Sojos sultinio tripticaseína pagrindas, paruošimas ir naudojimas

The sojos sultinio tripticaseína Tai skystos kultūros terpė, labai maistinga ir neselektyvi. Dėl didelio universalumo jis yra vienas iš plačiausiai naudojamų skystųjų kultūros terpių mikrobiologijos laboratorijoje.

Jis taip pat žinomas kaip sultinis sultinys arba virškintas kazeinas-sojos, kurių santrumpa yra TSB akronimas anglų kalba Tryptic Aš esu Sultinys arba CST už akronimą ispanų kalba. Jo panaudojimas labai skiriasi dėl jo sudėties. Jį sudaro tripteinas, sojos peptonas, natrio chloridas, dikalio fosfatas ir gliukozė.

Jis sugeba atkurti kliniškai svarbias patogenines bakterijas, įskaitant tas, kurios yra mitybos požiūriu reikalingos ir anaerobinės bakterijos. Šioje aplinkoje taip pat gali atsirasti kai kurių oportunistinių grybų ir teršalų.

Dėl savo didelio mitybinės galios jis turi didelį jautrumą mikrobiologiniam užterštumui nustatyti, todėl USDA gyvūnų ir augalų sveikatos inspekcija pasirinko vakcinų mikrobiologinę analizę..

Taip pat trijų stadijų sojos sriuba atitinka įvairių Europos farmakopėjos (Europos Parlamento, Japonijos JP ir Šiaurės Amerikos USP) reikalavimus, skirtus mikrobiologiniams produktams pramonėje, pavyzdžiui, kosmetikoje ir maisto produktuose..

Kita vertus, verta paminėti, kad, nepaisant didelės naudos, ši terpė yra palyginti nebrangi, todėl ji yra prieinama daugumai mikrobiologijos laboratorijų. Taip pat labai lengva paruošti.

Indeksas

• 1 Fondas
• 2 Paruošimas
  • 2.1. Trypticamino sojos pupelės
  • 2.2 - Tripticasein sojos sultinio kariai
• 3 Naudokite
• 4 Sėjamoji
• 5 Kokybės kontrolė
• 6 Apribojimai
• 7 Nuorodos

Fondas

Tripteína, peptonas ir gliukozė suteikia jam esminių maistinių savybių, kad ją paverstų idealia terpe sparčiai mikrobiologinei plėtrai..

Daugelyje mikroorganizmų jau galima pastebėti apie 6–8 valandas inkubacijos. Tačiau yra lėtai augančių padermių, kurios gali trukti ilgą dieną.

Natrio chloridas ir dikalio fosfatas veikia atitinkamai kaip osmosinę pusiausvyrą ir pH reguliatorių. Augimo buvimą patvirtina drumstumo atsiradimas terpėje; jei augimo nėra, terpė lieka permatoma.

Dėl savo šviesios spalvos galima stebėti pigmentų gamybą, pvz., Vaizdą, esantį gaminio pradžioje esančiame paveikslėlyje, kuris atitinka pigmentą, kurį gamina Pseudomonas aeruginosa. 

Paruošimas

-Tryptinis sojos sultinys

Norint paruošti trijų stadijų sojos sultinį, pasverkite 30 g dehidratuotos komercinės terpės skaitmeninėje skalėje. Tada jis ištirpsta litre distiliuoto vandens, esančio fiola.

Mišiniui leidžiama stovėti 5 minutes ir po to patenka į šilumos šaltinį, kad būtų lengviau ištirpinti terpę. Jis turi būti dažnai purtomas virinant 1 minutę.

Ištirpus, jis prireikus paskirstomas atitinkamo dydžio vamzdeliuose. Galima naudoti vamzdelius su medvilniniu kamščiu arba bakelito dangteliais. Vėliau mėgintuvėliai sterilizuojami terpėje autoklave 15 ° C temperatūroje 15 minučių.

Terpės pH turi būti 7,3 ± 0,2

Turėtų būti atsižvelgta į tai, kad dehidratuotos kultūros terpė yra šviesiai smėlio spalvos ir turi būti laikoma sausoje vietoje 10–35 ° C temperatūroje. Paruoštas sultinys yra lengvas gintaras ir turi būti laikomas šaldytuve (2–8 ° C)..

-Tripticasein sojos sultinio variacijos

Trypticamino modifikuotas sojos sultinys gali būti ruošiamas pridedant tulžies druskas ir novobiociną, kad jis būtų selektyvus izoliuojant E. coli. Kitas būdas tam pačiam tikslui yra paruošti sojos sultinio triptazę, papildytą vankomicinu, cefiksimu ir teluritu (2,5 μg / ml)..

Kita vertus, į triptikazino sojos sultinį gali būti pridėta daugiau gliukozės (0,25%), kai siekiama skatinti biofilmų susidarymą..

Naudokite

Tai pakankamai maistinga, kad būtų galima augti reiklias ar erzinančias bakterijas, pvz Streptococcus pneumoniae, Streptococcus sp ir Brucella sp, nereikia papildyti kraujo ar serumo.

Be to, šiame sultinyje gali išsivystyti kai kurie grybai, pvz „Candida albicans“ kompleksas, Aspergillus sp e Histoplasma capsulatum.

