Ryškiai žalios agaro pamatai, paruošimas ir naudojimas



The ryškiai žalia agaras tai yra kieta kultūros terpė, turinti didelį selektyvumą. Jis naudojamas išskirtinai Salmonella genties padermėms išskirti, tačiau yra tam tikrų išimčių, pvz., Typhi ir paratyphi rūšys, kurios nesaugo šioje terpėje.

Salmonella genties paieška dažnai atliekama išmatų, vandens ar maisto mėginiuose. Šia prasme ši terpė gali būti labai naudinga. Šį agarą 1925 m. Sukūrė Kristensenas, Lesteris ir Jurgensas, vėliau modifikavę Kauffmann.

Jį sudaro pluripeptonas, gaunamas iš gyvūnų audinių virškinimo ir kazeino virškinimo, taip pat yra mielių ekstraktas, natrio chloridas, laktozė, sacharozė, fenolio raudonas, ryškiai žalios ir agaro agaras..

Jam būdinga tai, kad ji yra labai nepalanki daugelio bakterijų terpė, skatinanti salmonelių augimą, tačiau kai kurios koliforminės bakterijos gali pasilikti jame, vystosi silpnai.

Svarbu pabrėžti, kad šioje terpėje Shigella gentis neišauga ir nei viena Salmonella typhimurium, ni Salmonella paratyphi. Todėl, jei pageidaujama išskirti šiuos mikroorganizmus, reikia naudoti kitas priemones, pvz., XLD agarą..

Indeksas

  • 1 Fondas
    • 1.1 Ryškiai žalia agaras
    • 1.2 Ryškios žalia agaro (BGA) variantai
  • 2 Paruošimas
  • 3 Naudojimas / taikymas
  • 4 Kokybės kontrolė
  • 5 Nuorodos

Fondas

Ryškiai žalia agaras

Kiekvienas komponentas, sudarantis terpę, turi specifinę funkciją, kuri lemia agaro savybes ir savybes.

Pluripeptonas ir mielių ekstraktas yra maistinių medžiagų šaltinis, iš kurių mikroorganizmai ima azoto ir mineralų, reikalingų jų vystymuisi. Laktozė ir sacharozė yra mikroorganizmų, galinčių jas fermentuoti, energijos šaltiniai.

Ryškiai žalios spalvos yra slopinanti medžiaga, neleidžianti kurti gramteigiamų bakterijų ir daugelio gramnegatyvių mikroorganizmų.

Natrio chloridas užtikrina osmotinį stabilumą terpėje. Fenolio raudonas yra pH rodiklis, o spalvos atsiranda, kai aptinkama rūgščių, susidarančių fermentuojant angliavandenius, gamyba.

Neraukingos laktozės ir sacharozės kolonijos auga šioje baltos spalvos, rausvos arba skaidrios, raudoname fone. Pavyzdžiui, Salmonella genties bakterijos.

Laktozės fermentacijos bakterijos ar sacharozė, galinčios augti šioje terpėje, gelsvai geltonos arba žalsvai geltonos spalvos kolonijos išsiskiria geltonai žalios spalvos fone. Pavyzdžiui, Escherichia coli ir Klebsiella pneumoniae.

Ryškiai žalios agaro (BGA) variantai

Yra ir kitų ryškiai žalios agaro variantų; novobiocino žaliosios agaro gliukozės (NBG) ir novobiocino agaro ryškiai žalia glicerolio laktozė (NBGL).

Novobiocino agaro ryškiai žalia gliukozė (NBG)

Sudėtyje yra triptazės sojos agaro, geležies amonio citrato, natrio tiosulfato pentahidrato, fenolio raudono, gliukozės, ryškiai žalios, novobiocino ir distiliuoto vandens..

Tarnauja salmonelių kolonijų išskyrimui iš išmatų mėginių.

Šiuo atveju ryškiai žalios ir novobiocinas yra slopinančios medžiagos, kurios užkerta kelią gramteigiamų bakterijų ir kai kurių Gram neigiamų mikroorganizmų augimui..

Natrio tiosulfatas yra sieros šaltinis, o geležies šaltinis yra geležies citratas, būtinas vandenilio sulfido susidarymui, susidarant juodam geležies sulfido nuosėdoms..

Gliukozė yra fermentuojantis angliavandenis, o fenolio raudonas yra pH rodiklis.

