Sojos agaro tripticaseína pagrindas, paruošimas ir naudojimas

The trypticasein sojos agaras arba triptazės sojos agaras yra kieta, neselektyvi ir maistinga kultūros terpė. Jį žymi raidės TSA už akronimą anglų Trypticase Soy Agar. Jį sudaro tripteinas, sojos peptonas, natrio chloridas ir agaro agaras.

Dėl savo didelio mitybinės galios jis idealiai tinka vidutinio sunkumo ir nereikalingų mikroorganizmų auginimui. Pradinė kultūra nėra rekomenduojama terpė be papildomų priedų, tačiau ji labai naudinga subkultūruojant grynąsias padermes ir išlaikant jų gyvybingumą, be kita ko..

Be to, šis agaras yra pagrindas praturtinti terpę, pvz., Kraujo agarą, ypač kai reikia stebėti hemolizės raštus ir sumontuoti optoquine ir bacitracino taksonus, reikalingus diagnozuojant. Streptococcus pneumoniae ir Streptococcus pyogenes atitinkamai.

Kita vertus, derinant su antibiotikais, naudinga išskirti klinikinę reikšmę turinčius fakultatyvinius ir griežtus anaerobinius mikroorganizmus iš mišinių augalų mėginių..

Galiausiai „tripticasein“ sojos agaro sudėtis ir jos veikimas atitinka skirtingų farmakopėjų (Europos, Japonijos ir Šiaurės Amerikos) nustatytus reikalavimus..

Indeksas

• 1 Fondas
• 2 Paruošimas
  • 2.1 Trikampazės sojos agaro plokštės
  • 2.2. Tripticasein sojos agaro plokštės, papildytos krauju
  • 2.3 Tripticasein sojos agaro plokštės, papildytos šildomu krauju
  • 2.4 Trikampės sojos agaro pleištai
• 3 Naudojimas
• 4 Sėjamoji
• 5 Kokybės kontrolė
  • 5.1 Sterilumo kontrolė
  • 5.2 Augimo kontrolė
  • 5.3. Tripticasein sojos agaro, papildyto krauju, augimo ir hemolizės modelio kontrolė
• 6 Nuorodos

Fondas

Kad bakterijos būtų tinkamai vystomos, būtina turėti energijos, pvz., Amino rūgščių, vitaminų, purino bazių ir pirimidinių medžiagų, kiekį..

Šia prasme tripteinas ir sojos peptonas suteikia tokias maistines medžiagas mikroorganizmams, tokiu būdu sudarant sąlygas jų pilnam vystymuisi. Tačiau reikalaujant bakterijų, būtina papildyti šį agarą su defibrinuojamu krauju arba įkaitintu krauju, kad padidėtų jo sodrumas.

Kita vertus, jei į terpę pridedama antibiotikų, ji tampa selektyvia terpe. Taip pat galite pridėti 0,6% mielių ekstrakto, kad būtų lengviau išskirti Listeria genties rūšis, kartu pridėjus cistino tellurito ir Avinėlio kraujas idealiai tinka Corynebacterium diphteriae.

Galiausiai, natrio chloridas suteikia osmotinę pusiausvyrą prie terpės ir agaras užtikrina kietą konsistenciją.

Paruošimas

Trijų stadijų sojos agaro plokštės

Norint paruošti sojos agarą trypticasein, skaitmeninėje skalėje reikia pasverti 40 gramų dehidratuotos komercinės terpės. Ištirpsta litre distiliuoto vandens, esančio fiola.

Mišiniui leidžiama stovėti 5 minutes ir po to patenka į šilumos šaltinį, kad būtų lengviau ištirpinti terpę. Jis turi būti dažnai maišomas ir paliktas virti 1 arba 2 minutes. Vėliau terpė sterilizuojama autoklave 121 ° C temperatūroje 15 minučių.

Leiskite atvėsti iki 50 ° C ir paskirstyti steriliuose Petri lėkštelėse. Leiskite sukietėti, apversti, užsakyti plaušeliuose ir laikyti šaldytuve.

Galutinis terpės pH turi būti 7,3 ± 0,2.

Turėtų būti atsižvelgta į tai, kad dehidratuotos kultūros terpė yra šviesiai smėlio spalvos ir turi būti laikoma sausoje vietoje nuo 10 iki 35 ° C..

Savo ruožtu paruoštas agaras yra šviesiai gintaras. Paruoštos plokštelės iki naudojimo turi būti laikomos šaldytuve (2–8 ° C).

Prieš naudojimą plokštės turi pasiekti kambario temperatūrą.

Tripticasein sojos agaro plokštės, papildytos krauju

Kraujo agaras yra gaunamas pridedant 5% defibrinuoto kraujo, kai atšaldomas trypticasein sojos agaras 50 ° C temperatūroje. Mišinys homogenizuojamas sukant švelniai judant.

Patiekite steriliuose Petri lėkštelėse. Medžiagos spalva turėtų būti vyšnių raudona.

