Agaro TCBS pamatas, paruošimas ir naudojimas



The TCBS agaras yra labai selektyvi ir diferencinė kietosios kultūros terpė, naudojama Vibrio bakterijų išskyrimui ir kultūrai Vibrio cholerae, V. vulnificus ir V. parahaemolyticus kaip šios genties pagrindiniai patogenai.

Akronimas TCBS reiškia tiosulfato citrato tulžies sacharozę. Šis agaras taip pat žinomas kaip selektyvi terpė Vibriosui. Pradinę formulę sukūrė Nakanishi ir vėliau ją pakeitė Kobayashi.

Jis susideda iš mielių ekstrakto, mėsos peptono, tripteino, natrio citrato, natrio tiosulfato, tulžies tulžies, sacharozės, natrio chlorido, geležies citrato, bromtimolio mėlynos, timolio mėlynos ir agaro..

Ši kompozicija leidžia tinkamai vystyti Vibrio rūšis iš vandens, išmatų ir maisto mėginių; išskyrus Vibrio hollisae, tai ne auga šioje terpėje. Be to, TCBS terpė gali slopinti kitų lydinčių bakterijų, ypač koliformų, augimą.

Dėl sunkių virškinimo trakto ir ekstazinalinių problemų, kurias sukelia kai kurios Vibrio genties rūšys, jų diagnozė yra labai svarbi. Žmogus yra užsikrėtęs daugiausia dėl neapdorotų arba nevirškintų jūros gėrybių ar užteršto vandens vartojimo, bet taip pat užsikrėtus žaizdomis.

Dėl šios priežasties klinikinės laboratorijos turėtų tirti TCBS agarą tiriant skystų išmatų mėginių išmatų kultūras, ypač su ryžių vandens išvaizda. Ypač, jei pacientas praneša apie sąlytį su jūros vandeniu arba suvartojęs jūros gėrybių ar žuvų.

Indeksas

  • 1 Fondas
  • 2 Paruošimas
  • 3 Naudokite
  • 4 Sėjamoji
  • 5 Apribojimas
  • 6 Kokybės kontrolė
  • 7 Nuorodos

Fondas

Mielių ekstraktas, mėsos peptonai ir tripteinas yra šios terpės maistinis šaltinis. Tačiau TCBS agaras yra nepriekaištinga terpė daugumai bakterijų.

Didelis jo selektyvumas suteikiamas pridedant natrio citrato ir tulžies tulžies; abu yra slopinantys agentai, kurie taip pat užtikrina šarminį pH terpę, apribojant lydinčios floros augimą ir skatinant augimą. V. cholerae, tarp kitų rūšių. Reikia pažymėti, kad Vibrio cholerae yra labai jautrus rėmuo.

Savo ruožtu natrio chlorido kiekis svyruoja osmotiškai su terpe. Be to, kadangi jo koncentracija yra didelė, ji taip pat veikia kaip slopinantis agentas, skatinantis halofilinių bakterijų augimą.

Sacharozė yra fermentuojantis cukrus, kuris kartu su mėlynais bromtimolio ir timolio pH rodikliais suteikia skirtingo pobūdžio terpę. Dėl šios priežasties tai reiškia, kad galima išskirti sacharozės fermentavimo padermes nuo nefermentuojančių padermių.

Sacharozės fermentuojančių padermių kolonijos sukuria geltoną spalvą ir dėl rūgščių susidarymo terpę sukurs nuo žalios iki geltonos. Ne fermentatoriai auga permatomi, o terpė lieka originali spalva (žalia).

Taip pat ši terpė yra natrio tiosulfatas kaip sieros ir geležies citrato šaltinis kaip atskleidžiantis agentas. Abi rodo bakterijas, galinčias gaminti vandenilio sulfidą (bespalvės dujos). H2S susidaro iš tiosulfato ir vėliau reaguojant su geležies citratu susidaro matoma juoda nuosėdos.

Galiausiai, agaras yra tas, kuris suteikia terpei kietą konsistenciją.

Paruošimas

Pasverkite 89 g dehidratuotos terpės ir ištirpinkite vienu litru distiliuoto vandens. Padėkite tirpinti kaitinant ir dažnai maišant. Mišinį galima virti 2 minutes.

Ši terpė nėra autoklave. Po jo ištirpinimo jis patiekiamas tiesiai ant sterilių plokštelių. Sustiprinus, jie yra apversti atvirkščiai plokštelių formuotojams ir laikomi šaldytuve (2–8 ° C), kol jie bus naudojami.

