Agar Sabouraud fondas, paruošimas ir naudojimas

The Sabouraud agaras, Taip pat žinomas kaip Sabouraud dekstrozės agaras, tai yra kieta kultūros terpė, ypač praturtinta grybų, pvz., Mielių, pelėsių ir dermatofitų, išskyrimui ir vystymuisi..

Todėl mikrobiologijos laboratorijoje šios priemonės gali būti nepakankamos, kad būtų galima ištirti patogeninių arba oportunistinių grybų buvimą iš klinikinių ar ne klinikinių mėginių. Be to, jis taip pat idealiai tinka gijų bakterijų, tokių kaip Streptomyces ir Nocardia, augimui. Jo naudojimas yra labai platus, jis gali būti naudojamas žmonių, gyvūnų, augalų ir pramonės mikologijoje.

Šią terpę 1896 m. Sukūrė žinomas dermatologas Raimondas Sabouraudas, tapęs pasauliniu mastu žinomu galvos odos sutrikimų specialistu, kurį daugiausia sukėlė dermatofitai..

Jos sukūrimas buvo toks svarbus, kad jis buvo naudojamas nuo tada, ir jis tęsiasi šiandien, nors ir su tam tikrais pakeitimais.

Nors ji yra ypatinga grybams, šioje terpėje bakterijos gali augti, todėl mėginiams su mišriąja flora reikia įtraukti antibiotikus į preparatą ir tokiu būdu slopinti bakterijų augimą, kuris gali būti..

Antibiotikų pasirinkimas turėtų būti atliekamas atsargiai ir atsižvelgiant į grybelio tipą, kurį norite atkurti, nes kai kurios medžiagos yra slopinamos, kai yra tam tikrų medžiagų..

Indeksas

• 1 Fondas
  • 1.1 Dažniausiai vartojami Sabouraud dekstrozės agaro deriniai su antibiotikais
• 2 Paruošimas
  • 2.1 Dekstrozės Sabouraud agaras 
  • 2.2 Sabouraud dekstrozės agaras (emmonų modifikavimas)
  • 2.3 Sabouraudo dekstrozės agaras (Emmons modifikavimas) su chloramfenikoliu
  • 2.4 Dekstrozės Sabouraud emmono agaras su cikloheksimidu
  • 2.5 Dekstrozės Sabouraud agaras (Emmons) su chloramfenikoliu ir cikloheksimidu
  • 2.6 Kiti antibiotikai, kuriuos galima pridėti
• 3 Specialios aplinkybės
• 4 Kokybės kontrolė
• 5 Naudojimas
  • 5.1 Pirminis auginimas
  • 5.2 Sporuliacija
  • 5.3 Saugojimas
  • 5.4 Mikrokultūros
  • 5.5 Žmogaus mikologijoje
  • 5.6 Gyvūnų mikologija
  • 5.7 Aplinkos mikologija
  • 5.8 Pramoninė mikologija
  • 5.9 Augalų mikologija
• 6 Nuorodos

Fondas

Sabouraud dekstrozės agaras yra terpė, kuri savo pradinėje formulėje yra silpnai selektyvi dėl savo rūgštinio pH 5,6 ± 0,2, tačiau bakterijos vis dar gali išsivystyti, dažniausiai ilgai inkubuojant..

Terpėje yra kazeino peptono ir kasos virškinamojo audinio, kuris suteikia anglies ir azoto šaltinį mikroorganizmams vystyti..

Jame taip pat yra didelė gliukozės koncentracija, kuri veikia kaip energijos šaltinis, skatinantis grybų augimą bakterijose. Visi sumaišyti su agaro agaru, kuris užtikrina tinkamą konsistenciją.

Kita vertus, Sabouraud dekstrozės agaras gali būti selektyvus, jei pridedama antibiotikų.

Su antibiotikais jis ypač naudingas žaizdų mėginiuose, atvirose opose arba bet kokiame mėginyje, kuriame įtariamas didelis bakterinis užterštumas..

Dažniausiai vartojami Sabouraud dekstrozės agaro deriniai su antibiotikais

-Sabouraud agaras su chloramfenikoliu: idealiai tinka mielėms ir gijiniams grybams atkurti.

-Sabouraud agaro su gentamicino ir chloramfenikolio: tokiu būdu augti labiausiai siūlines grybelių ir mielių, ir slopina daug bakterijų, įskaitant Enterobacteriaceae, Pseudomonas ir Staphylococcus.

