Agar Thayer Martin pamatas, paruošimas ir naudojimas



The Thayer Martin agaras Tai labai maistinga ir selektyvi kieta terpė Neisseria meningitidis ir Neisseria gonorrhoeae; abu žinomi kaip patogeniniai arba kliniškai svarbūs Neisseria.

Vienas iš svarbiausių Thayer Martin agaro ypatybių yra didelis maisto papildų kiekis. Ši savybė yra būtina, nes „Neisserias“ yra labai reikalingi mikroorganizmai iš mitybos požiūriu, todėl jie nesaugo bendrojoje terpėje.

Be to, nes šie mikroorganizmai yra paprastai randama nonsterile sričių pridedant inhibitoriai išvengti kitos floros, būtina augimui, nepaveikiant genties Neisseria plėtrą.

Šį agarą sudaro GC bazinis agaras, hemoglobinas, papildomi maisto papildai ir slopinamųjų medžiagų kompleksas (antibiotikai ir priešgrybeliniai). Komerciniai namai parduoda kiekvieną priedą atskirai.

Mėginys, kuris bus sodinamas šioje terpėje, priklausys nuo tiriamo mikroorganizmo. Į Neisseria gonorrhoeae Idealūs mėginiai yra makšties ir šlaplės išskyros. Nors Neisseria meningitidis dažniausiai naudojami mėginiai yra CSF, ryklės ir nosies niežulys.

Indeksas

  • 1 Fondas
    • 1,1 GC bazinis agaras
    • 1.2 Hemoglobinas
    • 1.3 Sodrinimo priedas
    • 1.4 inhibitoriai
  • 2 Paruošimas
    • 2.1 Originalus Thayer Martin Agar
    • 2.2 Agar Thayer Martin modifikuotas
  • 3 Naudokite
  • 4 Kokybės kontrolė
  • 5 Apribojimai
  • 6 Nuorodos

Fondas

Neizerijos yra mikroorganizmai, klasifikuojami kaip baisūs, todėl jų izoliavimas yra sunkus. Dėl šios priežasties „Thayer Martín“ yra sudėtinga terpė ir kiekviena jos sudedamoji dalis atlieka funkciją, kuri paaiškinta toliau:

GC branduolio agaras

GC agare yra proteozės peptonas, kukurūzų krakmolas, natrio chloridas, dikalio fosfatas, monokalio fosfatas ir agaro agaras. Jo sudedamosios dalys suteikia pagrindines maistines medžiagas mikrobiologiniam vystymuisi, neutralizuoja nuodingas riebalų rūgštis, padeda išlaikyti osmosinį balansą, apibrėžia pH ir užtikrina tvirtą nuoseklumą aplinkai..

Hemoglobinas

Hemoglobinas turi faktorių V ir X (atitinkamai nikotinamido adenino dinukleotidas NAD ir hemin). Todėl šioje aplinkoje taip pat auga Haemophilus rūšys. Hemoglobiną galima gauti komerciškai dehidratuota forma arba šviežią defibrinuotą galvijų kraują galima pridėti prie terpės.

Praturtinimo priedas

Kita vertus, į Thayer-Martin terpę reikia pridėti sodrinimo priedą, nes bazinės agaro esančios maistinės medžiagos nepakanka Neisseria genties reikalavimams..

Dažniausiai naudojamas praturtinimo priedas vadinamas isovitalex. Jame yra glutamino, adenino, NAD, kokarboksilazės, guanino, geležies nitrato, p-amino benzenkarboksirūgšties, vitamino B12, tiamino ir gliukozės. Visi šie junginiai yra būtini tinkamam patogeninių Neisseria vystymuisi.

Inhibitoriai

Kadangi tai yra labai maistinga terpė, inhibitoriai turi būti naudojami siekiant užkirsti kelią mikroorganizmų augimui įprastoje vietovės floroje ir taip skatinti Neisseria genties izoliaciją..

Inhibitorius kompleksas yra sudarytas iš vankomicinui, kolistinui ir nistatinas. Vankomicino slopina gramteigiamų bakterijų augimo, kolistinas apsaugo nuo gramneigiamų bakterijų, tokių kaip Pseudomonas ir kai saprofito Neisseria vystymąsi, ir nistatinas veikia kaip mielių Candida albicans.

Tačiau Thayer Martin agaras buvo modifikuotas; pokyčius sudarė trimetoprimo pridėjimas, agaro kiekio padidėjimas ir papildomo gliukozės pridėjimas. Šie pokyčiai gerokai pagerino rūšių, kurioms būdingas augimas, atsigavimą. \ T Neisseria gonorrhoeae.

Pažymėtina, kad trimetoprimas slopina Proteus genties augimą ir dėl jo atsiradimą. Šia prasme antibiotikai suteikia selektyvų pobūdį vidutiniam Thayer Martin.

Paruošimas

Originalus Thayer Martin Agar

-GC agaras

Pasverkite 8,2 g dehidratuotos GC terpės ir suspenduokite 100 ml. Sumaišykite ir virkite 1 minutę, dažnai maišant, kad ištirptų visas. Sterilizuokite mišinį autoklave 121 ° C temperatūroje 15 minučių.