Tripticasein sojos agaro plokštės, papildytos šildytu krauju

Siekiant paruošti TSA pagrindu sukurtą kraujo agarą, pirmiau aprašytos procedūros yra tokios pačios, tačiau, paliekant autoklave, jam leidžiama stovėti, kol terpės temperatūra yra maždaug nuo 56 iki 70 ° C. Tuo metu kraujas dedamas ir sumaišomas, kol terpė taps ruda.

Patiekite steriliuose Petri lėkštelėse. Medžiagos spalva yra šokolado ruda.

Tripticaseine sojos agaro pleištai

Agaro paruošimo procedūra yra tokia pati, kaip aprašyta plokštelėse, skirtingai, kad vietoj taršos terpės Petri lėkštelėse, prieš sterilizavimą, jis yra padalintas tarp 10 ir 12 ml mėgintuvėlių su bakelito dangčiu..

Vėliau vamzdeliai autoklavuojami 121 ° C temperatūroje 15 minučių. Išvažiuodami jie remiasi paramos ir leidžia sau sukietėti.

Paruošti pleištai sėjami pagal paviršių ir tam tikrą laiką palaikomi tam tikri nereikalingi gyvybingi mikroorganizmai.

Naudojimas

Trypticasein sojos agaras naudojamas šiais atvejais:

-Kaip pagrindą paruošti klasikinį kraujo agarą, kuris dažniausiai naudojamas daugelyje laboratorijų.

-Reikalingų bakterijų izoliacija.

-Hemolizės modelio stebėjimas.

-Diagnostinių bandymų atlikimas.

-Ruošiant specialų kraujo agarą Corynebacterium diphteriae, su tellūrinio cistinu ir ėriukų kraujas.

-Ruošiant ėriukų kraujo agarą, daugiau kanamicino-vankomicino, skirto anaerobams augti, ypač Bacteroides sp.

-Nenaudingų padermių (Bacterioteca) priežiūra.

-Mikrobinio aerobinio skaičiaus tyrimas atliekant vandens, aplinkos, maisto ir kosmetikos mėginių tyrimą.

Pasėtas

Mėginiai gali būti sėjami tiesiai ant trypticasein sojos agaro, papildyto krauju ar kitais priedais, paviršiaus. Jis sėjamas išnaudojant.

Kadangi tripticasein sojos agaro plokštės be priedų paprastai naudojamos mikroorganizmų padermėms (bakterijoms arba mielėms) subkultūruoti.

Kokybės kontrolė

Sterilumo kontrolė

Siekiant patikrinti skirtingų terpių, paruoštų su trypticasein sojos agaru, sterilumą, rekomenduojama atlikti šiuos veiksmus: iš kiekvienos paruoštos partijos vieną ar dvi plokšteles ar mėgintuvėlius reikia inkubuoti be inokuliacijos 37 ° C temperatūroje 24 valandas, kad būtų rodomas sterilumas. Visais atvejais jis turi likti be augimo.

Jei randama užterštumo, visa partija turi būti išmesta.

Augimo kontrolė

Norint ištirti tinkamą triptikazino sojos agaro veikimą, gali būti naudojami šie bakterijų kamienai: Escherichia coli ATCC 8739, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aerugiosa ATCC 9027 ir Enterococcus faecalis ATCC 29212.

Štamai sėjami ir inkubuojami aerobioze 37 ° C temperatūroje 24 valandas.

Visais atvejais augimas turi būti patenkinamas.

Taip pat galite naudoti grybus kaip kompleksą Candida albicans ATCC 10231 ir Aspergillus niger ATCC 16404. Tikimasi, kad abiem kamienams bus geras augimas.

Tripticasein sojos agaro augimo kontrolė ir hemolizės modelis, papildytas krauju

Siekiant patikrinti, ar tinkamai apdorota su šia baze paruoštas kraujo agaras, galima naudoti šiuos padermes: Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 ir Streptococcus pneumoniae ATCC 49619.

Jie sėjami ir inkubuojami 37 ° C temperatūroje microaerophilicus 24 valandas.

Visais atvejais augimas turi būti patenkinamas, atsižvelgiant į tai S. pyogenes beta-hemolizė (aiškus halonas aplink koloniją) ir abiejose S. pneumoniae turi būti laikomasi alfa hemolizės (žalios spalvos halo aplink kolonijas).

Nuorodos

1. Vikipedijos kūrėjai. Trypticase I agar. Vikipedija, „Laisvas enciklopedija“. 2018 m. Gruodžio 17 d., 15:47 UTC. Galima rasti adresu: https://en.wikipedia.org
2. Laboratorijos Britanija. Tryteino sojos agaras. 2015 m. Galima rasti adresu: britanialab.com
3. Neogen Laboratories Sojų pupelių triptikas. Pateikiama adresu: foodsafety.neogen.com
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologinė Bailey & Scott diagnozė. 12 red. Argentina Panamericana S.A Redaktorius.
5. BD laboratorijos Trypticase I am Agar. 2014 m