-Sabouraud agaras su cikloheksimidu: jis yra ypač naudingas mėginiams iš odos ar kvėpavimo takų, jeigu įtarimas yra dimorfiniai grybai.

Cikloheksimidas turėtų būti vartojamas atsargiai; Nors jis naudojamas slopinti ne patogeninių arba aplinkos grybų ir mielių, kurios gali būti kaip teršalai mėginyje, augimą, jis taip pat slopina kai kurių grybų, pvz. Cryptococcus neoformans,  Aspergillus fumigatus, Allescheria boydii, Penicillium sp ir kiti oportunistiniai grybai.

-Sabouraud agaras su chloramfenikoliu ir cikloheksimidu: daugiausia naudojamas dimorfinių dermatofitų ir grybų išskyrimui. Jo trūkumas yra tas, kad jis slopina kai kurias oportunistinių grybų rūšis Candida no albicans, Aspergillus, Zygomycetes arba C. neoformans.

-Sabouraud agaro su chloramfenikolio, streptomicino, penicilino G ir cikloheksimidui: yra idealus labai mėginių su bakterijų ir grybelių saprofitinės, bet turi trūkumą, kad slopina piktžolių augimą Actinomyces ir Nocardias, be pirmiau minėtų oportunistinių grybų.

Paruošimas

Jei turite atskirų ingredientų, galite jį paruošti taip:

Dekstrozės agaras Sabouraud 

Pasverkite:

- 40 g dekstrozės

- 10 g peptono

- 15 g agaro agaro

- Išmatuokite 1000 ml distiliuoto vandens

Visos sudedamosios dalys sumaišomos, pH nustatomas iki 5.6. Ištirpinkite tirpiklius verdant, išpilstykite 20 ml terpės į 25 x 150 mm vamzdžius, be flanšo ir su medvilnės viršu.

Taip pat gali būti naudojami kiti vamzdžių dydžiai, priklausomai nuo prieinamumo.

Jie autoklavuojami 10 minučių slėgio atmosferoje (121 ° C). Neviršykite autoklavo laiko. Išvažiuojant iš autoklavo, vamzdžiai pakreipiami laikikliu, kol jie sukietėja fleita..

Kitas būdas - ištirpinti ingredientus kaitinant, kol jis virs. Toje pačioje autoklave 10 min. Ir tada 20 ml Petri lėkštelėse.

Jei yra „Sabouraud“ dekstrozės agaro terpė, kurioje jau yra visų sudedamųjų dalių, pasveriame komercinio namo nurodytą kiekį vienam litrui vandens. Likusieji etapai yra tokie patys, kaip aprašyta aukščiau.

Dekstrozės agaras Sabouraudas (keičiant emmonus)

Pasverkite:

-  20 g dekstrozės

- 10 g peptono

-  17 g agaro agaro

-  Išmatuokite 1000 ml distiliuoto vandens

Visos sudedamosios dalys sumaišomos, pH nustatomas iki 6,9. Vykdykite taip pat, kaip ir ankstesniame.

Yra komercinių namų, kuriuose siūloma vidutinė medžiaga su visais ingredientais. Tokiu atveju pasverkite ir paruošite, kaip aprašyta įterpime.

Saburaudo dekstrozės agaras (Emmonų modifikavimas) su chloramfenikoliu

Chloramfenikolio tirpalas

- Pasverkite 500 mg chloramfenikolio bazės

- Išmatuokite 100 ml 95% etanolio

- Sumaišykite

Sabouraud dekstrozės agaro terpė (Emmons) paruošiama taip, kaip aprašyta aukščiau, ir papildomai kiekvienam litrui terpės įpilama 10 ml chloramfenikolio pradinio tirpalo prieš autoklave..

Dekstrozės agaras Sabouraud Emmons su cikloheksimidu

Cikloheksimido tirpalas

- Pasverkite 5 g cikloheksimido

- Išmatuokite 100 ml acetono

- Sumaišykite

„Sabouraud“ dekstrozės agaro terpė („Emmons“) paruošiama taip, kaip aprašyta anksčiau, ir papildomai kiekvienam terpės litrui prieš autoklave pridedant 10 ml cikloheksimido pradinio tirpalo..

Sabouraud dekstrozės agaras (Emmons) su chloramfenikoliu ir cikloheksimidu

Sabouraud dekstrozės agaro terpė (Emmons'o) yra paruoštas kaip jau aprašyta ir toliau vienam litrui terpės įpilama 10 ml pradinio tirpalo chloramfenikolio ir po 10 ml cikloheksimidas pradinio tirpalo prieš autoklave.

