žalia

Šis sprendimas paruošiamas taip:

Pasverkite 0,1 g ryškiai žalios spalvos ir suspenduokite 100 ml distiliuoto vandens. Norint visiškai ištirpinti, kaitinkite iki virimo. Išsaugokite gintaro butelyje.

Naudokite

Išmatose (išmatų kultūroje) protokolas yra toks:

Įpilkite 1 g kietos išmatos arba 1 ml skystos išmatos į mėgintuvėlį su 10 ml paruošto naudoti tetrationato sultinio. Stipriai suplakite ir inkubuokite 6–24 valandas aerobioze 43 ° C temperatūroje.

Vėliau paimkite 10–20 μl sultinio alikvotinę dalį ir subkultūruokite ją į selektyviąją salmonelių terpę, pvz., SS agarą, XLD agarą, ryškiai žalia agarą, Hektoen enterinį agarą..

Lygiagrečiai, selektyvi terpė Salmonella turėtų būti inokuliuojama tiesioginiu mėginiu (išmatomis) be sodrinimo. Iš tiesiosios žarnos tamponų mėginiams parsisiųskite į mėgintuvėlį surinktą medžiagą ir tęskite, kaip aprašyta aukščiau.

Maisto mėginiams pasverti 10 g kieto maisto arba 10 ml skysto maisto ir užpilti butelį su 100 ml paruošto naudoti tetrationato sultinio. Vykdykite taip, kaip aprašyta aukščiau, bet inkubuokite 37 ° C temperatūroje.

Kaip matyti, santykis tarp mėginio ir sultinio visada bus 1:10.

Kokybės kontrolė

Norint išbandyti auginimo terpę, gali būti naudojami žinomi kontroliniai kamienai. Dažniausiai naudojami ATCC sertifikuoti padermės.

Naudojamos padermės Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella abony DSM 4224, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Escherichia coli ATCC 25922, Enterococcus faecalis ATCC 19433 ir Staphylococcus aureus ATCC 25923.

Salmonelių padermėms tikimasi puikios raidos Escherichia coli gali turėti silpną arba reguliarų vystymąsi, o gramteigiami kamienai (Enterococcus ir Staphylococcus) yra \ t.

Rekomendacijos

-Kadangi ši terpė neslopina Proteus augimo, kai kurios laboratorijos naudoja 40 mg / l novobiocino, kad užkirstų kelią šios mikrobinės padermės vystymuisi. Prieš joduoto jodo tirpalą reikia pridėti antibiotikų.

-Paruošus terpę, įskaitant joduoto jodo tirpalą, po inokuliacijos jis neturėtų būti ilgesnis kaip 2 valandos.

-Tuo metu, kai terpė paskirstoma mėgintuvėliuose, mišinys turi būti nuolat homogenizuojamas, kad resuspenduotų susidariusias nuosėdas.

-Mažiau užterštuose mėginiuose tetrationato sultinys yra inkubuojamas 35–37 ° C temperatūroje, o labai užterštuose mėginiuose rekomenduojama inkubuoti 43 ° C temperatūroje..

Nuorodos

  1. „Conda Pronadisa“ laboratorija. 2010. Tetrationato sultinio pagrindas pagal Müeller-Kauffmann. Yra:
  2. BD laboratorijos 2003. Tetrationato sultinio bazė. Yra:
  3. Laboratorijos Britanija. 2015. Tetionato sultinio bazė. Yra:
  4. Žiniasklaida BBL. 2005. Vamzdžių preparatai Salmonella rūšių auginimui.
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologinė Bailey & Scott diagnozė. 12 red. Redakcija Panamericana S.A. Argentina.
  6. Flores-Abuxapqui J, Puc-Franco M, Heredia-Navarrete M, Vivas-Rosel M, Franco-Monsreal J. Natrio selenito ir natrio tetrationato kultūrų palyginimas, abu inkubuojami 37 ° C ir 42 ° C temperatūroje. izoliacija Salmonella spp vežimėlių išmatos. Rev Biomed 2003 m. 14 (4): 215-220