Fondas laktosado sultinys, paruošimas ir naudojimas



The laktozės sultinys yra skysta, neselektyvi auginimo terpė, naudojama daugiausia kaip sodrinimo terpė Salmonella padermių išskyrimui iš mikrobiologinių tyrimų, atliktų su perdirbtais maisto produktais, pieno produktais ar vandeniu. Tai rekomenduoja Tarptautinė maisto produktų mikrobiologinių specifikacijų komisija (ICMPF)..

Terpėje yra fermentinių želatinos, mėsos ekstrakto ir laktozės virškinimo medžiagų, būtinų bakterijų augimui. Be to, laktozė yra fermentuojantis angliavandenis, todėl kai kurios koliforminės formos gali padalyti jį su dujų gamyba.

Dėl šios priežasties Amerikos visuomenės sveikatos asociacija (APHA) rekomenduoja laktozės sultinį, kad būtų galima tirti visas ir išmatuotas koliformines bakterijas, ir tai laikoma puikia alternatyva laurilo sulfato triptozės sultinio pakeitimui standartiniu metodu, kuris yra labiausiai tikėtinas skaičius (NMP). ), naudojami maisto, pieno ir paviršinio vandens, požeminių, pramoginių, buitinių ir pramoninių atliekų mėginių mikrobiologinei analizei.

Indeksas

  • 1 Fondas
  • 2 Paruošimas
  • 3 Naudojimas
    • 3.1. Išankstinis sodrinimas
    • 3.2 Iš viso ir išmatų koliformų analizė
  • 4 Medijos kokybės kontrolė
  • 5 Nuorodos

Fondas

Mikrobiologinei kai kurių mėginių analizei būtinas išankstinio sodrinimo etapas, kad būtų galima atgauti tam tikrą mikroorganizmą, kuris gali būti labai mažas arba nepalankiomis sąlygomis, kurios pažeidžia arba sumažina jo gyvybingumą.

Taip yra sausų ir perdirbtų maisto produktų atveju, kurie gali būti užteršti Salmonellas sp. Tokiais atvejais, jei bakterijos yra, jos gamybos proceso metu patyrė fizinį ir cheminį netinkamą elgesį..

Tokiu būdu, kad mikroorganizmai yra veikiami nepalankių veiksnių, pvz., Dehidratacijos, slopinamųjų ar toksiškų produktų poveikio, ir kitų bakterijų buvimo, be kita ko, persidengimo..

Šia prasme laktozės sultinys turi pataisomą poveikį sugadintoms mikroorganizmų struktūroms, todėl jis gali atkurti ir daugintis taip, kad jį galima aptikti.

Taip pat laktozės sultinys sugeba atskiesti slopinančias medžiagas, kurios gali turėti įtakos jo gyvybingumui, leidžiant jo vystymuisi. Be to, maistinė laktozės sultinio sudėtis yra strateginė, skatinant augimą Salmonella sp virš kitų mikroorganizmų.

Galutiniam identifikavimui ji turi būti subkultivuota į kitas galutinių pasėlių rūšis.

Kita vertus, terpės sudėtis taip pat leidžia aptikti laktozės fermentuojančius mikroorganizmus, kurie gamina dujas.

Paruošimas

Norint paruošti vieną litrą laktozės sultinio, pasverkite 13 gramų dehidratuotos terpės ir ištirpinkite 1000 ml distiliuoto vandens..

Norėdami padėti ištirpinti terpę vandenyje, galite šiek tiek šildyti tirpalą, bet ne per daug..

Vienarūšis tirpalas paruošiamas taip: jei sultinys naudojamas koliforminėms ląstelėms ieškoti, paruošiamas stovas su mėgintuvėliais, o Durham fermentacijos vamzdelis įdedamas į apačią.

„Durham“ vamzdelis yra labai svarbi detalė, nes ji leis aptikti dujų susidarymą, vertingus duomenis ieškant koliforminių bakterijų..

Kai vamzdžiai yra paruošti, į juos įpilama 10 ml laktozės sultinio, kuris turi būti pakankamas visam Durham mėgintuvėliui padengti..

Jei laktozės sultinys bus naudojamas kaip priešpriešinimo sultinys, nebūtina įdėti Durham fermentacijos mėgintuvėlio. Tokiu atveju reikia didesnio kiekio terpės (225 ml), kuris bus patiekiamas 500 ml buteliuose, plačiu burnu ir termiškai atspariu varžtu.

Vėliau mėgintuvėliai arba kolbos perkeliami į autoklave 121 ° C temperatūroje 15 minučių.

25 ° C temperatūroje terpė turėtų likti galutiniame pH 6,9 ± 0,2.

Vynai laikomi šaldytuve, kol jie bus naudojami.

Prieš naudojimą sultiniai turi būti grūdinami kambario temperatūroje.

Kita vertus, laktozės sultinys taip pat gali būti paruoštas dvigubai koncentracijai.

Kai kurios laboratorijos į laktozės sultinį prideda bromkresolio purpurą kaip pH rodiklį, kad būtų rodomi vamzdžiai, kuriuose spalvos pasikeitimas buvo laktozės fermentacija. Šiuo atveju sultinio spalva yra violetinė, o fermentacija tampa geltona.

