Papa dekstrozės pamatas, paruošimas ir naudojimas

The papa dekstrozės agaras tai yra kieta, neselektyvi maistinė terpė. Jis gali augti bakterines ir grybelines rūšis, tačiau jo naudojimas yra ypač skirtas gijinių grybų ir mielių išskyrimui. Jis taip pat žinomas kaip PDA laikmena anglų kalbos išraiška „Bulvių dekstrozės agaras“.

Tai ypač naudinga fitopatogeninių grybų, t. Y. Tų, kurie veikia augalus, išskyrimui. Siekiant užkrėsti mėginius iš užkrėstų augalų, gali būti naudojamos kitos terpės, pvz., Sabouraud agaras arba malta agaras, tačiau įprastiniam naudojimui bulvių dekstrozės agaras yra tinkamiausias dėl didesnio sporuliacijos..

Jis taip pat naudojamas grybelinių kolonijų skaičiavimui kosmetikos, farmacijos ir kai kurių pieno produktų mėginiuose. Taip pat patartina sodinti odos skreplių mėginius, ieškant dermatofitų, kurie labai gerai auga šioje terpėje, plėtojant jiems būdingus pigmentus.

Bulvių dekstrozės terpė yra labai paprasta ir lengvai paruošiama laboratorijoje. Jame, kaip nurodyta, yra bulvių infuzijos, dekstrozės ir agaro agaro. Be to, gali būti pridėtos inhibitorinės medžiagos, kad būtų išvengta bakterijų augimo ir padidintas grybelinių rūšių selektyvumas.

Indeksas

• 1 Fondas
• 2 Paruošimas
  • 2.1 - Naminis (nekomercinis) papa dekstrozės agaro paruošimas
  • 2.2 - Komercinis papa dekstrozės agaro paruošimas
• 3 Naudojimas
  • 3.1. Augalų mėginių sodinimo procesas bulvių dekstrozės agare
  • 3.2. Odos, plaukų arba nagų skalių mėginių sodinimo procesas papa dekstrozės agare
  • 3.3 Identifikavimo procedūra
  • 3.4 Kolonijų skaičius
  • 3.5 Grybelinių štamų palaikymas
• 4 Kokybės kontrolė
• 5 Nuorodos

Fondas

Papa dekstrozės agaras yra auginimo terpė, kuri suteikia reikiamus mitybos elementus gijiniams grybams ir mielėms vystyti.

Bulvių infuzijos su gliukoze derinys yra puikus energijos šaltinis, kad grynas augimas būtų pakankamas. Nors agaras yra tas, kuris užtikrina nuoseklumą aplinkai.

Vien tik terpė neslopina bakterijų augimo, todėl ji yra neselektyvi terpė. Tam, kad jis būtų selektyvus, reikia papildomų inhibitorių, pvz., Vyno rūgšties arba antibiotikų.

Paruošimas

-Naminis (nekomercinis) bulvių dekstrozės agaro paruošimas

Petri lėkštelės

Jis parengtas taip:

Visų pirma, bulvės yra gerai plaunamos, pašalinant jų nešvarumus. Jie supjaustyti plonais griežinėliais su visko ir apvalkalu. Pasveriama 200 g bulvių ir pusę valandos dedama verdant litru distiliuoto vandens.

Po to, kai laikas yra filtruojamas arba suspaustas visas preparatas per marlę.

Gautas skystis užpildomas distiliuotu vandeniu, kol jis pasiekia vieną litrą. Į infuziją pridedama 20 g agaro ir 20 g dekstrozės, gerai sumaišoma ir autoklavuojama 121 ° C temperatūroje, 15 min..

Leiskite atvėsti iki 50 ° C ir patiekti steriliuose Petri lėkštelėse. Paruoštos plokštės laikomos šaldytuve.

Pleištai

Taip pat galite paruošti papa dekstrozės agaro pleištus.

Šiuo atveju, prieš sterilizuojant autoklave, į mėgintuvėlius dedama 12–15 ml terpės, tada jie yra autoklavuojami ir paliekami ant specialių laikiklių, kol jie sukietėja. Išsaugokite šaldytuve.

Terpė išlieka pH 5,6 ± 0,2, tačiau kai kurios laboratorijos prideda 10% vyno rūgšties, kad sumažintų pH iki 3,1 ± 0,1, kad slopintų bakterijų augimą..