-2% hemoglobino

2 g dehidratuoto hemoglobino suspenduojama 2 arba 3 ml karšto distiliuoto vandens, kad susidarytų vienodas mišinys. Įpilkite truputį daugiau vandens, kad užpildytumėte 100 ml tūrio. Prieš sterilizavimą suspensija turi būti vienoda.

Sterilizuokite autoklave 15 minučių.

-Praturtinimo priedas

Atnaujinkite komercinį kelią su to paties komercinio namo pateiktu skiedikliu. Gerai išmaišykite. Naudojamo skiediklio kiekis bus nurodytas rinkinio instrukcijose..

-Slopinimo priedas V.C.N (vankomicinas, kolistinas, nistatinas)

Ištirpinkite buteliuką su komercinio namo pateiktu skiedikliu. Gerai išmaišykite. Naudojamo skiediklio kiekis bus nurodytas rinkinio instrukcijose..

-Paruošta

Kiekvienam 100 ml GC agaro atliekamas taip:

Kai išeina iš autoklavo GC agaro, leidžiama atvėsti iki 50 ° C temperatūroje, o pridedant 2 ml hemoglobino tirpalo, paruošto, papildymas 2 ml sodrinimo (isobitalex arba britalex), ir 2 ml papildų slopinimui. Sumaišoma ir supilti į sterilius Petri lėkštelių.

Leiskite kietėti ir laikyti šaldytuve iki naudojimo.

Paruoštos terpės spalva yra vyšnių raudona. Galutinis terpės pH yra 7,2 ± 0,2

Modifikuotas Thayer Martin Agar

Pasverkite 8,2 g dehidratuotos GC terpės ir suspenduokite 100 ml. Įpilama 1 g agaro ir įpilama 0,3 g gliukozės. Sumaišykite ir virkite 1 minutę, dažnai maišant, kad ištirptų visas. Sterilizuokite mišinį autoklave 121 ° C temperatūroje 15 minučių.

Paruoškite hemoglobino ir sodrinimo priedą, kaip aprašyta aukščiau.

Naudojamas slopinimo priedas yra V.C.N.T (vankomicinas, kolistinas, nistatinas, trimetoprimas)..

-Paruošta

Atlikite taip, kaip aprašyta originaliame Thayer Martin agare.

Naudokite

Prieš sėjant bandinius, Thayer Martin agarą reikia grūdinti. Dažniausiai naudojami mėginiai yra ryklės eksudatai, nosies eksudatai, makšties, šlaplės ir (arba) tiesiosios žarnos sekrecija ir CSF..

Naudokite šviežiai paimtus mėginius ir ant agaro padarykite stiprius inokulius. Mėginiai sėjami tiesiai iš medžiagų išleidimo, o paskui juos išstumiami ant paviršiaus.

Plokštelės inkubuojamos 35-37 ° C temperatūroje 24–48 valandas mikroaerofiniame indelyje (5% CO2). Inkubacijos periodo pabaigoje plokštės yra tiriamos mažų, pilkų ir kartais gleivių panašių kolonijų..

Gramos ir patvirtinamuosius biocheminius tyrimus atlikti įtartinoms kolonijoms.

Kokybės kontrolė

Norint atlikti Thayer Martin agaro kokybės kontrolę, galima naudoti šiuos mikrobų kamienus.

Neisseria gonorrhoeae ATCC 49226 ir Neisseria meningitidis ATCC 13090; abiejose padermėse tikėtinas vystymasis.

Taip pat reikėtų įtraukti šiuos padermes: Staphylococcus epidermidis ATCC 14990, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus mirabilis ATCC 43071 ir Candida albicans ATCC 10231. Visose šiose terpėse tikimasi visiškai arba iš dalies slopinti.

Apribojimai

-Reikia nepamiršti, kad bakterijos, kurios yra atsparios naudojamiems inhibitoriams, gali augti terpėje..

-Yra padermių Neisseria gonorrhoeae kurios gali būti jautrios vankomicino koncentracijai. Dėl šios priežasties rekomenduojama lygiagrečiai naudoti šokolado agarą, papildytą izovitalex, bet be inhibitorių.

-Yra mielių, atsparių nistatinai, padermės, kurios gali augti šioje terpėje ir trukdyti patogeninių Neisseria, ypač gonokokų, izoliacijai..

Nuorodos

  1. Valtek diagnostikos laboratorijos. Agar Thayer-Martin.2016. Yra: com
  2. Laboratorijos Britanija. Thayer Martin Modified Medium. 2010 m. Galima rasti adresu: britanialab.com
  3. Vikipedijos kūrėjai. Thayer-Martin agaras. Vikipedija, „Laisvas enciklopedija“. 2017 m. Spalio 26 d., 16:33 UTC. Galima rasti adresu: wikipedia.org4. Prieiga prie 2019 m. Vasario 28 d.
  4. Laboratorijos Britanija. GC agaras. 2010 m. Galima rasti adresu: britanialab.com.
  5. Laboratorijos BBL ™ vidutinio stiprumo stiprūs mikroorganizmai. 1999. Yra: bd.com
  6. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologinė Bailey & Scott diagnozė. 12 red. Redakcija Panamericana S.A. Argentina.