Po paruošimo terpės pH turi būti 8,6 ± 0,2.

Dehidratuotos terpės spalva yra šviesiai smėlio arba žalsvai smėlio spalvos, o terpės spalva yra miško žalia arba melsva žalia.

Svarbu palikti plokštes grūdinti prieš sėjant mėginius.

Naudokite

Dažniausias Vibrios izoliacijos mėginys yra viduriavimas.

Išmatų mėginiai, jei jie negali būti tuoj pat sėjami į selektyviąją terpę, turi būti vežami Cary Blair viduryje.

Siekiant padidinti kultūros jautrumą, išmatos gali būti per 8 valandas maksimaliai praturtinamos kaip peptidinis vanduo, kurio pH yra 8,4, iš ten jis subkultūruojamas į TCBS terpę..

Taip pat reikia nepamiršti, kad kai kurie Vibrios kamienai gali sukelti septicemiją imunosupresuojamiems pacientams, todėl jie gali būti izoliuoti nuo kraujo kultūrų. Taip pat galima ištirti vandens ir maisto mėginius iš jūros, kai yra epideminių choleros ligos protrūkių..

Pasėtas

Tiriamo mėginio inokuliacija turi būti ryški, sėjama pagal išsekimo metodą. Plokštelės inkubuojamos 37 ° C temperatūroje 24 valandas aerobioze.

Galimos kolonijos Vibrio cholerae Jie yra vidutinio dydžio, lygūs, nepermatomi, su plonu kraštu ir geltonu, nes jie fermentuoja sacharozę..

Panašiai, rūšys V. alginolyticus, V. fluvialis, V. hareyi, V. cincinnatiensis, V. furnissii, V. metschnikovii ir kai kurie V. vulnificus. Kitos Vibrios rūšys, kliniškai svarbios kaip V. parahaemolyticus nesukartokite sacharozės, augančios kaip alyvuogių žaliosios kolonijos.

Kita vertus, turime nepamiršti, kad kai kurios Aeromonas ir Plesiomonas padermės, kurios yra oksidazės (+), gali augti šioje terpėje, vystydamos geltonas kolonijas, kurios gali painioti gydytoją. Nors kai kurie Pseudomonas štamai taip pat oksidazė (+) auga kaip žalios kolonijos, taip pat V. parahaemolyticus.

Apribojimas

Oksidazės testas, kuris yra teigiamas Vibrio genties atžvilgiu, niekada neturėtų būti atliekamas iš kolonijų, gautų iš TCBS agaro, nes gautas rezultatas bus klaidingas. Šiame bandyme terpėje esantys junginiai stipriai veikia. Todėl jis turėtų būti atliekamas iš subkultūrų ant kraujo agaro.

Kokybės kontrolė

Norint įrodyti, kad terpė yra geros būklės, patartina sodinti žinomus arba sertifikuotus kontrolinius kamienus ir stebėti, ar augimas atitinka numatytas charakteristikas.

Dėl to:

-Vibrio cholerae - Patenkinamas augimas (geltonos kolonijos, permatoma siena).

-Vibrio parahaemolyticus - Patenkinamas augimas (kolonija su žaliu centru ir permatoma siena).

-Vibrio alginolyticus ATCC 17749 - patenkinamas augimas (geltonos kolonijos, turinčios tos pačios spalvos žiedus aplink koloniją).

-Enterococcus faecalis ATCC 29212 - visiškas arba dalinis slopinimas (mažos geltonos arba permatomos kolonijos).

-Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 - dalinis arba visiškas slopinimas (mėlynos kolonijos).

-Escherichia coli ATCC 25922 - visiškai sustabdytas.

-Proteus mirabilis ATCC 43071 - Visas arba dalinis slopinimas. (Mažų kolonijų vidurio žalios permatomos kraštinės).

Neapdorotos terpės inkubacija neturėtų keistis.

Nuorodos

  1. Difco Francisco Soria Melguizo laboratorijos. TCBS agaras. 2009. Galima rasti adresu: f-soria.es
  2. BD laboratorija. BD. TCBS Agar 2003. Yra: bd.com
  3. Laboratorijos Britanija. TCBS Medium. 2015 m. Galima rasti adresu: britanialab.com
  4. „Acumedia Laboratories“ TCBS agaras. 2016 m. Galima rasti adresu: foodsafety.neogen.com
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologinė Bailey & Scott diagnozė. 12 red. Redakcija Panamericana S.A. Argentina.
  6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologinė diagnostika. 5th ed. Redakcija Panamericana S.A. Argentina.