Agaro Endo pamatas, paruošimas ir naudojimas



The Endo agaras arba vidutinė Endo yra kieta, diferencinė kultūros terpė, turinti tam tikrą selektyvumą. 1904 m. „Endo“ sukūrė originalią formulę, skirtą laktozės fermentavimo bakterijoms atskirti nuo nefermentuojančių bakterijų. Pradžioje jis buvo skirtas izoliuoti Salmonella typhi, bet vėliau vidutinio tikslo tikslas buvo ieškoti koliformų.

Buvo išlaikytas „Endo“ agaro principas, tačiau jo sudėtis per daugelį metų buvo atlikta nesuskaičiuojant. Šiuo metu terpė susideda iš peptidų suskaidyto gyvūno audinio, laktozės, dikalio kalcio fosfato, natrio sulfito, bazinio fuksino ir agaro..

Pagrindinė terpės paskirtis yra susijusi su gramnegatyvių bacilų, priklausančių Enterobacteriaceae šeimai ir kitoms artimoms šeimoms, išskyrimui ir diferenciacijai..

Ilgą laiką jis buvo naudojamas aptikti koliformines medžiagas vandens, pieno ir maisto mėginiuose, tačiau šiandien šios terpės naudojimas buvo perkeltas iš kitų panašių funkcijų. Tačiau kai kurios mikrobiologijos laboratorijos naudoja šį agarą Enterobacteriaceae išskyrimui iš klinikinės kilmės mėginių.

Indeksas

  • 1 Fondas
  • 2 Paruošimas
    • 2.1 Endo agaras
    • 2.2 agaro m-Endo variantas
  • 3 Naudokite
  • 4 Kokybės kontrolė
  • 5 Apribojimai
  • 6 Nuorodos

Fondas

Endo agare yra peptonų, kurie tarnauja kaip amino rūgščių, azoto, anglies ir energijos šaltinis, reikalingi nereikalingų mikroorganizmų augimui..

Kita vertus, šiek tiek selektyvus agaro pobūdis yra gaunamas pridedant natrio sulfito ir bazinio fuksino; abu komponentai iš dalies arba visiškai slopina daugelio gramteigiamų bakterijų vystymąsi.

Diferencialinį pobūdį lemia fermentuojamų angliavandenių buvimas, kuris šiuo atveju yra laktozė ir bazinė fuksinas, kuris taip pat yra pH rodiklis..

Gram-neigiamos bakterijos, kurios auga ant šio agaro ir gali fermentuoti laktozę, sudarys stiprios rausvos kolonijos; yra. \ t Escherichia coli tamsiai raudonos kolonijos su žaliu metaliniu blizgesiu. Taip yra dėl didelio angliavandenių fermentacijos rūgščių.

Pažymėtina, kad aplink kolonijas esanti terpė taip pat tampa stipri rožine spalva. Nors nekarmentuojančios laktozės graminės neigiamos bacilės sudaro šviesiai rožines kolonijas, panašias į vidutines arba bespalvesias.

Dikalio vandenilio fosfatas subalansuoja terpės pH ir agaras yra komponentas, užtikrinantis kietą konsistenciją.

Paruošimas

Endo Agar

Pasverkite 41,5 g dehidratuotos terpės ir ištirpinkite 1 litru distiliuoto vandens. Mišinys dažnai kaitinamas, kol bus visiškai ištirpinta terpė. 15 minučių sterilizuokite autoklave 121 ° C temperatūroje esant 15 lb slėgiui.

Išimant iš autoklavo, leiskite atvėsti iki maždaug 45-50 ° C temperatūros, sumaišykite mišinį, kad homogenizuotumėte prieš patiekiant. Į sterilius Petri lėkšteles supilkite 20 ml.

Prieš laikydami šaldytuve, leiskite plokštelėms sukietėti, apversti ir laikyti dėžutėje arba apvynioti tamsiame popieriuje. Labai svarbu apsaugoti paruoštą terpę nuo tiesioginės šviesos. Rekomenduojama taikyti tikslią sumą, kuri bus reikalinga.

Jei laikoma šaldytuve, prieš naudojimą jos turi būti grūdintos.

Terpės pH turi būti nuo 7,2 iki 7,6, o paruoštos terpės spalva yra šviesiai rožinė..

Variantas agar m-Endo

Yra dar viena Endo agaro versija (m-Endo), atitinkanti McCarthy, Delaney ir Grasso formulę, kurioje yra daugiau junginių ir skiriasi jų paruošimo būdu..

