Agar Müeller Hinton pamatas, paruošimas ir naudojimas



The „Müeller Hinton“ agaras Tai kieta, neselektyvi maistinė terpė, kurią sudaro mėsos infuzija, kazeino rūgšties peptonas, krakmolas, agaras ir distiliuotas vanduo. Ši terpė leidžia puikiai išsivystyti sparčiausiai augančias bakterijas.

Iš pradžių jį sukūrė John Howard Müeller ir Jane Hinton, kad izoliuotų maistingumo reikalaujančias bakterijas, pvz. Neisseria gonorrhoeae ir Neisseria meningitidis. Tačiau dėl savo savybių jis pasirodė idealus tyrimui dėl jautrumo antibiotikams, suteikiant patikimus ir atkuriamus rezultatus.

Dėl šios priežasties Müeller Hinton agaras yra klinikinių ir laboratorinių standartų instituto (CLSI) ir Europos antimikrobinio jautrumo tyrimo komiteto patvirtinta auginimo terpė, skirta atlikti antimikrobinį jautrumo tyrimą Kirby diskų difuzijos metodu. Baueris.

Indeksas

  • 1 Fondas
  • 2 Paruošimas
  • 3 Naudojimas
    • 3.1. Antimikrobinė technika
    • 3.2 Strateginis diskų išdėstymas Müeller Hinton agare
  • 4 Klaidingų rezultatų priežastys
  • 5 Apribojimas
  • 6 Kokybės kontrolė
  • 7 Nuorodos

Fondas

Kadangi tai yra neselektyvi maistinė terpė, ji puikiai tinka daugelio patogeninių bakterijų augimui.

Kita vertus, jos paprasta sudėtis leidžia medžiagoms lengvai pasklisti, nes tai yra esminis jautrumo testo požymis diskų difuzijos metodu..

Kita jo savybė yra ta, kad jame yra nedidelis inhibitorių kiekis, kuris leidžia veiksmingai įvertinti sulfonamidų, trimetoprimo ir tetraciklinų kiekį..

Tačiau reikia nepamiršti, kad laikmena turi atitikti tam tikras sąlygas, kad užtikrintų tinkamą jo veikimą, įskaitant:

PH reguliavimas, agaro gylis ir pakankama timino, timidino, Ca koncentracija++, Mg++ ir Zn++.

Taip pat turime žinoti, kad metodika yra standartizuota, todėl turi būti laikomasi visų parametrų, pavyzdžiui:

Inokuliato koncentracija, antibiotikų diskų koncentracija ir konservavimas, atitinkamo kiekio diskų išdėstymas ant agaro, atstumas tarp vieno disko ir kito, tam tikrų antibiotikų strateginis išdėstymas, atmosfera, temperatūra ir laikas. inkubacija.

Paruošimas

Pasverkite 37 g dehidratuotos Müeller Hinton terpės ir ištirpinkite 1 litru distiliuoto vandens. Šildykite terpę maišant, kad jis ištirptų. Leiskite virti 1 minutę.

Autoklave sterilizuokite 121 ° C temperatūroje 15 minučių. Pašalinus iš autoklavo, fiola turi būti įdedama į vandens vonią 50 ° C temperatūroje, kad atvėsintų. 25–30 ml įpilkite į sterilius 10 cm skersmens Petri lėkšteles.

Plokštelių vidutinis storis turi būti 4 mm (idealus), leidžiamas 3-5 mm.

Jei norima paruošti kraujo agarą, naudodami Müeller Hinton agaro bazę, prieš patiekiant ant plokštelių, pilamas 5% sterilus ir defibrinuotas ėriukų kraujas..

Galutinis terpės pH turi būti nuo 7,2 iki 7,4.

Investuokite ir laikykite šaldytuve iki naudojimo. Prieš naudodami plokštelę, palaukite kambario temperatūros.

Paruoštos terpės spalva yra šviesiai smėlio.

Naudojimas

Jis naudojamas antibiotikų ar antibiotikų jautrumo testui atlikti daugeliui greitai augančių ligų sukėlėjų.

Jei agaras yra papildytas krauju, jis padeda atlikti reikiamų mikroorganizmų, pavyzdžiui: Streptococcus pneumoniae, Haemophilus sp., Neisseria meningitidis, be kita ko. Jis taip pat buvo naudojamas izoliuoti Legionella pneumophila.

Antibiogramų technika

Prieš atliekant antibiotiką, turi būti paruoštas bakterinis tirpalas, lygus 1,5 x 108 ląsteles.