Be to, ši terpė anaerobinėmis sąlygomis idealiai tinka bakterijų, priklausančių Clostridium genties, ir anaerobinių, nesporuluotų klinikinės reikšmės bakterijų regeneravimui..

Jei Enterococcus ir kitų D ​​grupės Streptococcus augimui pridedama 6,5% natrio chlorido.

Mokslinių tyrimų lygmeniu jis buvo labai naudingas įvairiuose protokoluose, ypač tiriant bakterijas, kurios sudaro biofilmus ar biofilmus. Jis taip pat naudojamas 0,5% Mac Farland bakterijų suspensijai paruošti, reikalingą antibiotikai Kirby ir Bauer metodu atlikti.

Šiuo atveju paimamos 3–5 panašios išvaizdos kolonijos ir emulsuojamos 4-5 ml trypticasein sojos sultinio. Tada jis inkubuojamas 2–6 valandas 35-37 ° C temperatūroje ir po to sureguliuojamas į norimą koncentraciją steriliu fiziologiniu tirpalu. Tryptikazės sojos sultiniai neturėtų būti naudojami 18–24 valandų inkubacijai.

Pasėtas

Mėginys gali būti sėjamas tiesiogiai arba subkultūruotas grynos kolonijos, paimtos iš selektyvios terpės. Inokuliatas turi būti nedidelis, kad prieš inkubaciją terpė nebūtų užteršta.

Paprastai 24 valandas inkubuojama aerobioze 37 ° C temperatūroje, tačiau šios sąlygos gali skirtis priklausomai nuo norimo mikroorganizmo. Jei reikia, jį galima inkubuoti ir anaerobinėmis sąlygomis 37 ° C temperatūroje. Pavyzdžiui, sunkiuose ar lėtai augančiuose mikroorganizmuose galima inkubuoti iki 7 dienų.

Mikrobiologinė farmacinių medžiagų analizė, kaip ir vakcinos, yra griežtesni. Tokiais atvejais sultinys be augimo neišmestas tol, kol nepasiekia 14 dienų nepertraukiamo inkubavimo.

Kokybės kontrolė

Kiekvienai paruoštai partijai 1 arba 2 mėgintuvėliai turėtų būti inkubuojami be inokuliacijos, kad būtų rodomas sterilumas. Jis turi likti nepakitęs.

Be to, galite įvertinti žinomus padermes, kad įvertintumėte jų elgesį. Tarp jų gali būti:

Aspergillus brasiliensis ATCC 1604, Candida albicans ATCC 10231, Bacillus subtilis ATCC 6633, Staphylococcus aureus ATCC 6538 arba 25923, Escherichia coli ATCC 8739,  Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Salmonella typhimurium ATCC 14028.

Visais atvejais augimas turi atitikti atmosferos ir temperatūros sąlygas, tinkamas kiekvienam mikroorganizmui.

Apribojimai

-Gliukozės fermentacija sukelia terpės pH sumažėjimą rūgštims gaminti. Tai gali būti nepalanki kai kurių rūgštingumui jautrių mikroorganizmų išlikimui.

-Jis nerekomenduojamas štamų palaikymui, nes be rūgštingumo bakterijos po kelių dienų išeikvoja maistines medžiagas ir sukaupia toksiškas medžiagas, kurios daro aplinką nepalankiomis.

-Būtina rūpintis visų sterilumo protokolų priežiūra, nes sultiniai yra lengvai užteršti.

-Paruošus tripticasein sojos sultinius, nesistenkite sultinio pernešti į kitą sterilų mėgintuvėlį, nes šio tipo manevrai yra labai pažeidžiami užteršimo metu..

Nuorodos

1. Cona E. Geros jautrumo tyrimo su agaro difuzijos bandymu sąlygos. Rev. Chil. infektolis 2002 m. 19 (2): 77-81. Galima rasti adresu: scielo.org
2. Britų laboratorija Tryteino sojos sultinys. 2015 m. Galima rasti adresu: britanialab.com
3. MCD laboratorija. Trytica sojos sultinys. Galima rasti adresu: electronic-systems.com
4. Neogeninė laboratorija. Sojų sultinio triptikas. Pateikiama adresu: foodsafety.neogen.com
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologinė Bailey & Scott diagnozė. 12 red. Redakcija Panamericana S.A. Argentina.
6. Rojas T, Vásquez Y, Reyes D, Martínez C, Medina L. Magnetinio imunoseparacijos metodo įvertinimas, siekiant atgauti \ t Escherichia coli O157: H7 pieno kremuose. ALAN. 2006 m. 56 (3): 257-264. Galima rasti adresu: scielo.org.ve
7. Gil M, Merchán K, Quevedo G, Sánchez A, Nicita G, Rojas T, Sánchez J, Finol M. Biofilm formavimas izoliuotuose Staphylococcus aureus atsižvelgiant į jautrumą antimikrobinėms medžiagoms ir klinikinę kilmę. Vitae 2015 m. 62 (1): 1-8. Galima rasti adresu: saber.ucv.ve
8. Narváez-Bravo C, Carruyo-Núñez G, Moreno M, Rodas-González A, Hoet A, Wittum T. Escherichia coli O157: H7 dvigubos paskirties galvijų mėginiuose iš Mirandos savivaldybės, Zulijos valstijos, Venesuelos. Rev. Cient. (Maracaibo), 2007; 17 (3): 239-245. Galima rasti adresu: scielo.org