Šis variantas apima: laktozę, triptozę, fermentinį kazeino virškinimą, fermentinį gyvūnų audinių virškinimą, natrio chloridą, kalio fosfatą, natrio sulfitą, mielių ekstraktą, kalio fosfato monobazinį, bazinį fuksiną, natrio dezoksikolatą, laurilo sulfatą natrio ir agaro.

Šiuo atveju sveriame 51 g dehidratuotos terpės ir suspenduojamas 1 litru distiliuoto vandens, kuriame yra 20 ml etanolio..

Truputį kaitinkite, kol terpė visiškai ištirps. Negalima perkaisti ir sterilizuoti autoklave. Kai mišinys yra homogeniškas, tarnauti steriliuose Petri lėkštelėse ir leisti sukietėti.

Naudokite

Kai kuriose šalyse jis vis dar naudojamas skaičiuoti bendrą ir išmatuotą koliforminę formą vandens ir maisto mėginiuose, ypač esant Escherichia coli pagrindinis išmatų taršos rodiklis.

M-Endo agarą rekomenduoja JAV visuomenės sveikatos asociacija (APHA) dezinfekavimo ir nuotekų valymo programų stebėsenai ir kontrolei, taip pat geriamojo vandens kokybės įvertinimui..

Dažniausiai naudojamas metodas yra membraninis filtravimas, po to, kai mėginys sodrinamas 2–4 val..

Jis taip pat gali būti naudojamas kaip EMB agaro pakaitalas maisto ir vandens mikrobiologinėje analizėje pagal labiausiai tikėtiną skaičiavimo metodą (NMP), ypač visame patvirtinimo etape, siekiant patvirtinti, kad yra. E. coli iš drumstų EB sultinių.

Kokybės kontrolė

Siekiant įvertinti paruoštos Endo agaro partijos kokybę, sėjami žinomi arba sertifikuoti kontroliniai kamienai.

Tarp štamų, kurie gali būti naudojami šiam tikslui, yra: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 11775, Enterobacter cloacae ATCC 13047, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella flexneri ATCC 12022, Proteus mirabilis ATCC 14153 ir Enterococcus faecalis ATCC 11700.

Štamai sėjami išeikvojant ir inkubuojami 37 ° C temperatūroje 24 valandas aerobioze.

Laukiami rezultatai:

  • Į Escherichia coli: kolonijos stiprios raudonos, su metaliniu blizgesiu.
  • Į E. cloacae ir K. pneumoniae kolonijos turėtų būti rožinės gleivinės.
  • S atveju. typhimurium, S. flexneri ir P. mirabilis kolonijos paprastai yra šviesiai rausvos arba bespalvės.
  • Galiausiai, E. faecalis tikimasi, kad jis bus iš dalies slopinamas, todėl jo augimas turėtų būti silpnas, kai labai mažos stiprios rožinės kolonijos.

Apribojimai

-Endo terpė turi mažą selektyvinę galią, todėl gali būti, kad kai kurie gramteigiami mikroorganizmai, tokie kaip Staphylococcus, Enterococcus ir net mielės, gali augti.

-Kitos bakterijos, nepriklausančios Enterobacteriaceae šeimai, gali išsivystyti šioje terpėje, pavyzdžiui, Pseudomonas sp ir Aeromonas sp. Šių padermių savybės yra bespalvės nereguliarios kolonijos.

-Ši paruošta terpė yra labai jautri šviesai, todėl ilgalaikis sąlytis su juo pablogina indikatorių sistemą, negrįžtamai sugadina terpę.

-Laikoma, kad terpės komponentai yra kancerogeniniai, todėl reikia vengti tiesioginio kontakto.

-Dehidratuota terpė yra labai higroskopinė ir turi būti laikoma pirminėje talpykloje kambario temperatūroje, sandariai uždaryta ir sausoje aplinkoje..

Nuorodos

  1. BD laboratorijos Endo Agar. 2013 m
  2. Neogen Laboratories M Endo Agar. Pateikiama adresu: foodsafety.neogen.com
  3. „Agaro Endo“. Vikipedija, laisva enciklopedija. 2017 m. Rugsėjo 7 d., 08:27 UTC. Vasario 28 2019, 22:55. Yra: en.wikipedia.
  4. MercK laboratorija. Endo agaras 2019. Galima rasti adresu: merckmillipore.com
  5. Laboratorijų techninis lapas. M -Endo Agar LES. 2015 m. Galima rasti adresu: liofilchem.net