Kiti antibiotikai, kuriuos galima pridėti

20 000–60 000 vienetų penicilino vienam litrui terpės.

30 mg streptomicino vienam litrui terpės.

Abu turi būti įterpti po to, kai automatiškai išplaunama terpė, šiek tiek atvėsinama (50-55 ° C).

0,04 g neomicino vienam litrui terpės.

0,04 g gentamicino vienam litrui terpės.

Ypatingos aplinkybės

Už saugos pageidaujama augalų Sabouraud gliukozės agaro pleišto formos vamzdžių (linkę fleita piko), o ne į Petri lėkštelės, kad būtų išvengta dispersiją ir inhaliacijos sporų.

Svarbu, kad vamzdžiai su „Sabouraud“ agaru būtų padengti medvilnės, o ne su užsukamu dangteliu, nes buvo įrodyta, kad kai kurių padermių pusiauerobinės sąlygos slopina sporų susidarymą. Coccidioides immitis. Be to, dauguma grybų yra aerobiniai.

Jei naudojate sraigtinį dangtelį, neuždarykite sandariai.

Kokybės kontrolė

Parengta žiniasklaida turi turėti kokybės kontrolę, kad būtų galima patikrinti jų tinkamą veikimą. Šiuo tikslu sėjami tam tikri kontroliniai kamienai.

Sabouraud dekstrozės agaro su chloramfenikoliu ATCC padermes galima naudoti. Candida albicans, kurios turi turėti puikų augimą. Kita plokštelė yra inokuliuojama padermėmis iš Escherichia coli, turi būti visiškai sustabdytas.

Inkubuojama neapdorota plokštelė, kurioje neturi augti mikroorganizmų.

Sabouraud dekstrozės agarą su chloramfenikoliu ir cikloheksimidu galima naudoti  Trichophyton mentagrofitai, turi gerai vystytis. Kita plokštelė inokuliuojama Aspergillus flavus, kurioje turi būti nedidelis augimas ar augimas. Be to, neplanuota plokštelė yra inkubuojama, kad būtų parodyta jo sterilumas.

Sabouraud dekstrozės agarui su cikloheksimidu,. \ T Candida albicans, Trichophyton rubrum  o Microsporum canis, kuris turėtų rodyti gerą augimą.

Lygiai taip pat Aspergillus flavus, nedidelį augimą ar augimą. Galiausiai sterilizacijos kontrolei inkubuokite neapdorotą plokštelę.

Naudojimas

Pirminis auginimas

Klasikinis Sabouraud dekstrozės agaras turi 4 g dekstrozės ir yra puikus kaip pirminė izoliacinė terpė, nes ji rodo kiekvienos grybelio būdingą morfologiją..

Taip pat puikiai tinka įrodyti pigmentų gamybą. Tačiau tai nėra tinkamiausia priemonė sporuliacijai stebėti.

Taip pat nerekomenduojama augti Blastomyces dermatitidis, kurį slopina gliukozės didelė koncentracija.

Kita vertus, auginant reikia atsižvelgti į tam tikrus svarstymus.

Kai kurie grybai geriau vystosi kambario temperatūroje, pavyzdžiui, pelėsiai, kiti sėkmingai vystosi 37 ° C temperatūroje, kaip ir kai kurios mielės, o kiti gali susidaryti abiejose temperatūrose (dimorfiniai grybai).

Dėl šios priežasties kartais būtina naudoti keletą Sabouraud agaro plokštelių tam pačiam mėginiui, nes jie dažnai pasodinami dviem egzemplioriais, kad būtų galima inkubuoti vieną plokštelę kambario temperatūroje ir kitą plokštelę 37 ° C temperatūroje..

Pavyzdžiui, Sporothrix schenckii ji sėjama į dvi plokšteles; vienas yra inkubuojamas kambario temperatūroje, kad gautų pelėsių fazę, o kitas inkubuojamas 37 ° C temperatūroje, kad gautų į mieles panašią fazę, tačiau pastaruoju atveju būtina pridėti 5% kraujo į terpę.

Kitais atvejais, kaip ir miketomų mėginiuose, pasėjamos dvi Sabouraud agaro plokštelės, viena - chloramfenikoliu, kita - cikloheksimidu. Pirmoji leis augti grybelinės kilmės miketomos (Eumicetoma) sukėlėjus ir antrąjį bakterinės kilmės miketomų sukėlėjus, tokius kaip aktinomicetomai..

Sporuliacija

„Emmons“ modifikuotas dekstrozės „Sabouraud“ agaras turi 2 g dekstrozės ir yra naudojamas ne tik izoliavimui, bet ir grybų sporuliavimui ir išsaugojimui..