Šioje terpėje salmonelių kolonijos išsivysto dideliu juodos spalvos centru, apsuptu rausva halo, o po to seka aiški matoma zona. Kai kurie. \ T Citrobacter freundii gaminti kolonijas, tapačias Salmonella.

Ryškiai žalios novobiocino agaro glicerolio laktozė (NBGL)

Šioje terpėje yra triptazės sojos agaro, geležies amonio citrato, natrio tiosulfato, laktozės, glicerolio, ryškiai žalios, novobiocino ir distiliuoto vandens..

Šios terpės skirtumas su ankstesniu yra tas, kad gliukozė pakeičiama laktoze, o glicerolis ir fenolio raudonasis kiekis nenaudojamas.

Ši terpė taip pat naudojama Salmonella rūšims izoliuoti, kolonijoms atsiranda juoda, gaminant vandenilio sulfidą.

H gamybą pasiekia tik kolonijos, kurios nesukuria rūgšties iš glicerolio arba laktozės2Pakanka, nes žemas pH trukdo susidaryti H2S. Tai sukelia bespalvių kolonijų daugumai Proteus ir Citrobacter rūšių.

Paruošimas

-Pasverkite 58 g komerciniu būdu gautos dehidratuotos terpės. Įdėkite jį į litrą dvigubai distiliuoto vandens. Sumaišykite, palikite keletą minučių stovėti ir paruošite preparatą į šilumos šaltinį, kol jis visiškai ištirps.

-Autoklave 121 ° C temperatūroje 15 minučių neviršija sterilizavimo laiko.

-Palikite stovėti ir karštuose steriliuose Petri lėkštelėse. Galutinis pH turėtų būti 6,9 ± 0,2.

-Leiskite kietėti ir laikyti šaldytuve iki naudojimo. Prieš sodinant plokštes reikia kambario temperatūros.

-Miltelių terpė yra žalia ir pasiruošusi priimti oranžinės-rudos arba rausvai žalios spalvos, priklausomai nuo pH ir komercinio namo. Labai ruda spalva rodo, kad agaras buvo perkaitintas.

-Kai agaras yra sukietėjęs, nerekomenduojama iš naujo išdėstyti, nes terpė pablogėja.

Naudojimas / taikymas

Ši terpė yra naudojama Salmonella genties kamienų paieškai iš kitų išmatų ir pieno produktų..

Kadangi tai yra gana nepalanki aplinka, rekomenduojama sodinti gausų inokuliaciją, jei naudojamas tiesioginis mėginys. Priešingu atveju, prieš sodinant šioje terpėje, mėginiai turi būti praturtinti ir sodrinti.

Kadangi kai kurie salmonelių kamienai yra slopinami arba auga sunkiai, patartina šią terpę lydėti su kitais selektyviais agarais Salmonella..

Visoms kolonijoms, turinčioms būdingą Salmonella, turi būti atliekami biocheminiai bandymai, kad būtų galima juos identifikuoti.

Kokybės kontrolė

Norint išbandyti, ar gerai veikia ryškiai žaliosios agaro terpės, ATCC padermės gali būti naudojamos stebėti tos pačios raidos atsiradimą..

Dažniausiai naudojami kokybės kontrolei naudojami štamai: Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Proteus mirabilis ATCC 43071, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Escherichia coli ATCC 25922,  Shigella flexneri ATCC 12022, Staphylococcus aureus ATCC 6538.

Pirmieji 3 turi suteikti rausvos arba skaidrios baltos kolonijos raudoname fone. Salmonella su gera plėtra ir „Proteus“ su retais arba reguliariais augimais.

Klebsiella ir Escherichia yra geltonos geltonos spalvos geltonos spalvos kolonijos su Shigella ir Staphylococcus..

Dehidratuota terpė turi būti laikoma kambario temperatūroje, sausoje vietoje, nes terpė yra labai higroskopiška.

Nuorodos

  1. Difco Francisco Soria Melguizo laboratorija S.A. Brilliant Green Agar. 2009 m
  2. Britų laboratorija Ryškus žalias agaras. 2015 m.
  3. BD laboratorija. BD Brilliant Green Agar. 2013 m.
  4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologinė diagnostika. (5-asis red.). Argentina, Redakcijos Panamericana S.A..
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Bailey & Scott mikrobiologinė diagnozė. 12 red. Argentina Panamericana S.A Redaktorius