Naudojimas

Mikrobiologijos laboratorijose laktozės sultinys plačiai naudojamas kaip palyginti nebrangi terpė, kuri suteikia patikimus ir greitus rezultatus (24–48 val.).

Jis gali būti naudojamas analizuojant bendrą ir išmatuotą koliforminę formą vandenyje ir maiste arba kaip salmonelių priešpriešinimo sultinį..

Išankstinis sodrinimas

Išankstinis sodrinimas yra žingsnis prieš mėginio sodrinimą, kuris labai pagerina Salmonella genties bakterijų perdirbimą perdirbtuose maisto produktuose..

Norėdami tai padaryti, kieto maisto mėginys (25 gramai) arba skystis (25 ml) yra sėjamos į 225 ml laktozės sultinio ir inkubuojama 24–48 valandas. Vėliau selenito cistino sultinys arba tetrationato sultinys subkultūruojamas sodrintoje terpėje. Tada jis pereina į atrankinę laikmeną XLD ir SS.

Bendrų ir išmatų koliformų analizė

Tai puiki priemonė kaip išmatų užteršimo rodiklis.

Todėl laktozės sultinys idealiai tinka įtariamam koliforminio tyrimo etapui pagal labiausiai tikėtiną skaičių metodą.

Mėginiams, kuriuose įtariama daug coliformų, bus inokuliuojama mažesnis kiekis koliformų (1 ml), o mėginiams, kuriuose įtariamas mažesnis koliformų kiekis, inokuliuojama daugiau mėginių (10 ml)..

Analizei atlikti 10 skiedimų-1, 10-2, 10-3, suformuoti 3-5 vamzdžių bateriją kiekvienai naudojamai koncentracijai.

Iš kiekvieno praskiedimo tas pats tūris sėjamas į laktozės sultinius.

Vamzdžiai inkubuojami 24 valandas. Neigiami sultiniai inkubuojami dar 24 valandas.

Rezultatų aiškinimas atliekamas laikantis dviejų savybių: pirmasis yra drumstumo buvimas arba nebuvimas ir kadangi šioje terpėje nėra pH indikatoriaus, spalvos nekeičiama..

Antrasis yra dujų gamyba arba ne. Dujos lengvai matomos Durhamo vamzdyje, atsiradus vienai ar daugiau oro burbuliukų.

Manoma, kad teigiama, jei pastebimos abi savybės, ty drumstumas su dujų gamyba. Teigiami mėgintuvėliai turėtų būti pakartotinai įterpti į patvirtinamąją terpę (sultinio Brilliant Green 2% tulžies ir EB sultinio).

Medijos kokybės kontrolė

- Ruošiant terpę svarbu nepamiršti, kad „Durhams“ mėgintuvėlius būtų galima įdėti, jei to paties tikslo yra koliformų tyrimas..

- Prieš sterilizuojant, nešildykite terpės.

- Prieš sterilizavimą bandymo mėgintuvėliuose paskirstykite niekada.

- Nenaudoti, jei terpėje yra daugiau kaip 3 mėnesiai.

- Nenaudokite, jei pastebite, kad pasikeitė įprastos terpės savybės.

- Ruošiant laktozės sultinio partiją, patikrinkite jo kokybę pasodinus veisles, žinomas kaip Escherichia coli, Enterobacter aerogenes , Citrobacter freundii ir Klebsiella pneumoniae. Jie auga labai gerai, gaminant dujas (teigiama kontrolė).

- Ji taip pat gali apimti Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhimurium o Enterococcus faecalis, gerai auga, bet be dujų gamybos (neigiama kontrolė).

- Pažymėtina, kad dehidratuotos terpės pradinė spalva yra smėlio spalvos, o vidutinė - labai aiški ir skaidri geltona. Jei pasikeičia spalva ar išvaizda, gali pablogėti tas pats.

Nuorodos

  1. Acevedo R, Severiche C, Castillo M. Biologija ir aplinkos mikrobiologija. (2013) 1-asis leidimas. Kartageno universitetas, Kolumbija.
  2. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B ir Velázquez O. (2009). Maisto mikrobiologinės analizės metodai. 2nd ed. Chemijos fakultetas, UNAM. Meksika.
  3. Laboratorijos Conda Pronadisa. 2017 m. Laktozės sultinio koncentracija (European Pharm.)
  4. Fernández-Rendón C, Barrera-Escorcia G. Koliforminių bakterijų iš Xochimilco, Meksikos ežerų nuosėdų ekstrahavimo metodų palyginimas. Rev. mikrobiolis.  2013 m .; 45 (3): 180-184. Galima rasti adresu: scielo.org.
  5. Sotomayor F, Villagra V, Cristaldo G, Silva L, Ibáñez L. Centrinės, Cordillera ir Sostinės savivaldybės departamentų artezinių šulinių vandenų mikrobiologinės kokybės nustatymas. Mem. Inst. Investig. Cienc. Sveikata 2013 m .; 11 (1): 5-14. Galima gauti iš: scielo.iics.