Šioje terpėje, jei galite atsigauti Blastomyces dermatitidis.

Saugojimas

Siekiant išsaugoti grybelines kultūras, galima laikyti šaldytuve (2-8 ° C). Laikymo trukmė gali svyruoti nuo 2 iki 8 savaičių. Po to jie turi būti subkultūruoti, kad procesas būtų pakartotas.

Kai kurie grybai geriausia palaikyti kambario temperatūroje, pvz Epidermophyton foccosum, Trichophyton schoenleinnii, T. violaceum ir Microsporum audounii.

Štamo palaikymą galima pailginti, kad būtų išvengta pleomorfizmo, jei dekstrozė visiškai pašalinama iš agaro ir jei agaro kiekis terpėje sumažėja, kad būtų išvengta sausumo..

Mikrokultūros

Kai kurių gijinių grybų identifikavimui būtina atlikti mikrokultūras, naudojant Sabouraud agarą arba kitas specialias priemones seksualinės ir aseksualinės reprodukcijos struktūroms stebėti..

Žmogaus mikologijoje

Jis daugiausia naudojamas diagnozuoti grybelines ligas, ypač tas, kurios veikia odą ir jos priedus (plaukus ir nagus)..

Mėginiai gali būti išskyros, eksudatai, oda, plaukai, nagai, skrepliai, CSF arba šlapimas. Paprastai izoliuoti patogenai yra dermatofitai, grybai, sukeliantys poodines ir sistemines grybelines infekcijas.

Gyvūnų mikologija

Gyvūnus dažnai paveikia grybelinės infekcijos, todėl Sabouraud agaras yra toks pat naudingas gyvūnams, kaip ir žmogaus mikologijoje..

Pavyzdžiui, dermatofitai dažnai gali paveikti gyvūnus. Taip yra Microsporum canis var distortum, kurie dažnai užkrečia šunis, kates, arklius, kiaules ir beždžiones. Taip pat, Microsporum gypseum užkrečia šunis, katinus ir galvijus.

Paukščiai, tokie kaip viščiukai, gaidžiai ir viščiukai, yra paveikti „Microsporum gallinae“.

Kiti grybai, kaip Zymonema farciminosum, jie taip pat yra gyvūnų, daugiausia arklių, mulų ir asilų, ligų priežastis, sukeliantys svarbų uždegimą limfiniuose induose..

Sporothrix schenkii ir Histoplasma capsulatum gyvūnams.

Aplinkos mikologija

Daugelyje patogeninių ar oportunistinių grybų bet kuriuo metu galima koncentruoti tam tikroje aplinkoje, ypač klinikų ir ligoninių operacinėse patalpose ir intensyviosios terapijos skyriuose. Todėl būtina jas kontroliuoti.

Kitos pažeidžiamos erdvės yra bibliotekos ir seni pastatai, kuriuos gali paveikti aplinkos grybų koncentracija.

Aplinkos tyrimuose grybų izoliavimui naudojamas Sabouraud dekstrozės agaras.

Pramoninė mikologija

Gali būti, kad Sabouraud dekstrozės agaras, be kita ko, gali būti atliekamas atliekant grybelinius teršalus kosmetikos, maisto, gėrimų, odos, tekstilės gaminių gamyboje..

Augalų mikologija

Augalai taip pat kenčia nuo grybų sukeltų ligų, darančių poveikį įvairioms augalų dalims, kurios netgi gali nutraukti derlių, sukeldamos didelius nuostolius žemės ūkyje..

Nuorodos

1. Cuenca M, Gadea I, Martín E, Pemán J, Pontón J, Rodríguez (2006). Mikozių mikrobiologinė diagnozė ir jautrumo tyrimai priešgrybeliams. Ispanijos infekcinių ligų draugijos ir klinikinės mikrobiologijos draugijos rekomendacijos. Galima rasti adresu: coesant-seimc.org
2. ValteK laboratorija. (2009). Sabouraud dekstrozės agaras su cikloheksimidu. Yra: andinamedica.com.
3. Navarro O. (2013). Veterinarinė mikologija. Nacionalinis žemės ūkio universitetas. Nikaragva.
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Bailey & Scott mikrobiologinė diagnozė. 12 red. Argentina Panamericana S.A Redaktorius
5. Casas-Rincon G. Bendroji mikologija. 1994. 2-asis Ed. Universidad Central de Venezuela, bibliotekos leidiniai. Venesuela, Karakasas.