EB sultinio pagrindas, paruošimas ir naudojimas



The EB sultinys arba sultinio Escherichia coli Ji yra selektyvi skystos kultūros terpė. Šią terpę rekomenduoja bendri ir išmatų koliformų skaičiavimo standartiniai metodai, naudojant labiausiai tikėtiną vandens ir maisto mėginių skaičių (NMP), kai pagrindinis dalyvis yra Escherichia coli.

EB sultinį sudaro tripteinas, laktozė, tulžies druskos, dikalio fosfatas, monokalio fosfatas, natrio chloridas ir vanduo. Jo formulė yra strategiškai sukurta siekiant skatinti bendrą ir išmatų koliformų augimą ir užkirsti kelią kitų lydinčių mikroorganizmų vystymuisi..

Bakterija Escherichia coli yra pagrindinė išmatų koliforminė forma, esanti kaip teršalas vandenyje ir maisto šaltiniuose, sukelianti svarbius virškinimo trakto sutrikimus..

Pažymėtina, kad yra daug serotipų Escherchia coli; tarp jų galime paminėti enterohemoraginį (EHEC), enteroinvasyvų (EIEC), enteropatogeninį (EPEC), enterotoksigeninį (ETEC) ir enteroaggregantą (EAEK)..

Tai reiškia, kad turi gebėjimą vystyti visus, bet nesugebėdamas atskirti jų. Tam reikia atlikti papildomus bandymus.

Mikrobiologinis vandens ir maisto tyrimas pagal labiausiai tikėtiną skaičių (NMP) visuotinių ir išmatų koliforminių ląstelių paieškai yra protokolas, kuris atitinka kelis etapus; fazės patvirtinimo fazė ir užbaigimo etapas. EB sultinys naudojamas patvirtinimo fazėje.

Indeksas

  • 1 Fondas
    • 1.1 EB sultinys
    • 1.2 EB sultinys, modifikuotas novobiocinu
  • 2 Paruošimas
    • 2.1 EB sultinys
    • 2.2 EB sultinys, modifikuotas su novobiocinu
  • 3 Naudokite
    • 3.1 Iš viso ir išmatų koliformų analizė
  • 4 Kokybės kontrolė
  • 5 rekomendacijos
  • 6 Nuorodos

Fondas

EB sultinys

EB terpė yra pagrįsta būtinų mitybinių elementų, skirtų optimaliam viso ir išmatų koliformų vystymuisi, kai bakterija yra įtraukta. Escherichia coli.

Šiuos mitybos elementus teikia tripteinas, kuris yra puikus peptidų ir aminorūgščių šaltinis. Be to, jame taip pat yra laktozės, fermentuojamo angliavandenio, kuris suteikia energijos ir leidžia parodyti, ar bakterijos gamina dujas.

Kita vertus, terpėje yra tulžies druskų, kurios suteikia selektyvų pobūdį, nes slopina gramteigiamų mikroorganizmų, kurie gali būti mėginyje, augimą..

Dipalio fosfatas ir monokalio fosfatas taip pat veikia kaip pH balansavimo sistema. Ši sistema yra būtina, nes sultinyje esanti laktozė linkusi rūgštinti terpę, kai ji fermentuojama mikroorganizmais, tačiau tai kompensuojama fosfato druskomis.

Todėl šie elementai yra būtini, nes nekontroliuojamas rūgštingumas gali paveikti tinkamą mikroorganizmų vystymąsi.

Savo ruožtu, natrio chloridas stabilizuoja terpę osmotiškai, o vanduo yra tirpiklių tirpiklis ir užtikrina skysčio nuoseklumą terpėje..

EB sultinys, modifikuotas su novobiocinu

Okrend ir Rose sukūrė įvairius EB sultinius, vadinamus EB sultiniu, modifikuotu novobiocinu. Modifikacija susideda iš tulžies druskų koncentracijos sumažinimo ir 20 mg / dl novobiocino pridėjimo.

Šis pakeitimas skatina. \ T Escherichia coli enterohemoraginė (O157: H7).

Šis bakterinis serotipas sukelia sunkų hemoraginį kolitą, kuris gali sukelti hemolizinį ureminį sindromą (HUS); o tai savo ruožtu gali sukelti ūminį inkstų nepakankamumą, turintį didelį mirtingumą, kuris vyresnio amžiaus žmonėms gali siekti iki 50%.

Dėl ligos ir mirtingumo, kurį ši bakterija kasmet sukelia dėl užteršto maisto vartojimo, Jungtinių Valstijų žemės ūkio departamentas (USDA) plačiai rekomenduoja naudoti šias priemones.

