Agaro TSS pamatas, paruošimas ir naudojimas



The TSS agaras arba geležies trigubo cukraus agaras yra kieta kultivavimo terpė, kuri tarnauja kaip biocheminis tyrimas, kuriuo vadovaujamasi nustatant pirminius gram-neigiamus bacilius. Jis pagrįstas esančių cukrų fermentacijos įrodymu ir vandenilio sulfido bei dujų gamyba.

Jo sudėtis ir pamatas labai panašus į Kligler geležies testą, skirtingai tuo, kad pastarasis turi tik gliukozę ir laktozę. Vietoj to, kaip rodo pavadinimas, trijų geležies geležies sudėtyje yra trys fermentuojami angliavandeniai: gliukozė, laktozė ir sacharozė..

Be to, TSI terpėje yra keturi baltymų dariniai, dėl kurių jis yra labai maistingas agaras: mielių ekstraktas, mėsos ekstraktas, peptono ir proteozės peptonas. Jame taip pat yra geležies amonio sulfato, natrio tiosulfato, natrio chlorido, fenolio raudono ir agaro.

Mikroorganizmo nesugebėjimas fermentuoti terpėje esančią gliukozę nedelsiant jį išskiria iš Enterobacteriaceae šeimos. Taigi, šis bandymas yra būtinas norint nuspręsti, kokiu identifikavimo būdu reikia nustatyti genus ir rūšis.

Kiekviena laboratorija nusprendžia, ar ji veikia su TSI agaru ar Kligler agaru.

Indeksas

  • 1 Fondas
    • 1.1 Natrio chloridas ir agaras
    • 1.2 pH indikatorius (fenolio raudonas)
    • 1.3 Baltymų dariniai (mielių ekstraktas, mėsos ekstraktas, peptonas ir proteozės peptonas)
    • 1.4 Angliavandenių fermentacija (gliukozė, laktozė ir sacharozė)
    • 1.5 Dujų gamyba
    • 1.6 Natrio tiosulfatas ir geležies amonio sulfatas (vandenilio sulfido gamyba) \ t
  • 2 Paruošimas
  • 3 Naudojimas
  • 4 Sėjamoji
  • 5 Apribojimai
  • 6 Nuorodos

Fondas

Kiekvienas iš junginių vykdo funkciją terpėje.

Natrio chloridas ir agaras

Natrio chloridas yra būtinas norint išlaikyti terpės osmotinę pusiausvyrą. Nors agaras suteikia kietą konsistenciją.

PH indikatorius (fenolio raudonas)

Paruoštos terpės pH yra subalansuotas iki 7,3, o pH indikatorius (fenolio raudonas) tampa geltonas žemiau 6.8. Tai reiškia, kad nedideli rūgščių kiekiai, susidarę fermentuojant cukrus, paverčia terpę nuo raudonos oranžinės iki geltonos spalvos.

Jei fermentacija nevyksta, terpė bus šarminta naudojant peptonus, nuo raudonos oranžinės iki stiprios raudonos.

Baltymų dariniai (mielių ekstraktas, mėsos ekstraktas, peptonas ir proteozės peptonas)

Kai bakterijos metabolizuoja TSI agare esančius baltymus, gaunami aminai, kurie šarminia terpę (daugiausia lygiagrečiai), nes reakcijai reikia deguonies. Aminai paverčia sluoksnį į stiprų raudoną.

Tačiau tai priklausys nuo bakterijų gebėjimo fermentuoti angliavandenius.

Angliavandenių fermentacija (gliukozė, laktozė ir sacharozė)

Cukraus fermentacijos tyrimas gali suteikti kelis vaizdus ir kiekvienas iš jų interpretuojamas skirtingai. Bandymo aiškinimas skirsto mikroorganizmus į tris kategorijas: ne gliukozės fermentus, ne laktozės fermentus ir laktozės / sacharozės fermentus.

Pažymėtina, kad gliukozės kiekis terpėje yra ribotas, o laktozės ir sacharozės koncentracija yra 10 kartų didesnė..

Enterobakterijų šeimos ir kitų gliukozės fermentuojančių mikroorganizmų bakterijos pradės fermentuoti šį cukrų, nes tai yra paprasčiausias angliavandenių kiekis energijai..

Kita vertus, laktozė ir sacharozė yra sudėtingi angliavandeniai, kurie turi būti suskirstyti ir konvertuoti į gliukozę, kad jie galėtų patekti į Embden-Meyerhof ciklą.

-Fermentiniai gliukozės mikroorganizmai

Kai inokuliuotas mikroorganizmas negali fermentuoti gliukozės, daug mažiau gali fermentuoti kitus angliavandenius. Todėl čia nėra rūgščių susidarymo, tačiau dėl peptonų naudojimo yra kūgio amino.

