Maistingas agaro pamatas, paruošimas ir naudojimas

The maistingas agaras tai yra neselektyvi ir diferencinė kieta kultūros terpė. Šioje aplinkoje auga visų rūšių bakterijos, kurios nereikalauja mitybos požiūriu.

Tai paprasta priemonė ir, nepaisant jo pavadinimo, yra mažesnė maistinė vertė, palyginti su kitomis panašiomis terpėmis, pvz., Smegenų širdies infuzijos agaru arba triptazės sojos agaru..

Jo naudingumas laboratorijoje yra labai įvairus. Daugiausia naudojama rūšių subkultūrai, padermių palaikymui, kolonijų skaičiavimui, kaip pagrindą paruošiant kraujo agarą, be kita ko.

Be to, dėl savo šviesios smėlio spalvos, kai kurių bakterijų padermių, pvz. Pseudomonas aeruginosa, pagamintas plytų raudonasis pigmentas Serratia marcescens kambario temperatūroje, aukso geltonos spalvos pigmentas Staphylococcus aureus, be kita ko.

Be to, tai yra viena iš ekonomiškiausių auginimo terpių rinkoje.

Indeksas

• 1 Fondas
• 2 Sudėtis
• 3 Paruošimas
• 4 Naudojimas
  • 4.1 Paruošiant kraujo agarą
  • 4.2 Skatinti sporą formuojančių bakterijų sporuliavimą
  • 4.3 Atliekų priežiūra
  • 4.4 Kolonijų skaičiavimas
  • 4.5 Diagnostinių tyrimų atlikimas
  • 4.6 Mezofilinių aerobinių rekreacinių druskų vandenų (paplūdimių) išgavimas
• 5 Nuorodos

Fondas

Kaip jau minėta, tai labai paprasta priemonė, pagrįsta maistinių medžiagų teikimu bakterijų augimui be apribojimų ir be sudėtingų reakcijų interpretuoti.

Kadangi terpė yra permatoma, ji idealiai tinka kolonijų skaičiavimui sėjimo būdu pagal gylį.

Sudėtis

Jį daugiausia sudaro mėsos ekstraktas arba mielių ekstraktas, peptonai arba kasos želatinos virškinimas, agaro agaras, natrio chloridas ir distiliuotas vanduo.

Mėsos arba mielių ir peptonų ekstraktas yra anglies ir esminių mineralų (azoto, fosforo ir sieros) šaltiniai, kuriuos bakterijos naudoja kaip energijos šaltinį ir augimo veiksnius.

Be to, agaro agaras yra visų kietųjų auginimo terpių pagrindas, pakeičiantis želatiną, kuri buvo pirmasis Roberto Kocho panaudotas bazinis junginys, užtikrinantis kietos medžiagos nuoseklumą..

Agaras yra polisacharidas, sudarytas iš galaktozės, galaktomannano, agarozės ir agaropektino. Jis nustatomas 40 ° C temperatūroje ir ištirpsta beveik 100 ° C temperatūroje.

Savo ruožtu natrio chloridas suteikia terpei, kurios bakterijų vystymuisi reikalingas osmoliškumas.

Galiausiai vanduo padeda hidrolizuoti ir ištirpinti liofilizuotus junginius. Turi būti naudojamas distiliuotas vanduo, priderintas prie neutralaus pH. Vandeninis vanduo neturėtų būti naudojamas, nes jame yra kalcio ir magnio, kurie gali reaguoti su fosfatais terpėje ir sudaryti netirpias druskas.

Paruošimas

Vienam litrui maistinio agaro reikia pasverti 31 g dehidratuotos terpės. Jis dedamas į fiolą ir ištirpinamas litre distiliuoto vandens. Po penkių minučių poilsiu, šildykite šilumos šaltinį ir nuolat maišykite, kol virs 1 arba 2 minutes.

Tuomet fiola dedama į autoklave ir sterilizuojama 121 ° C temperatūroje 20 minučių.

Pasibaigus laikui, jis pašalinamas iš autoklavo ir patiekiamas steriliuose Petri lėkštelėse, naudojant laminarinį srauto gaubtą arba Bunsen degiklį..

Jei Petri lėkštelės yra vienkartinės (plastikinės), terpė turėtų būti paskirstyta, kai agaras turi maždaug 50 ° C temperatūrą, kad būtų išvengta jų deformacijos pernelyg didele šiluma.

Leiskite kietėti ir laikyti plokštelės laikiklyje apverstą ir šaldytuve 2–8 ° C temperatūroje iki naudojimo.

Prieš sėjant, plokštės turi būti grūdintos. Maitinimo agaro plokštės neturėtų būti naudojamos, jei jos yra užterštos arba dehidratuotos.

Paruoštos terpės pH turėtų būti nustatomas iki 7,3 ± 0,2.

Naudojimas

Tai paprasčiausia mikrobiologijos laboratorijoje naudojama auginimo terpė. Jo sudėtis puikiai tinka nereikalingų bakterijų augimui.

