Agaro Hektoeno pamatas, paruošimas ir naudojimas



The Hektoen agaras arba enterinis Hektoen agaras yra kieta, selektyvi ir diferencinė kultūros terpė. Jis buvo sukurtas Hektoeno institute, karaliui ir Metzgersui, siekiant išskirti Shigella ir Salmonella genties enteropatogenines bakterijas..

Ši terpė susideda iš proteozės peptono, mielių ekstrakto, tulžies druskų, laktozės, sacharozės, salicino, natrio tiosulfato, natrio chlorido, geležies citrato, amonio citrato, bromtimolio mėlynos, rūgšties fuksino ir agaro. Ši formulė leidžia išskirti Šigella ir Salmonella gentis nuo kitų bakterijų, galinčių augti šioje terpėje.

Nors yra ir kitų priemonių, turinčių tokią pačią funkciją kaip ir „Hektoen“ agaras, tai yra didesnė pranašumas, palyginti su kitomis priemonėmis, ypač kai norite atgauti Shigella rūšis.

Abiejų rūšių gentys sukelia sunkias virškinimo trakto problemas žmonėms dėl užteršto maisto vartojimo; todėl perdavimas yra išmatos - burnos. Štai kodėl Hektoen agaro naudojimas dažniausiai nurodomas išmatose ir maisto mėginiuose..

Indeksas

  • 1 Fondas
  • 2 Paruošimas
  • 3 Naudokite
  • 4 Kokybės kontrolė
  • 5 Apribojimai
  • 6 Nuorodos

Fondas

Hektoen agaro sudėtyje yra peptonų ir mielių ekstrakto kaip maistinių medžiagų šaltinis, užtikrinantis esminius mikrobiologinio vystymosi elementus..

Tačiau ji taip pat turi tulžies druskų, kurios veikia slopindamos kai kurių bakterijų, ypač gramteigiamų ir kai kurių gramų neigiamų, augimą. Dėl šios priežasties ji laikoma selektyvia terpe.

Kita vertus, Hektoen agaras yra diferencinė terpė. Šią savybę lemia fermentuojamų angliavandenių, tokių kaip laktozė, sacharora ir salicinas, buvimas kartu su pH indikatoriaus sistema, atstovaujama bromtimolio mėlyna ir rūgštine fuchsin..

Visos bakterijos, galinčios augti šioje terpėje, kuri nepriklauso Salmonella ir Shigella gentims, vystys lašišų ar apelsinų kolonijas, išskyrus Proteus gentį. Taip yra dėl to, kad fermentuojamas vienas ar keli esami angliavandeniai, kurie rūgština terpę, todėl pH indikatorius sukasi.

Savo ruožtu „Shigella“ ir „Salmonella“ gentys negali fermentuoti jokių angliavandenių, naudojant energijos šaltinį tik peptonams, kurie šarminia aplinką, todėl jos kolonijos yra mėlyna-žalia.

Be to, šioje terpėje galima išskirti bakterijas, galinčias sudaryti vandenilio sulfidą (bespalvės dujos). Natrio tiosulfatas veikia kaip sieros šaltinis, o geležies citratas yra atskleidžiantis agentas. Abu junginiai leidžia sukurti juodos geležies sulfido nuosėdas, kurios parodo reakciją.

Juodosios nuosėdos kolonijos centre su permatoma žolė suteikia žuvų akių išvaizdą. Ši charakteristika rodo Salmonella genties buvimą.

Galiausiai natrio chloridas išlaiko osmotinę pusiausvyrą ir agaras suteikia kietai nuosekliai terpei.

Paruošimas

Pasverkite 76 g dehidratuotos terpės ir ištirpinkite vienu litru distiliuoto vandens. Stipriai maišykite mišinį ir palikite 10–15 minučių. Jis gali būti šildomas ir virinamas, suteikiant sukamuosius judesius, kol visiškai ištirps. Ši terpė nėra autoklavuota.

Kai terpė pasiekia maždaug 45 ° C temperatūrą, 20 ml tūrio tiesiai įpilama į sterilius Petri lėkšteles..

Agarui leidžiama sukietėti. Tuo metu jie yra paruošti naudojimui. Patartina juos nedelsiant naudoti. Jei jie neįmanoma, jie turi būti laikomi šaldytuve, kol jie bus naudojami.

