Selenito sultinio pagrindas, paruošimas ir naudojimas



The selenito sultinys Ji yra selektyvi skystos kultūros terpė. Jis buvo suprojektuotas Leifsono mėginiams praturtinti, jei įtariamas Salmonella genties enteropatogeninių bakterijų buvimas..

Ši terpė atitinka Amerikos visuomenės sveikatos asociacijos (APHA) reikalavimus ir todėl yra priimta tiriant Salmonelių buvimą išmatose, šlapime, skystuose ar kietuose maisto produktuose, vandens..

Cheminė sudėtis, kurią ji turi, skatina šių mikroorganizmų atsigavimą ir savo ruožtu slopina kitų augimą. Tai daugiausia toksiška daugumai bakterijų, priklausančių Enterobacteriaceae šeimai. Tačiau jis taip pat leidžia atgauti Shigella padermes ir neslopina Pseudomonas ir Proteus augimo..

Jį sudaro bevandenis natrio vandenilio selenitas, bevandenis natrio fosfatas, peptonai ir laktozė. Taip pat yra variantas, prie kurio pridedama cistino, todėl jos pavadinimas yra selenito-cistino sultinys.

Šiuo metu pirmenybė teikiama selenito-cistino sultinio naudojimui, nes gaunama didesnė salmonelių regeneracijos procentinė dalis, lygiavertė tai, kuri buvo pastebėta su kitomis selektyviomis terpėmis, turinčiomis tą patį tikslą, pvz., Tetrationato natrio sultinys..

Indeksas

  • 1 Fondas
  • 2 Paruošimas
    • 2.1 - Selena
    • 2.2. Komercinės terpės paruošimas
    • 2.3 Variantas selenito-cistino sultinys
  • 3 Naudojimas
  • 4 Sėjamoji
  • 5 Kokybės kontrolė
  • 6 Apribojimai
  • 7 Nuorodos

Fondas

Sultinyje esantys peptonai tarnauja kaip maistinės medžiagos tinkamam mikroorganizmų vystymuisi. Salmonelių padermės naudoja peptonus kaip azoto, vitaminų ir amino rūgščių šaltinį.

Laktozė yra fermentuojantis angliavandenis, o natrio selenitas yra slopinanti medžiaga, kuri lėtina gramteigiamų bakterijų ir daugumos bakterijų, esančių žarnyno floroje, ypač Enterobacteriaceae šeimos, augimą. Natrio fosfatas yra buferis, stabilizuojantis terpės pH.

Jei selenito sultinio variantas yra L-cistinas, šis papildomas junginys yra redukuojantis agentas, kuris sumažina selenito toksiškumą, padidindamas salmonelių atgavimą..

Paruošimas

-Selenito sultinys

Jei turite mišinio komponentus, galite pasverti:

4 g bevandenio natrio vandenilio selenito.

10 g bevandenio natrio fosfato.

5 g peptono.

4 g laktozės.

Ištirpinkite junginius 1 litru sterilaus distiliuoto vandens. Jis gali būti šiek tiek šildomas, kad visiškai ištirptų.

Kai kurios laboratorijos 10 min. Terpei palieka laisvai garą, kad jį sterilizuotų, nes negalima naudoti autoklavo. Jei terpė sterilizuojama, ją galima laikyti šaldytuve, kol ji bus naudojama.

Jis taip pat gali būti paruoštas be sterilizavimo ir tiesiogiai į 10–15 ml sterilių mėgintuvėlių.

Tokiu atveju jis turi būti paliktas pailsėti ir naudoti nedelsiant. Kadangi terpė nėra sterili, ji negali būti laikoma šaldytuve vėlesniam naudojimui.

-Komercinės terpės paruošimas

Jei yra komercinė terpė, pasveriama 23 g dehidratuotos terpės ir ištirpinama vieno litro sterilaus distiliuoto vandens. Trumpai pašildykite, kad baigtumėte tirpinimą. Negalima sterilizuoti autoklave. Steriliuose mėgintuvėliuose tarnauti aseptiškai 10 arba 15 ml.

Galutinis terpės pH turi būti 7,0 ± 0,2.

Pažymėtina, kad dehidratuotos terpės spalva yra smėlio ir preparatas yra skaidrus ir permatomas gintaras.

Selenito-cistino sultinio variantas

Jame yra tie patys selenito sultinio junginiai, tačiau pridedama 10 mg cistino. Likusi procedūra yra tokia pati, kaip aprašyta aukščiau.