Paruošimas

EB sultinys

Pasverkite 37,4 g dehidratuotos terpės ir ištirpinkite 1 litru distiliuoto vandens. Mišinys turėtų likti 5 minutes. Vėliau, šilumos šaltinyje, ištirpinkite dažnai tirpstant.

Ištirpus, jis pasiskirsto mėgintuvėliuose, kurie anksčiau buvo kondicionuoti Durham vamzdeliu. Sterilizuokite autoklave 121 ° C temperatūroje 15 minučių.

Terpės pH turi būti 6,9 ± 0,2. Dehidratuotos terpės spalva yra smėlio ir paruošta šviesiai gintare.

Vynai laikomi šaldytuve, kol jie bus naudojami. Naudojimo metu sultiniai turi būti kambario temperatūroje.

Kita vertus, EB sultinys taip pat gali būti ruošiamas dvigubai koncentruojant.

EB sultinys, modifikuotas su novobiocinu

Pasverkite 36,7 g dehidratuotos terpės ir ištirpinkite 1 litru vandens. Likusi preparato dalis yra tokia pati, kaip aprašyta aukščiau.

Naudokite

Bendrų ir išmatų koliformų analizė

EB sultinys idealiai tinka patvirtinančiam koliformų tyrimo etapui pagal NMP metodą, tiek vandens mėginiuose, tiek farmaciniuose produktuose ir maisto produktuose..

Lazy drumstas ir dujų gamybos sultinys, gautas įtariamoje fazėje, turėtų būti atnaujintas 2% ryškiai žaliosios tulžies ir EB sultinio..

Bendrosioms koliforminėms ląstelėms EB sultiniai inkubuojami aerobioze 24–48 valandas 37 ° C temperatūroje, o išmatų koliforminėms ląstelėms jie inkubuojami 24–48 valandas aerobioze 44 ° C temperatūroje..

Abiem atvejais jis aiškinamas taip: drumstieji vamzdžiai su dujų gamyba laikomi teigiamais. Jei per 24 valandas nėra dujų susidarymo, inkubacija tęsiama iki 48 valandų.

EB teigiami sultiniai patenka į visą patvirtinamąją fazę, kuri susideda iš pakartotinio atsodinimo selektyvioje terpėje, pvz., „Mac Conkey“ agare, EMB agare arba Endo agare..

Jei naudojamas sultinys yra EB modifikuotas su novobiocinu, rekomenduojama teigiamus mėgintuvėlius pakartoti ant Mac Conkey agaro su sorbitu..

Kokybės kontrolė

Kokybės kontrolė turi būti atliekama kiekvienai paruoštos terpės partijai. Pirma, reikia įvertinti terpės sterilumą. Šiuo atveju vienas ar du sultiniai inkubuojami be inokuliavimo aerobioze 24 valandas 37 ° C temperatūroje. Numatomas rezultatas yra skaidrus sultinys, be drumstumo ar spalvos pokyčių.

Antra, reikia įvertinti žinomų padermių augimą, kuriam gali būti naudojamos šios bakterijos: Escherichia coli, ATCC 8739, Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella typhimurium ATCC 14028.

Visais atvejais tikimasi patenkinamo mikrobiologinio vystymosi, stebint drumstą sultinį su dujų gamyba E. coli ir be dujų Salmonella.

Kiti štamai, kuriuos galima įtraukti į kontrolę, yra: Staphylococcus aureus ATCC 25923, Enterococcus faecalis ATCC 29212. Šie kamienai turi būti visiškai slopinami.

Rekomendacijos

-„Durham“ vamzdžių išdėstymas yra būtinas koliformų tyrimams.

-Prieš sterilizavimą, niekada po to paskirstykite terpę mėgintuvėliuose.

-Nenaudoti, jei terpėje yra daugiau kaip 3 mėnesiai.

-Nenaudokite, jei pasikeičia įprastos terpės savybės.

Nuorodos

  1. Laboratorijos Britanija. EB terpė. 2015 m. Galima rasti adresu: britanialab.com
  2. E. coli enterohemoraginė. Maisto saugos ir visuomenės sveikatos centras. 2010 m. Galima rasti adresu: cfsph.iastate.edu
  3. Neogen Corporation. Vidutinė EB. Pateikiama adresu: foodsafety.neogen.com
  4. Neogenas Vidutinė EB modifikuota su novobiocinu. Pateikiama adresu: foodsafety.neogen.com
  5. Jure M, Condorí S, Leotta G, Chinen I, Miliwebsky E, Allori C, Aulet O, Castillo M. Escherichia coli „Shiga“ toksino gamintojas iš šviežių maltos jautienos iš mėsinių parduotuvių Concepción, Tucumán provincijoje. Rev Microgol by Arg; 2010, 42 (4): 284-287. Galima rasti adresu: www.scielo.org.