Agaro LIA (lizino geležies) pamatas, paruošimas ir naudojimas



The LIA agaras (Lizino geležis) yra biocheminis tyrimas, naudojamas identifikuoti Enterobacteriaceae šeimos bakterijas. Šią terpę sukūrė „Edwards“ ir „Fife“, remdamosi „Falkow“ formule.

Iš pradžių šis bandymas buvo sultinys, kuriame yra peptonų, mielių ekstrakto, gliukozės, L-lizino, bromkrezolio violetinės ir distiliuoto vandens. „Edwards“ ir „Fife“ pridėjo agaro agaro, geležies amonio citrato ir natrio tiosulfato.

Bandymas iš esmės apima fermento lizino dekarboksilazės buvimą, galinčią reaguoti su aminorūgšties L-lizino karboksilo grupe. Aminorūgšties dezaminacija taip pat gali atsirasti dėl fermento lizino deaminazės.

Be to, terpės sudėtis leidžia parodyti kai kurių bakterijų genų gebėjimą gaminti vandenilio sulfidą. Galiausiai, taip pat galima stebėti, ar viduryje nėra dujų, ar ne.

Indeksas

  • 1 Fondas
    • 1.1. Peptonai ir mielių ekstraktas
    • 1.2 Gliukozė
    • 1,3 L-lizinas
    • 1.4 pH rodiklis (bromkrezolio violetinė spalva)
    • 1.5 Amonio geležies citratas ir natrio tiosulfatas
  • 2 Bandymo aiškinimas
    • 2.1 Lizino dekarboksilinimas
    • 2.2 Lizino dezaminavimas
    • 2.3 Vandenilio sulfido (H2S) gamyba
  • 3 Rezultatų įrašai
  • 4 Paruošimas
  • 5 Naudojimas
  • 6 Nuorodos

Fondas

Peptonai ir mielių ekstraktas

Kaip ir daugelyje kultūrų, geležies lizino agare yra komponentų, kurie suteikia bakterijų augimui reikalingų maistinių medžiagų šaltinį. Šiuos komponentus sudaro peptonai ir mielių ekstraktas.

Gliukozė

Be to, šis agaras turi fermentuojamą angliavandenių gliukozę. Yra žinoma, kad visos Enterobacteriaceae šeimos bakterijos fermentuoja gliukozę.

Šis žingsnis yra labai svarbus, nes jis bus atsakingas už terpės rūgštinimą, būtiną lizino dekarboksilazės, jei jos yra, veikimo sąlytį su jo substratu..

Kai kuriose bakterijų gentyse galima stebėti dujų gamybą dėl gliukozės fermentacijos.

Dujos yra įrodomos, kai vamzdyje yra agaro išstūmimas, paliekant tuščią erdvę vamzdelio apačioje arba sutraiškant terpę dviem ar daugiau dalių..

L-lizinas

Kai lizinas dekarboksilinamas, susidaro diaminas (kadaverinas) ir anglies dioksidas.

Dekarboksilinimas vyksta dalyvaujant piridokso fosfato koenzimui. Ši reakcija yra negrįžtama.

PH indikatorius (bromkrezolio violetinė)

Visi pH pokyčiai, atsiradę terpėje skirtingomis reakcijomis, nustatomi pagal bromkrezolio violetinės pH indikatorių.

Šia prasme, kai yra rūgštėjimas, terpė tampa geltona, o kai yra šarminė medžiaga, terpė grįžta į pradinę violetinę arba violetinę spalvą.

Kai lizino deaminacija atsiranda dėl lizino deaminazės fermento, ant paviršiaus susidaro rausvos spalvos, būdingos Proteus, Providencia ir kai kurioms Morganella rūšims..

Taip yra dėl to, kad deaminacijos proceso metu susidaro alfa-keto-karbo rūgštis, kuri reaguoja su amonio citratu, dalyvaujant deguoniui, kuris sukelia aukščiau minėtą spalvą..

Amonio geležies citratas ir natrio tiosulfatas

Kita vertus, vandenilio sulfido gamybos bakterijas patvirtins natrio tiosulfatas (sieros šaltinis) ir geležies amonio citratas, kuris yra H kūrėjas.2S.

Bakterijos, turinčios tiosulfato reduktazės fermentą, gali veikti sumažindamos esamas natrio tiosulfatas, sudarant sulfitą ir vandenilio sulfidą (H2S).

Pastarasis yra bespalvis dujas, bet, reaguojant su geležies druska, susidaro metalo geležies sulfidas, kuris yra netirpus junginys (matomas juodas nuosėdos)..

Tačiau H formavimo pajėgumas2S su šia terpe nėra labai patikima, nes kai kurios neigiamos lizino dekarboksilazės bakterijos, galinčios gaminti H2S nesukurs juodų nuosėdų, nes terpės rūgštingumas trukdo. Todėl rekomenduojama patikrinti su kitomis priemonėmis, kuriose yra geležies.