Naudojimas

Ši terpė yra ypatinga, kad ją būtų galima naudoti epidemiologiniuose tyrimuose, kai liga nėra jos ūminėje stadijoje, besimptomiems pacientams ar sveikiems nešiotojams.

Salmonelių genties izoliavimas paprastai yra sunkus, nes paprastai nustatoma, kad jie retai užteršia mėginius. Nedideliais kiekiais lengvai persidengia kitų bakterijų, kurios randamos didesniame kiekyje, augimas.

Kita vertus, žaliava, su kuria perdirbami maisto produktai, dažnai susiduria su šiluma, dehidratacijos procesais, dezinfekavimo priemonių, radiacijos ir konservantų naudojimu..

Todėl žaliavoje esančios Salmoneliozės yra blogai elgiamasi, kai produktas pateikiamas pirmiau minėtiems pramonės procesams. Panašiai klinikinių mėginių, pvz., Išmatų, atveju, štamai gali būti silpni, jei jie yra iš pacientų, gydytų antibiotikais..

Todėl bet koks mėginys, kuriame įtariama, kad yra salmonelių, turi būti iš anksto praturtintas laktozės sultiniu, o vėliau praturtintas selenitiniu sultiniu, siekiant optimizuoti jo atsigavimą selektyvioje terpėje, pvz., SS agare, ksilozės agare, lizino dezoksikolate (XLD). ), be kita ko, enterinis Hektoen agaras (HE) ir žalias šviesus agaras.

Pasėtas

Išmatose paimkite 1 g mėginio ir suspenduokite į mėgintuvėlį su 10–15 ml selenito sultinio. Jei išmatos yra skystos, paimkite 1 ml ir suspenduokite į sultinį. Iš tiesiosios žarnos tamponams išpilkite tampono medžiagą į sultinį.

Kietų maisto produktų mėginiuose paimkite 1 gr ir sustabdykite selenito sultinį.

Skystuose maisto produktuose lygiomis dalimis sumaišykite selenito sultinį dvigubai koncentruojant.

Šlapimo mėginiams centrifuguoti, supernatantą išmeskite, paimkite visas nuosėdas ir suspenduokite jį į selenito sultinį.

Sultiniai inkubuojami 37 ° C temperatūroje 24 valandas inkubuojant. Bakterijų augimą patvirtina drumstumas. Taip pat galima įtraukti papildomą mėgintuvėlį mėginiui, kad būtų inkubuojamas 42 ° C temperatūroje. Vėliau sėjamos selektyviosios terpės sėjamos iš selenito sultinio.

Kokybės kontrolė

Siekiant kontroliuoti sterilumą, kiekvienos partijos selenito sultinys be inokuliacijos inkubuojamas 37 ° C temperatūroje 24 valandas. Tikimasi, kad nėra drumstumo ar terpės spalvos.

Siekiant kontroliuoti gerą terpės veikimą, gali būti naudojami žinomi kamienai, tokie kaip:

Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028,  Salmonella choleraesuis ATCC 12011, Escherichia coli ATCC 25922 ir Proteus mirabilis ATCC 43071.

Laukiami rezultatai:

  • Pirmiesiems trims bakterijų kamienams augimas turi būti patenkinamas.
  • Į Escherichia coli dalinis slopinimas.
  • Dėl Proteus vidutinio augimo.

Apribojimai

Vidutinis selenito sultinys yra toksiškas žmogaus odai, todėl reikia vengti tiesioginio kontakto.

Nuorodos

  1. Flores-Abuxapqui J, Puc-Franco M, Heredia-Navarrete M, Vivas-Rosel M, Franco-Monsreal J. Natrio selenito ir natrio tetrationato kultūrų palyginimas, abu inkubuojami 37 ° C ir 42 ° C temperatūroje. izoliacija Salmonella vežėjų išmatos išmatose. Rev Biomed 2003 m. 14 (4): 215-220
  2. Laboratorijos Britanija. Selenito Caldo. 2015 m. Galima rasti adresu: britanialab.com
  3. Neogen Laboratories Selenito sultinys Pateikiama adresu: foodsafety.neogen.com
  4. González -Pedraza J, Pereira-Sanandres N, Soto -Valela Z, Hernández-Aguirre E, Villarreal- Camacho J. Salmonella spp. ir molekuliniai įrankiai jo aptikimui. Sveikata, Barankilja 2014; 30 (1): 73-94. Pateikiama adresu: http://www.scielo.org.
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologinė Bailey & Scott diagnozė. 12 red. Redakcija Panamericana S.A. Argentina.