Ta pačia prasme kitos laboratorijos pageidauja pridėti antibiotikų, kad būtų selektyvi grybų auginimui ir užkirstų kelią bakterijų vystymuisi..

-Komercinis bulvių dekstrozės agaro paruošimas

Pasverkite 39 g komerciniu būdu įsigytos dehidratuotos terpės ir ištirpinkite vienu litru distiliuoto vandens. Palikite ramybėje 5 minutes.

Mišinys kaitinamas dažnai maišant, kol visiškai ištirps. Vėliau sterilizuojama autoklave 121 ° C temperatūroje 15 minučių.

Galima paruošti plokšteles ar pleištus. Vykdykite taip, kaip aprašyta aukščiau.

PH išlieka 5,6 ± 0,2. Jei pageidaujama pH 3,1, prieš patiekiant ant plokštelių, reikia įpilti 14 ml 20% sterilaus vyno rūgšties..

Neapdorotos terpės spalva yra smėlio spalvos ir paruošta šviesiai gintare, šiek tiek drumsta ar opalescuojanti išvaizda.

Naudojimas

Augalų mėginių sodinimo procesas bulvių dekstrozės agare

-Lapams su dėmėmis

Lapai supjaustomi į gabalus.

Į 50cc stiklinę su 50% alkoholiu, lapų gabalus (dažytus ir sveikus) padėkite dezinfekuoti 20–30 sekundžių. Ištraukite alkoholį ir įpilkite 20% natrio hipochlorito 40–50 sekundžių, jei jie yra ploni lapai, ir padidinkite laiką iki 80 sekundžių, jei tai žievė ir rąstai.

Ištraukite natrio hipochloritą ir steriliu spaustuvu paimkite dezinfekuotus gabalus ir padėkite juos ant terpės paviršiaus (daugiausia 10 vienetų). Įdėkite datą ir inkubuokite nuo 20 iki 30 ° C.

-Vaisiams ir gumbams

Jei vaisiai yra mėsingi, atverkite grybelio paveiktus vaisius ir paimkite gabalus steriliu skalpeliu, tiek ligonine dalimi, tiek sveikąja dalimi, ir padėkite jį ant agaro paviršiaus..

Jei vaisiai yra citrusiniai, pavyzdžiui, citrinos ar apelsinų, turite atsidaryti ir sėti savo sėklas.

Kai paveikiamas vaisių paviršius ir pastebimos sporos, geriausia naudoti ant grotelių supjaustytą metodą; tai reiškia, kad sporas paliečiamas sterilizuotos ir atšaldytos „L“ mentelėmis, o po to atlikite zigzagą, sėjantį 2–3 kartus agare.

-Grūdams

Jie dezinfekuojami, kaip aprašyta lapuose, ir po to dedami ant agaro.

-Filialams ir stiebams

Atliekamas žievės nulaužimas, o tada sveikos ir ligos dalies gabalai imami ir sėjami tiesiai ant agaro..

Sėjos plokštelės inkubuojamos aerobioze 20-30 ° C temperatūroje 72 valandas.

Odos, plaukų arba nagų skalių mėginių sodinimo procesas ant papa dekstrozės agaro

Mėginys turi būti paimtas naudojant skalpelio mentę Nr. 11, kad sumažintumėte paveiktus plaukus, odos dribsnius ar nagus ieškant dermatofitų. Prieš imant mėginį, plotas turėtų būti dezinfekuojamas 70% alkoholiu.

-Odos mėginys

Pleiskanus pažeidimus pažeidimo kraštas turėtų būti nubrauktas, nes dažniau randamas grybelis.

Eksudaciniuose pažeidimuose mėginys paimamas sausu arba šlapiu tamponu. Nedelsiant sėti bulvių dekstrozės agare arba Sabouraud agare. Venkite transporto priemonių.

Kitas mėginių ėmimo metodas yra Mariat ir Adan Campos kiliminės dangos metodas. Tokiu atveju pažeistą plotą 5 kartus trinamas sterilios vilnos gabalas tolesniam auginimui.

Mėginys gali būti dedamas tiesiai į auginimo terpę.

