„Vogel-Johnson Agar“ pamatai, paruošimas ir naudojimas



The „Vogel-Johnson“ agaras yra kieta, selektyvi ir diferencinė kultūros terpė, specialiai sukurta izoliacijai Staphylococcus aureus. Šią terpę 1960 m. Sukūrė Vogelis ir Johnsonas iš 1955 m. Zebovicko, Evano ir Niveno glicino tellūrito agaro modifikavimo..

Modifikacija susideda iš terpėje esančios manitolio koncentracijos didinimo ir pH indikatoriaus įtraukimo. Dabartinę formulę sudaro tripteinas, mielių ekstraktas, manitolis, dikalio fosfatas, ličio chloridas, glicinas, fenolio raudonasis, agaras, 1% kalio tellūrito tirpalas ir vanduo..

Pažymėtina, kad yra ir kitų priemonių, kurios, kaip ir Vogel-Johnson agaras, yra selektyvios S. aureus, tokie kaip sūdyta manitolio agaras ir Baird Parker agaras. Šia prasme galima teigti, kad „Vogel-Johnson“ agaro pamatas yra sūraus manitolio agaro ir Baird Parker agaro mišinys..

Pirmajame S. aureus Jie išskiriami fermentuojant manitolį ir sukant pH indikatorių į geltoną. Kita vertus, antrajame S. aureus jis pasižymi sumažinančiu telurito kiekį į tellūrą ir formuojant pilkos arba juodos kolonijos. Abi savybės pastebimos Vogel-Johnson agare.

Ši terpė, kaip ir jos kolegos, yra naudinga aptikti Staphylococcus aureus maisto produktų mėginiuose, pramoninių produktų sanitarinėje kontrolėje ir klinikiniuose mėginiuose.

Indeksas

  • 1 Fondas
    • 1.1 Maistinių medžiagų indėlis
    • 1.2 Atrankinė galia
    • 1.3 Diferencinė galia
    • 1.4 Osmosinė pusiausvyra ir kietėjimas
  • 2 Paruošimas
    • 2,1 1% m / t kalio tellūrito tirpalas
    • 2.2 „Vogel-Johnson“ agaro bazinė terpė
  • 3 Naudokite
  • 4 Kokybės kontrolė
  • 5 Nuorodos

Fondas

Maistinių medžiagų indėlis

Vogel-Johnson terpėje yra tripteino ir mielių ekstrakto; abi medžiagos suteikia ilgos grandinės aminorūgštis, kurios tarnauja kaip anglies ir azoto šaltiniai, būtini bakterijų augimui. Bakterijos, galinčios augti šioje terpėje, paims šių medžiagų maistines medžiagas.

Atrankinė galia

„Vogel-Johnson“ agaras gali slopinti gramneigiamų bakterijų ir netgi kai kurių gramteigiamų bakterijų augimą, skatinant teigiamą koagulazės stafilokokų vystymąsi. Slopinančios medžiagos yra kalio teluritas, ličio chloridas ir glicinas.

Diferencinė galia

Medžiagos, dėl kurių ši diferencinė terpė yra, yra manitolis ir kalio telluras. Manitolis yra angliavandeniai, o fermentuojant, susidaro rūgštys, kurios paverčia terpę iš raudonos į geltoną, o tai vyksta dėl fenolio raudonojo pH indikatoriaus..

Nors bespalvis telluritas, kai jis sumažinamas iki metalo laisvojo telurido, tampa tamsiai pilkos arba juodos spalvos.

The Staphylococcus aureus manitolį ir sumažina teluritą į tellūrą. Štai kodėl tipinės Europos kolonijos S. aureus šioje terpėje jie yra pilki arba juodi, apsupti geltonos terpės.

Bakterijos, kurios auga šioje terpėje ir nesumažina telurito ar fermentinio manitolio, sudarys permatomas kolonijas, apsuptas raudonos terpės, dar intensyvesnės už pradinę spalvą, dėl to, kad terpė šarminama naudojant peptonus..

Kita vertus, bakterijos, mažinančios teluritą, bet ne fermentuodamos manitolį, augs kaip pilkos arba juodos kolonijos, apsuptos giliai raudonos spalvos.

Jei terpė buvo paruošta be kalio tellūrito,. \ T S. aureus jie išsivystytų kaip geltonos kolonijos, apsuptos geltonos terpės, pavyzdžiui, sūraus manitolio agaro.