Norėdami tai padaryti, iš grynosios kultūros paimama nuo 3 iki 4 kolonijų ir suspenduojama trišakės sojos sultinyje arba Müeller Hinton sultinyje, inkubuojama 2–6 valandas ir koncentracija sureguliuojama steriliu fiziologiniu tirpalu, lyginant jį su Mac Farland standartu. 0,5%.

Jei jie yra reikalingi mikroorganizmai, kolonijos gali būti sustabdytos tiesiogiai, kol jos pasieks 0,5% Mac Farland koncentraciją. Vėliau „Müeller Hinton“ plokštė sėjama su tamponu, įmirkytu paruoštu bakteriniu tirpalu.

Norėdami tai padaryti, panardinkite tamponą į tirpalą ir tada pašalinkite skysčio perteklių paspaudžiant prie vamzdžio sienelių. Iš karto po to, kai tamponas praeina per visą paviršių, nepaliekant nepaliestų vietų, šiek tiek pasukite plokštelę ir pasodinkite. Operacija kartojama dar 2 kartus.

Leiskite pastovėti 10 minučių ir po to įdėkite antibiotikų diskus steriliais spaustuvais, tarp jų tarpas paliekamas 24 mm. Po to, kai kiekvienas diskas ant agaro yra užspaudžiamas lengvai, kiekvienas jų su spaustuku, kad įsitikintumėte, jog jos gerai prilipusios.

Po proceso plokštelė apverčiama ir inkubuojama 16–18 valandų 35–37 ° C temperatūroje aerobioze. Jei tai yra reiklus mikroorganizmas, gali prireikti mikroaerofilijos ir, jei antibiotikoje yra oksacilino diskų, jį reikia skaityti 24 val..

Kiekvieno halo skersmeniui matuoti naudojamas valdovas. Rezultatai turi būti registruojami mm. Vėliau gautos vertės yra koreliuojamos su supjaustytų taškų lentelėmis, paskelbtomis dabartiniame CLSI vadove.

Atitinkamai praneškite kaip jautrią (S), tarpinę (I) arba atsparią (R).

Antibiotikai parenkami pagal izoliuotą mikroorganizmą ir infekcijos tipą.

Kartais turėtų būti laikoma, kad strateginis antibiotikų išdėstymas rodo fenotipinius atsparumo modelius.

Strateginis diskų išdėstymas Müeller Hinton agare

Enterobakterijų klavulano rūgšties diskas turi būti dedamas prieš 3 ir 4 kartos cefalosporinus. Kiaušinio formos išsiplėtimas rodo, kad štamas yra išplėstinio spektro beta laktamazių (ESBL) gamintojas. Tai reiškia, kad pacientas negali būti gydomas jokiu cefalosporinu.

Staphylococcus yra svarbu, kad eritromicino ar azitromicino diskas būtų dedamas prieš klindamicino diską (D-testas)..

Atsparus halogenas eritromicinui ir plokštumas klindamicino haloge rodo, kad štamas turi indukuojamą atsparumą klindamicinui, kamienui (RIC). Tai reiškia, kad gydymas klindamicinu nebus veiksmingas.

Norint ieškoti indukuojamų AMP C padermių Enterobacteriaceae ir kai kurių nefermentuojančių gramteigiamų bacilių, ceftazidimo, cefoksitino arba piperacilino tazobaktano diskai susiduria su 27 mm atstumu nuo imipenemo disko..

Vienoje iš diskų, esančių imipenemo pusėje, suplotas halogenas rodo indukuojamo AMP C buvimą.

Konfliktiniam AMP C ieškojimui kloksacilino 500 μg diskas susiduria su ceftazidimu (30 μg) ir cefotaksimu (30 μg) 25 mm atstumu. Išplėstas halogenas vienoje iš cefalosporinų rodo teigiamumą.

Kloksacilino diską taip pat galima pakeisti 9 mm Whatman Nr. 6 filtravimo popieriaus disku, įmirkytu fenilo boro rūgštimi (400 μg), 18 mm atstumu. Tai aiškinama kaip ir ankstesnė.

Galiausiai, ištirti metalo-beta-laktamazių gamybą, ypač Pseudomonas aeruginosa, 15 mm atstumu naudojamas diskas, įmirkytas 10 μl etilendiaminetraacto rūgšties (EDTA 750 μg) ir tioglikolio rūgšties (SMA 300 μg), esantis imipenemo ir meropenemo diskuose..

Bandymas yra teigiamas, jei imipenemo arba meropenemo halos plečiasi į EDTA / SMA diską. Šis rezultatas turi būti patvirtintas modifikuotu Hodge testu.