Pagrindiniai jo naudojimo būdai paaiškinti toliau:

Kaip kraujo agaro paruošimo pagrindas

Ši terpė kartais naudojama kaip pagrindas agaro paruošimui kraujui, tačiau tai nėra dažniausiai naudojama bazė.

Skatinti sporą formuojančių bakterijų sporuliaciją

Ši auginimo terpė yra ypač naudinga sporų formuojančių bakterijų, tokių kaip Bacillus sp.

Norėdami tai padaryti, sėjama genties padermė Bacillus ir inkubuojama 24 valandas 37 ° C temperatūroje aerobioze. Po kolonijų auginimo plokštė patiria įtempimą temperatūroje, ty krosnies temperatūra padidinama iki 44 ° C ir paliekama 24 valandas daugiau, arba 24 valandų įšaldoma į šaldytuvą..

Pasibaigus kultūrai, kultūros pratęsiamos ir nudažomos Gramo dažais arba Shaeffer-Fulton sporų dėmėmis. Juose bus stebimi bacilai su endosporais (sporomis baciliaus viduje) ir eksosporai (sporos už bacilų ribų)..

Deformacijų priežiūra

Kai kurios mokslinių tyrimų laboratorijos ar universitetų mokymo laboratorijos turi išlaikyti gyvybingas kliniškai svarbias bakterijas kiek įmanoma ilgiau, kad galėtų naudoti bakterijų banką (bakterioteka) moksliniams tyrimams ar mokymo praktikos rengimui. Studentai išmoks manipuliuoti ir identifikuoti šiuos mikroorganizmus.

Šiam tikslui gali būti naudojamas maistinis agaras ir smegenų širdies infuzijos agaras. Paruoštas agaras, supilamas į bakelito dangtelius ir pakreipiamas ant pagrindo taip, kad agaras sukietėtų, formuojant bloką apačioje ir kūgį ant paviršiaus (fleitos smailė).

Kiekvienas mėgintuvėlis yra paženklintas įterpiant pasodinamų bakterijų pavadinimą ir datą. Ant karkaso kiekvienos bakterijos bus pasodintos ir inkubuojamos 24 valandas, kai kolonijos bus auginamos, vamzdžiai laikomi kambario temperatūroje..

Bakterioteka turi būti atnaujinta nuo 1 iki 3 mėnesių, kad būtų išvengta teršalų užteršimo ir dehidratacijos, taip pat bakterijų mirties..

Tokiu būdu galima išlaikyti tik nereikalingas bakterijas.

Kolonijų skaičiavimas

Nors egzistuoja specializuotos priemonės kolonijų skaičiavimui, pavyzdžiui, standartinis skaičiavimo agaras, šiam tikslui gali būti naudojamas maistinis agaras arba sėjant ant paviršiaus drigalskio mentele arba gyliu. Todėl tai labai naudinga mikrobiologinei maisto ir vandens analizei.

Diagnostinių bandymų atlikimas

Kadangi tai yra terpė, kurioje nėra kraujo ar bet kurio kito priedo, idealiai tinka šiame etape užaugintų kolonijų paėmimui katalazės testui atlikti..

Taip pat, atsižvelgiant į aiškią spalvą, oksidazės bandymai yra atliekami tiesiogiai sėklų agaro srityje, be trukdžių.

Mesofilinių aerobinių rekreacinių druskų vandenų (paplūdimių) išgavimas

Maisto agaras, paruoštas 10% jūros vandens, yra naudingas vertinant mezofilinius aerobus paplūdimio vandenyse.

Tokiu būdu mes galime įvertinti realaus užteršimo lygį, kurį vandenys turi šiems mikroorganizmams, nes šio tipo mėginiuose rezultatai yra persidengiami, naudojant įprastą būdu paruoštą terpę.

Tai parodė Cortez et al. 2013 m. tyrime.

Tai galima paaiškinti dėl staigių bakterijų pokyčių, kai vyksta iš hiperkalpinės aplinkos į mažą druskos aplinką, todėl mikroorganizmai patenka į mieguistumo būseną, kurioje jie yra gyvybingi, bet nekeliami..

Nuorodos

1. "Maistingas agaras". Vikipedija, laisva enciklopedija. 2016 m. Rugsėjo 13 d., 20:33 UTC. 2018 m. Gruodžio 29 d., 21:04 en.wikipedia.org
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologinė Bailey & Scott diagnozė. 12 red. Argentina Panamericana S.A Redaktorius.
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologinė diagnostika. (5-asis red.). Argentina, Redakcijos Panamericana S.A..
4. Cortez J, Ruiz Y, Medina L, Valbuena O. Su jūros vandeniu paruoštų auginimo terpių poveikis sveikatos rodikliams Chichiriviche kurortų, Falcón valstijos, Venesuelos jūrų vandenyse. Rev Soc Come Microbiol 2013 m .; 33: 122-128
5. „Paredes V“, „Dias V“, „Silva de Almeida M“ ir „Cardoso M.“..Cient.Agro.Amaz. 2013 m .; 1 (2): 42-49.
6. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktinė klinikinė mikrobiologija. Kadiso universitetas, 2-asis leidimas. UCA leidinių tarnyba.