Tokiu atveju kūgis virsta stipresne raudona spalva, o vamzdžio apačia gali likti nepakitusi arba gali būti šarminta, paliekant visą raudoną vamzdelį.

Aiškinimas: K / K reiškia šarminį arba šarminį foną

Straipsnio pradžioje esančiame paveikslėlyje žr. Vamzdžio D vaizdą.

Šis rezultatas rodo, kad mikroorganizmas nepriklauso Enterobacteriaceae šeimai.

-Fermentiniai laktozės / sacharozės mikroorganizmai

Jei bakterijos gali fermentuoti gliukozę, bet ne laktozę ar sacharozę, taip atsitiks:

Bakterija suvartos visą gliukozę, esančią po maždaug 6–8 valandų, ir gali rūgštinti tiek kūgį, tiek taco; tai reiškia, kad agaras bus visiškai geltonas. Tačiau, kai gliukozė yra išeikvota ir nesugeba naudoti laktozės ir sacharozės, bakterijos pradės baltymų apykaitą.

Šiai reakcijai reikia deguonies, todėl peptonų skilimas atsiranda ant paviršiaus (bevel). Aminai gamina sluoksnį sluoksnį, sukdami geltoną arba raudoną. Ši reakcija pasireiškia nuo 18 iki 24 valandų inkubacijos.

Aiškinimas: K / A reiškia šarminį ir rūgštinį taco.

Straipsnio pradžioje esančiame paveikslėlyje žr. Vamzdžio B vaizdą.

-Laktozės / sacharozės fermentuojantys mikroorganizmai

Akivaizdu, kad gliukozę gali fermentuoti mikroorganizmai, galintys fermentuoti laktozę ir sacharozę. Po to, kai terpėje yra mažiausias gliukozės kiekis, susidaręs piruvatas pradeda metabolizuotis, susidarant rūgštims per Krebso aerobinį ciklą, o nuo 8 iki 12 valandų visa terpė bus geltona.

Jei bakterijos gali suskaidyti laktozę arba sacharozę, rūgštys ir toliau bus gaminamos, o po 18–24 valandų visas vamzdis - snapelis ir taco - išliks geltonos.

Pažymėtina, kad gliukozės naudojimas atliekamas dviem būdais: vienas aerobinės formos vamzdžio kampe, o kitas anaerobiškai vamzdžio apačioje..

Aiškinimas: A / A reiškia rūgšties kūgį / rūgštinę dugną. Jis gali pateikti dujas arba ne.

Straipsnio pradžioje esančiame paveikslėlyje žr. Vamzdžio A vaizdą.

Dujų gamyba

Kai kurie mikroorganizmai gali gaminti dujas cukraus fermentacijos metu. Dujos parodo vamzdyje slėgį, kurį jis daro agaro viduje. Slėgis sukelia burbulų susidarymą arba agaro išstūmimą. Kartais dujų susidarymas gali suskaidyti terpę.

Svarbu, kad TSI terpės sėjimo metu punkcija būtų švariai padaryta agaro centre, kol pasiekia dugną. Jei punkcija nukreipiama į vamzdžio sienas, tai gali sukelti klaidingus teigiamus dujų gamybos procesus, nes ji išeis per netinkamai suformuotą kanalą.

Dujų gamybai, taip pat reakcijoms, atsirandančioms agaro kūgyje, reikia deguonies, todėl rekomenduojama, kad vamzdis būtų padengtas medvilniniu kištuku, o jei naudojamas bakelio dangtelis, jis neturėtų būti visiškai reguliuojamas.

Dujų gamyba pateikiama kaip teigiama (+) arba neigiama (-).

Natrio tiosulfatas ir geležies amonio sulfatas (vandenilio sulfido gamyba) \ t

Bakterijos, galinčios gaminti vandenilio sulfidą (bespalvės dujos), paima natrio tiosulfato sierą. Kai H susidaro2S reaguoja su geležies amonio sulfatu, gamindamas geležies sulfidą (aiškiai matomos juodos nuosėdos).

H gamyba2S yra teigiamas (+) arba neigiamas (-).

Straipsnio pradžioje esančiame paveikslėlyje žr. Vamzdžio C vaizdą.

Paruošimas

Pasverkite 62,5 g dehidratuoto trigubo cukraus (TSI) agaro ir ištirpinkite vienu litru distiliuoto vandens.

Įkaitinkite, kol agaras visiškai ištirps. Kepkite dažnai maišydami. Paskirstykite 4 ml terpės į 13/100 mėgintuvėlių su medvilniniu dangteliu.

Sterilizuokite autoklave 121 ° C temperatūroje 15 minučių. Išimkite iš autoklavo ir leiskite pailsėti linkę. Būtina pasirūpinti, kad ir pagrindo, ir rėmelio atstumas būtų vienodas.

Laikyti šaldytuve 2-8 ° C. Prieš pasodindami bakterijų štamą, leiskite nudeginti.