Šis metodas apima inokuliaciją Escherichia coli ATCC 25922 Müeller Hinton plokštelėje. Imipenemo diskas dedamas į plokštelės centrą, o po to iš disko į periferiją suformuojama fleita su štamu. P. aeruginosa įtariamasis Vieną plokštelę galite išbandyti iki 4 padermių.

Bandymas bus teigiamas, jei aplink striają yra imipenemo iškraipymo zona.

Klaidingų rezultatų priežastys

-Prastai konservuotų antibiotikų diskai gali sukelti klaidingą atsparumą. Pavyzdžiui, oksacilino diskas yra labai jautrus temperatūros pokyčiams.

-Medžiagos, žemesnės už nurodytą (rūgšties), pH sumažina aminoglikozidų ir makrolidų (klaidingo atsparumo riziką) ir didesnių halicų penicilino, tetraciklino ir novobiocino (klaidingo jautrumo rizika)..

-Jei pH yra didesnis už nurodytą (šarminį), pirmiau aprašyti poveikiai yra pakeisti.

-Žiniasklaida, kurioje yra didelė timino ir timidino koncentracija, žymiai sumažina sulfonamidų ir trimetoprimo slopinimo halogenus.

-Didelė kalcio ir magnio koncentracija sukelia klaidingą aminoglikozidų, polimiksino B ir tetraciklinų atsparumą \ t Pseudomonas aeruginosa.

-Mažos kalcio ir magnio koncentracijos sukelia klaidingą aminoglikozidų, polimiksino B ir tetraciklinų jautrumą. Pseudomonas aeruginosa.

-Cinko buvimas veikia karbapenemų diskų (imipenemo, meropenemo ir ertapenemo) rezultatus..

-Mažesnės nei 3 mm terpės storis sukelia klaidingus jautrumo rezultatus, o storis virš 5 - sukels klaidingą atsparumą.

-Diskų mobilizavimas antibiotikoje suteiks deformuotų halos, nes antibiotikų išleidimas yra tiesioginis.

- Labai silpni inokuliacija turi įtakos rezultatams, nes agare nebus vienodo ar susiliejančio augimo, būtina sąlyga, kad būtų galima išmatuoti slopinimo zonas, be to, kad halotai gali suteikti didesnę nei įprastai.

-Perkrauti inokuliai gali duoti mažesnes nei įprastos halos.

-Neatsižvelgiant į atstumą tarp diskų, vienas halo perdengia kitą ir negali būti teisingai skaitomas.

-Inkubuokite su CO2 padidina tetraciklino ir meticilino diskų halogenų dydį.

-Inkubavimas esant žemesnei nei 35 ° C temperatūrai gamina didesnes halotas.

-Pridedant kraujo sumažėja sulfonamidų halo dydis.

Apribojimas

Antibiotiko jautrumas, parodytas antibiotikoje prieš mikroorganizmą (in vitro) nėra garantija, kad ji veiks in vivo.

Kokybės kontrolė

Norint žinoti, ar terpėje yra tinkamas timino kiekis, reikia sėti iš Enterococcus faecalis ATCC 29212 ir jautrumas trimetoprimo sulfametoksazolui (SXT), jis turi būti 20 mm arba didesnis kaip 20 mm..

Nuorodos

  1. "Agar Müller-Hinton." Vikipedija, laisva enciklopedija. Lapkričio 16 2018, 12:23 UTC. Sausio 27, 2019, 04:22
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologinė Bailey & Scott diagnozė. 12 red. Redakcija Panamericana S.A. Argentina.
  3. Cona E. Geros jautrumo tyrimo su agaro difuzijos bandymu sąlygos. Rev Chil užkrėsti, 2002 m. 19 (2): 77-81
  4. Difco Francisco Soria Melguizo laboratorija. Müeller Hinton agaras su 5% avių krauju. 2009 m.: Http://f-soria.es
  5. BD Müeller Hinton II Agar laboratorija. 2017. Yra: .bd.com
  6. Laboratorijos Britanija. „Müeller Hinton“ agaras. 2015 m. Galima rasti adresu: britanialab.com
  7. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologinė diagnostika. 5th ed. Redakcija Panamericana S.A. Argentina.
  8. Martínez-Rojas D. Betalactamasas tipas AmpC: bendrieji ir fenotipinio aptikimo metodai. Soc. Ven. Mikrobiolis. 2009 m. 29 (2): 78-83. Galima rasti adresu: scielo.org.
  9. Perozo A, Castellano M, Ling E, Arraiz N. Fenotipinis metallobetalaktamazių aptikimas klinikiniuose izoliatuose Pseudomonas aeruginosa. Kasmera, 2012 m. 40 (2): 113-121. Galima rasti adresu: scielo.org.