Prieš pasodinant juos į kambario temperatūrą, lėkštelės turi būti nuimamos anksti iš šaldytuvo.

Terpės pH turi būti 7,5 ± 0,2. Dehidratuotos terpės spalva yra violetinė ir paruošta rusvai žalia.

Naudokite

Rekomenduojama naudoti „Hektoen“ agarą, norint ieškoti Shigella ir Salmonella genties bakterijų išmatose ir maisto mėginiuose..

Šių bakterijų išskyrimo galimybė labai padidėja, jei mėginys anksčiau buvo praturtintas specialiomis sultimis, pvz., Selenito sultiniu, selenito cistino sultiniu, tetrationato sultiniu ir tt.

Inokuliatas turi būti stiprus, o sėklai atliekami srovėmis. Plokštelės inkubuojamos 37 ° C temperatūroje 24–48 valandas aerobioze.

Inkubacija rekomenduojama 48 valandas, nes kolonijų savybės aiškesnės ir diferenciacijos yra aiškesnės.

Kokybės kontrolė

Siekiant atlikti šios terpės kokybės kontrolę, naudojami sertifikuoti bakterijų kamienai, tokie kaip: Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Shigella flexneri ATCC 12022 ir Shigella sonnei ATCC 25931.

Tikėtini rezultatai yra šie: Salmonella typhimurium ir. \ T  Salmonella enteritidis jie turi sukurti žalias-mėlynas kolonijas su juodu centru arba be jo. Nors „Shigella“ rūšys augs kaip mėlynai žalios kolonijos.

Taip pat galite įtraukti Escherichia coli ATCC 29212, Proteus mirabilis, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Enterococcus faecalis ATCC 29212 ir Staphylococcus aureus ATCC 25923.

Tokiais atvejais stebimos savybės yra šios: E. coli ir K. pneumoniae Šioje terpėje jie sukurs lašišų-oranžinių kolonijų, kurių aplinkoje yra tos pačios spalvos nuosėdos. Tuo tarpu „Proteus“ sukurs mėlynai žalias kolonijas su juodu centru arba be jo.

Nors S. aureus ir  E. faecalis kartais turi būti slopinamas E. faecalis sugeba augti kaip geltonos kolonijos, labai mažos.

Kita vertus, kadangi ši terpė nėra sterilizuojama autoklave, svarbu įvertinti terpės sterilumą. Todėl kiekviena paruošta partija turi būti inkubuojama nuo vienos iki dviejų plokštelių be inokuliavimo 37 ° C temperatūroje 24 valandas aerobioze..

Akivaizdu, kad ant plokštės nėra jokio augimo.

Apribojimai

-Proteus rūšys gali išsivystyti šioje aplinkoje, o jų kolonijų savybės gali būti painiojamos su Salmonella ar Shigella rūšimis. Dėl šios priežasties bet kuri įtartina kolonija turi būti patvirtinta biocheminiais tyrimais.

-Šią terpę reikia naudoti kartu su kitais mažiau selektyviais agarais, nes jei ieškomas mikroorganizmas randamas mažomis koncentracijomis, jis gali nesukurti šioje terpėje.

-Negalima perkaitinti jo paruošimo metu, nes pernelyg didelė šiluma keičia terpės sudėtį.

-Neįprastai laktozės fermentacijos salmonelių kolonijos gali pasirodyti nepastebimos.

Nuorodos

  1. Vikipedijos kūrėjai. Hektoen enterinis agaras. Vikipedija, „Laisvas enciklopedija“. 2019 m. Kovo 13 d., 23:38 UTC. Galima rasti: .wikipedia.org / Prieiga prie 2019 m. Kovo 16 d.
  2. BD laboratorijos BD Hektoen enterinis agaras (HE Agar). 2013 m
  3. Laboratorijos Britanija. Hektoen enterinis agaras. 2015 m. Galima rasti adresu: britanialab.com
  4. Difco Francisco Soria Melguizo laboratorijos. Agaro Hektoeno agaras. Galima rasti adresu: f-soria.es
  5. Difco & BBL vadovas, Hektoen enterinis agaras. 2. leidimas. Yra: bd.com/europe