Bandymo aiškinimas

Lizino dekarboksilinimas

Vamzdžiai turi būti skaitomi pasibaigus 24 valandų inkubacijai, priešingu atveju kyla rizika, kad reakcija bus klaidingai interpretuojama, pranešant apie klaidingus neigiamus rezultatus.

Reikia nepamiršti, kad pirmoji reakcija bus gliukozės fermentacija, todėl visi vamzdžiai po 10–12 val..

Jei inkubacijos laikotarpio pabaigoje (24 val.) Stebimas geltonas arba violetinis paviršius, reakcija yra neigiama. Purpurinė paviršiaus spalva atitinka terpės šarminimą naudojant peptonus.

Teigiama reakcija yra ta, kurioje vamzdžio dugnas ir paviršius yra visiškai purpurinės, ty grįžta į pradinę spalvą.

Todėl, kuris nustato bandymo teigiamumą, yra terpės pagrindas arba apačia. Jei kyla abejonių dėl spalvos, galite ją palyginti su neužkrėstu LIA mėgintuvėliu.

Lizino dezaminavimas

Vamzdis, įrodantis lizino deaminaciją, turės rausvai rudą paviršių ir geltoną foną (rūgštį) arba visą rausvai rudą vamzdį..

Ši reakcija yra interpretuojama kaip neigiama lizino dekarboksilinimui, bet teigiama lizino deaminacijai..

Ši reakcija yra apibrėžta ir interpretuojama kūgyje.

Vandenilio sulfido gamyba (H. \ T2S)

Teigiama reakcija stebima juodos nuosėdos atsiradimu visoje terpėje arba jos dalyje. Paprastai tarp kūginės ribos ir pagrindo.

Jei nuosėdos atsiranda visame mėgintuvėlyje, kitose reakcijose, kurios pasireiškia terpėje, nebus.

Rezultatų įrašai

Aiškinant testą rezultatai įrašomi taip:

Pirmiausia perskaitykite kūgį, tada dugną arba taco, tada H2S ir galiausiai dujų gamyba.

Pavyzdys: K / A + (-). Tai reiškia:

  • K: šarminis sluoksnis (violetinė)
  • A: Rūgštis (geltona), ty neigiama dekarboksilinimo reakcija ir neigiama deaminacija.
  • +: Vandenilio sulfido gamyba
  • (-): Be dujų.

Paruošimas

Pasverkite 35 g lizino agaro dehidratuoto geležies ir ištirpinkite vienu litru distiliuoto vandens.

Šildykite tol, kol agaras visiškai ištirps, todėl dažnai užvirinkite jį per minutę. Paskirstykite 4 ml terpės į 13/100 mėgintuvėlių su medvilniniu dangteliu.

Sterilizuokite autoklave 121 ° C temperatūroje 15 minučių. Išimkite iš autoklavo ir leiskite pailsėti nuolydžiu būdu, kad būtų gilus pagrindas ir trumpas kūgis.

Laikyti šaldytuve 2-8 ° C. Prieš pasodindami bakterijų štamą, leiskite nudeginti.

Dehidratuotos terpės spalva yra smėlio spalvos, o terpė paruošta rausvai raudonos spalvos.

Galutinis paruoštos terpės pH yra 6,7 ​​± 0,2.

Terpė tampa geltona, kai pH yra lygus arba mažesnis kaip 5,2, ir purpurinė, esant pH 6,5.

Naudojimas

Šis bandymas kartu su kitais biocheminiais bandymais naudojamas identifikuoti bacilius iš Enterobacteriaceae šeimos..

Terpė sėjama tiesia kilpa arba adata, vienas arba du štampai yra pagaminti į vamzdžio dugną, o tada terpės paviršius yra cinkuotas..

Jis inkubuojamas 24 valandas 35-37 ° C temperatūroje aerobioze. Jei reikia, jis paliekamas inkubuoti dar 24 valandas.

Daugiausia naudinga atskirti neigiamas Citrobacter laktozės rūšis Salmonellas sp.

Nuorodos

  1. Mac Faddin J. (2003). Biocheminiai klinikinės reikšmės bakterijų identifikavimo tyrimai. 3-asis red. Redakcinė Panamericana. Buenos Airės Argentina.
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologinė Bailey & Scott diagnozė. 12 red. Redakcija Panamericana S.A. Argentina.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologinė diagnostika. 5th ed. Redakcija Panamericana S.A. Argentina.
  4. Laboratorijos Britanija. Lizino geležies agaras. 2015 m. Galima rasti adresu: britanialab.com
  5. BD laboratorijos BBL lizino geležies agaras. 2007 m
  6. Valtek Laboratories Medium L.I.A. 2009. Galima rasti adresu: andinamedica.com