Dehidratuotos terpės spalva yra šviesiai smėlio ir paruošta terpė yra raudona-oranžinė

Galutinis paruoštos terpės pH yra 7,3 ± 0,2.

Naudojimas

TSS bandymas plačiai naudojamas mikrobiologijos laboratorijos lygiu. Šis bandymas yra būtinas norint nustatyti, kokio tipo bandymas turi būti taikomas siekiant nustatyti gentį ir rūšis. Jo geras vykdymas ir aiškinimas gali sutaupyti medžiagos ir darbo.

Jei rezultatas yra TSS K / K, o citochromo oksidazės testas yra teigiamas, yra žinoma, kad bandymai turi būti naudojami nustatant nefermentuojančius gramnegatyvius bacilius, tokius kaip Pseudomonas, Alcaligen, Achromobacter, Burkholderia, be kitų genčių. Jei tai yra neigiama oksidazė, ji orientuota į Acinetobacter, Stenotrophomonas ir kt..

Kita vertus, jei gaunama TSS A / A arba K / A, o citochromo oksidazės testas yra neigiamas, tuo daugiau nitratų sumažėja iki nitritų, tikimės, kad tai yra Enterobacteriaceae šeimos mikroorganizmas. Šiuo atveju identifikavimo maršrutas bus orientuotas į specifinius šios bakterijų grupės tyrimus.

Kita vertus, jei gaunamas K / A arba A / A vaizdas, o citochromo oksidazės testas yra teigiamas, papildomi bandymai, kuriuos reikia atlikti, bus nukreipti į fermentuojančių padermių, kurios nepriklauso Enterobacteriaceae šeimai, identifikavimą, pavyzdžiui: Aeromonas, Plesiomonas, Vibrio ir Pasteurella.

TSS su vandenilio sulfidu, neigiama oksidaze, padės nustatyti toliau nurodytas Enterobacteriaceae šeimos gentis: Proteus, Citrobacter, Edwardsiella, Leminorella, Pragia, Trabusiella arba Salmonella.

TSS, turinčios ribotą arba vidutinį vandenilio sulfidą šarminėje kūgyje su šarminėmis dugnomis ir teigiamą oksidazę, leis naudoti bandymus, skirtus identifikuoti gramnegatyvius, nefermentuojančius bacilius, gaminančius H2S, pvz Shewanella putrefaciens.

Galiausiai, TSS galima naudoti vandenilio sulfido gamybai gramteigiamose bacilose, ypač kai įtariama Erysipelotrix rhusiopathiae.

Pasėtas

TSI terpė turi būti užkrėsta grynomis kolonijomis, izoliuotomis pirminėse arba selektyviose kultūrose. Jei kolonija yra paimta iš selektyvios terpės, kurios buvo sėjamos su mišrios floros mėginiais, reikia pasirūpinti, kad būtų paimtas tik paviršius, nes kolonijos apatinėje dalyje gali būti gyvybingų padermių, slopinančių tą terpę.

Todėl kilpa niekada neturėtų būti aušinama selektyvioje terpėje, kad būtų galima paimti koloniją ir inokuliuoti TSI terpę.

Sodinimas bus atliekamas tiesia kilpa ar adata. Bus padaryta punkcija, užtikrinanti, kad ji būtų per vidurį, kol pasiekia dugną, o po to pasodinimas baigiamas užklijuoti paviršių zigzaginiu būdu. Nedarykite dviejų skylių.

Inkubuokite aerobioze 37 ° C temperatūroje 18–24 valandas. Šiuo metu interpretuokite, nei prieš, nei po.

Apribojimai

TSS bandymas turėtų būti skaitomas nuo 18 iki 24 valandų inkubacijos. Skaitymas prieš šį laiką gali suteikti klaidingą teigiamą fermentaciją A / A. Kadangi skaitymas po šio laiko gali sukelti netikro neigiamo nefermento įvaizdį, nes vartojama peptonai, kurie šarminina terpę.

Nuorodos

  1. Mac Faddin J. (2003). Biocheminiai klinikinės reikšmės bakterijų identifikavimo tyrimai. 3-asis red. Redakcinė Panamericana. Buenos Airės Argentina.
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologinė Bailey & Scott diagnozė. 12 red. Redakcija Panamericana S.A. Argentina.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologinė diagnostika. 5th ed. Redakcija Panamericana S.A. Argentina.
  4. "TSI agaras". Vikipedija, laisva enciklopedija. 2018 m. Liepos 10 d., 08:09 UTC. 10 vasaris 2019, 03:33 Galima rasti adresu: en.wikipedia.org
  5. Laboratorijos Britanija. TSS agaras (trigubo cukraus geležies agaras). 2015 m. Galima rasti adresu: britanialab.com
  6. BD laboratorijos Trigubas cukraus geležies agaras (TSI agaras). 2003. Galima: bd.com