Osmosinis balansas ir kietėjimo agentas

Dikalio fosfatas palaiko terpės osmotinę pusiausvyrą ir reguliuoja pH iki neutralumo 7.2. Nors agaras suteikia kietą konsistenciją auginimo terpei.

Paruošimas

1% kalio tellūrito tirpalas, t

Šis tirpalas nėra įtrauktas į dehidratuotą terpę, nes jis negali būti sterilizuojamas autoklave. Dėl šios priežasties ji gaminama atskirai ir pridedama prie sterilizuotos terpės.

Kai kurie komerciniai namai parduoda paruoštą naudoti 1% kalio tellūrito tirpalą. Jei norite paruošti laboratorijoje, atlikite šiuos veiksmus:

Pasverkite 1,0 g kalio tellūrito ir išmatuokite 100 ml distiliuoto vandens. Kalio teluritą ištirpinkite vandenyje ir tada užpildykite vandens kiekį, kol pasieksite 100 ml. Tirpalas sterilizuojamas filtravimo metodu.

„Vogel-Johnson“ agaro bazinė terpė

Pasverkite 60 g dehidratuotos terpės ir ištirpinkite 1 litru distiliuoto vandens. Mišinys kaitinamas iki virimo, kad būtų visiškai ištirpintas. Tirpinimo proceso metu terpė dažnai maišoma.

Sterilizuokite autoklave 15 minučių slėgio ir 121 ° C temperatūroje 15 minučių. Išimkite iš autoklavo ir palikite stovėti, kol terpė pasiekia maždaug 45–50 ° C temperatūrą. Įpilkite 20 ml anksčiau paruošto kalio tellūrito tirpalo iki 1%.

Sumaišykite ir supilkite į sterilius Petri lėkšteles. Leiskite sukietėti ir pasukti atvirkščiai, kad vėliau būtų galima laikyti šaldytuve iki naudojimo.

Galutinis paruoštos terpės pH turi būti 7,2 ± 0,2.

Prieš pasodinant mėginį, palaukite, kol plokštelė užims aplinkos temperatūrą.

Paruoštos terpės spalva yra raudona.

Naudokite

Nors jis gali būti naudojamas izoliuoti S. aureus bet kokio tipo mėginiuose jis dažniausiai naudojamas farmacijos produktų, kosmetikos ir maisto mikrobiologinei analizei.

Rekomenduojama, kad inokuliatas būtų tankus. Sėklą galima atlikti naudojant platinos rankenėlę arba paviršių su Drigalski mentele.

Plokštelės inkubuojamos 35-37 ° C temperatūroje 24–48 valandas aerobioze.

Kokybės kontrolė

Norint atlikti Vogel-Johnson terpės kokybės kontrolę, galima naudoti šiuos kontrolinius padermes:

Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 arba Proteus mirabilis ATCC 43071.

Tikėtinas rezultatas yra toks:. \ T S. aureus Patenkinamas augimas juodomis kolonijomis, apsupta geltonos terpės. Į S. epidermidis reguliariai auga su permatomomis arba juodomis kolonijomis, apsupta raudonos terpės.

Taip pat E. coli tikimasi, kad bus visiškas slopinimas Proteus mirabilis dalinis arba visiškas slopinimas; jei jis auga, tai darys taupiai ir kolonijos bus juodos, apsuptos vidutinio raudonos spalvos.

Nuorodos

  1. BD laboratorijos. VJ (Vogel ir Johnson Agar). 2006 m
  2. Laboratorijos Britanija. Vogel - Johnson Agar. 2015 m. Galima rasti adresu: britanialab.com
  3. Laboratorijos Britanija. Kalio tellūritas. 2015 m
  4. „Himedia Laboratory“. „Vogel- Johnson Agar Medium“. 2018. Galima rasti adresu: himedialabs.com/TD/MU023.pdf
  5. „Vogel-Johnson“ agaro bazė. „Merck“ mikrobiologijos vadovas. 12-asis leidimas, p. 502-503. Yra: Vartotojai / Komandos / Atsisiuntimai
  6. „Wikipédia“ dalyviai, „Ágar Vogel Jonhson“, Wikipédia į enciklopedinį gyvenimą,   disponível em: wikipedia.org.
  7. Venesuelos standartas Covenin 1292-89. (1989). Maistas Izoliacija ir skaičiavimas Staphylococcus aureus. Yra:sencamer.gob.ve