-Plaukų mėginys

Priklausomai nuo patologijos, šaknis gali pažeisti ar ištraukti paveiktą dalį. Mėginys dedamas į auginimo terpę.

-Nagų mėginys

Galite nubraukti arba iškirpti tam tikrą paveikto nago dalį. Tai priklausys nuo žalos tipo.

Mėginys prieš sėją supjaustomas į 1 mm gabalus, kad padidėtų grybelio sąlyčio su auginimo terpe tikimybė.

Identifikavimo procedūra

Plokštelėje gautos kolonijos yra izoliuotos mėgintuvėliuose, kuriuose yra bulvių dekstrozės agaro, kad būtų atliktas makroskopinis kolonijų tyrimas (išvaizda, spalva, konsistencija, išsivystymo laipsnis)..

Mikroskopinis tyrimas (konstrukcijų ir jų formavimosi stebėjimas) gali būti atliekamas mikrokultūromis arba tiesioginiu stebėjimu po mikroskopu tarp plokščių ir lamelių.

Kolonijų skaičius

Ši terpė taip pat gali būti naudojama grybų ir mielių, esančių augalų mėginiuose, maiste, kosmetikoje ar vaistuose, apkrovai. Šiuo tikslu naudojamas papa dekstrozės agaras, papildytas antibiotikais, pavyzdžiui: (chloramfenikolis, chlorotetraciklinas arba abu).

Į sterilų ir tuščią Petri lėkštelę įpilkite 1 ml mėginio, pageidautina atskiestą, tada ištirpinkite bulvių dekstrozės agaro kamštį ir leiskite atvėsti iki 45 ° C. Supilkite petri lėkštelę ir sukite iki homogenizavimo. Palikite ją ramioje vietoje, kol jis sukietėja.

Inkubuokite aerobioze 20–25 ° C temperatūroje (pelėsiai) arba 30–32 ° C (mielių) 5–7 dienas ar ilgiau, priklausomai nuo norimo grybelio tipo ir mėginio tipo. Dvi plokšteles galima naudoti inkubavimui abiejose temperatūrų ribose.

Grybelinių štamų palaikymas

Papa dekstrozės agaras gali būti naudojamas gyvybingiems grybeliniams kamienams palaikyti keletą metų.

Norėdami tai padaryti, grybelis yra auginamas papa dekstrozės agaro pleištuose ir grybai auginami, jis yra padengtas mineraline alyva. Aliejus turi būti sterilizuojamas autoklave 45 minutes ir apytiksliai nuo 300 iki 330 Saybolt. Alyva turėtų viršyti kūgio galą nuo 1 iki 2 cm.

Kokybės kontrolė

Iš kiekvienos paruoštos partijos reikia paimti vieną ar dvi plokšteles ir inkubuoti 25 ° C temperatūroje 48 valandas arba 20 ° C temperatūroje 96 valandas. Gera sterilumo kontrolė yra ta, kurioje kolonijų nėra.

Taip pat žinomi arba sertifikuoti kontroliniai kamienai, tokie kaip:

Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763, Candida albicans ATCC 10231, Aspergillus brasiliensis ATCC 16404, Trichophyton mentagrofitai ATCC 9533. Visais atvejais tikimasi gero augimo.

Nuorodos

1. Laboratorijos Britanija. Papa gliukozado agaras. 2015 m. Galima rasti adresu: britanialab.com
2. Neogen Laboratories Bulvių dekstrozės agaras. Pateikiama adresu: foodsafety.neogen.com
3. Insumolab laboratorija Bulvių dekstrozės agaras. Yra: insumolab.cl
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologinė Bailey & Scott diagnozė. 12 red. Redakcija Panamericana S.A. Argentina.
5. Casas-Rincon G. Bendroji mikologija. 1994. 2-asis Ed. Universidad Central de Venezuela, bibliotekos leidiniai. Venesuela, Karakasas.
6. Aceituno M. Mikrobiologinės kokybės įvertinimas akių šešėlyje, kompaktiškas miltelių tipas nacionalinėje gamybos laboratorijoje, pagal Pharmacopeia Usp etaloninį metodą, 2005 m. San Carlos de Guatemala universitetas.
7. Cuétara M. Paviršiaus mėginių apdorojimas. „Iberoamerican Mycology Magazine“. 2007 m. pp. 1-12