Agaro EMB pamatas, paruošimas ir naudojimas



The EMB agaras yra selektyvi ir diferencinė kietosios kultūros terpė, naudojama gramnegatyvių bacilių, daugiausia Enterobacteriaceae šeimos, ir kitų nereikalingų gramnegatyvių bacilių izoliavimui. Taip pat žinomas akronimas EAM, kuris reiškia eozino-metileno mėlyną.

Šią terpę sukūrė Holt-Harris ir Teague 1916 m. Jame yra peptono, laktozės, sacharozės, dikalio fosfato, agaro, eozino, metileno mėlynos ir vandens. Jis labai panašus į „MacConkey“ agarą, ypač jei naudojamas EMB agaras, modifikuotas Levine, kuriame nėra sacharozės..

Tiesą sakant, kiekviena laboratorija nusprendžia, ar ji veikia su vienu ar kitu, nes jie atlieka tą pačią funkciją, nors biochemiškai jie yra skirtingi.

Tai netgi tas pats trūkumas, kaip ir klasikinis „MacConkey“ agaras, susijęs su „Proteus“ genties produkcijos apipjaustymu. Todėl, norint išvengti šio reiškinio, agaro koncentraciją galite padidinti iki 5%..

Indeksas

  • 1 Fondas
    • 1.1. Atrankinis
    • 1.2 Diferencialas
  • 2 Paruošimas
  • 3 Naudojimas
  • 4 Kokybės kontrolė
  • 5 Galutinės pastabos
  • 6 Nuorodos

Fondas

Selektyvus

EMB agaras yra subtiliai selektyvus, nes jame yra anilininių dažiklių (eozino ir metileno mėlynos spalvos), kurie veikia kaip inhibitoriai, užkertantys kelią daugelio gramteigiamų bakterijų ir kai kurių sunkių gramnegatyvių bacilų augimui..

Tačiau šis agaras turi trūkumą, kad kai kurios gramteigiamos bakterijos gali pasipriešinti inhibitorių buvimui ir augti kaip nedidelės bespalvės kolonijos, pvz. Enterococcus faecalis ir kai kurie Staphylococcus.

Taip pat galite auginti tam tikras mieles, pvz „Candida albicans“ kompleksas, Tai suteiks labai mažų rožinių kolonijų. Iš šios mielės galima sukurti net chlamidosporus, jei mėginys sėjamas giliai.

Diferencialas

Kita vertus, EMB agaras taip pat yra diferencinė terpė, nes šie dažai kartu (eozinas ir metileno mėlynas) pasižymi nuosėdų susidarymu rūgštiniame pH, todėl jie yra jų gamybos rodikliai..

Todėl silpnai fermentuojančios laktozės arba sacharozės bakterijos gamina violetines kolonijas per 24–48 valandas. Pavyzdžiui, Klebsiella, Enterobacter ir Serratia gentys.

Tos bakterijos, kurios stipriai fermentuoja laktozę, pvz Escherichia coli, arba sacharozė, kaip Yersinia enterocolitica o Proteus penneri, sudaro žalsvai juodą nuosėdą, suteikiančią šių rūšių metalo blizgesį.

Pažymėtina, kad jei naudojama EMB levino terpė (be sacharozės), Yersinia enterocolitica ir Proteus penneri jie gamins skaidrias kolonijas.

Bakterijos, kurios fermentuoja laktozę ar sacharozę, maitinamos peptonų, kurie suteikia bakterijų vystymuisi reikalingas aminorūgštis ir azotą, ir gamina skaidrias kolonijas. Pavyzdžiui, Salmonella ir Shigella gentys, be kita ko.

Taip pat svarbu pažymėti, kad „Acinetobacter“ gentis gali pateikti mėlynos levandų kolonijas, nors tai nėra laktozės fermentas, o taip pat sacharozė, tačiau jos savybė yra fiksuoti metileno mėlyną savo ląstelių sienelėje. Taip gali atsitikti ir su kitomis oksidacinėmis bakterijomis.

Paruošimas

Originali dehidratuota terpė yra šviesiai smėlio spalvos.

Norint paruošti šią auginimo terpę, 36 gramus dehidratuotos terpės reikia pasverti ir suspenduoti buteliuke, kuriame yra vienas litras distiliuoto vandens..

Po to, kai mišinys buvo paliktas 5 minutes po poilsio, atneškite fiolą į šilumos šaltinį, energingai ir nuolat maišant, kol jis užvirs ir visiškai ištirps..

Vėliau ištirpinta auginimo terpė turi būti sterilizuojama naudojant autoklave 121 ° C temperatūroje 15 minučių.

Pasibaigus laikui, jis pašalinamas iš autoklavo ir trumpam paliekamas. Tada kiekvienoje sterilioje Petri lėkštelėje patiekiama net karšta (45–50 ° C) nuo 15 iki 20 ml agaro. Laikmena turėtų būti mėlyna lakmus.

Po to, kai patiekiami plokštelės, paliekama šiek tiek neuždengta, kol agaras atvės. Tada jie uždengiami ir leidžiama visiškai sukietėti. Vėliau jie užsakomi apverstos plokštelės laikiklyje ir laikomi šaldytuve (8 ° C), kol jie bus naudojami.

Kad būtų išvengta užteršimo, ši procedūra pageidautina atlikti laminarinio srauto gaubte arba prieš Bunseno degiklį.

Svarbu nepamiršti, kad kiekvienas komercinis namas nurodys sveriamą kiekį, kad būtų galima paruošti auginimo terpę.

Galutinis terpės pH turi būti 7,2 ± 0,2

Naudojimas

Ši terpė naudojama šlapimui ir išmatoms ar bet kokio tipo klinikiniams mėginiams sėti, ypač jei įtariama, kad yra nereikalingų gramnegatyvių bacilių, tokių kaip Enterobacteriaceae šeimai priklausančios bakterijos, kurios labai gerai auga šioje terpėje.

Shigella ir Salmonella genties enteropatogeninės bakterijos išsiskiria bespalvėmis arba šiek tiek gintarinėmis kolonijomis..

Taip pat auga ir kiti fermentuojantys laktozės bacilai, pvz., Aeromonas, Pseudomonas, Acinetobacter..

Be to, ši terpė yra labai naudinga maisto ir vandens mikrobiologinei analizei, nes ji idealiai tinka visai patvirtinančiai koliformų nustatymo fazei, t. Y. E. coli iš drumstų EB sultinių, iš labiausiai tikėtino skaičiavimo metodo (NMP).

Kokybės kontrolė

Siekiant patikrinti, ar naujai kultivuota terpė gerai veikia, kontrolės padermes galima sodinti, kad būtų galima stebėti kolonijų charakteristikas ir patikrinti, ar jie atitinka numatytas sąlygas..

Dėl to ATCC padermės arba gerai identifikuoti štamai E. coli, Enterobacter aerogenes, Klebsiella sp, Salmonella typhimurium, Shigella flexneri, Pseudomonas aeruginosa ir kai kurios Gram-teigiamos bakterijos S. aureus.

Tikimasi, kad E. coli Sukurkite gerai išvystytas melsvai juodas kolonijas su žaliu metaliniu blizgesiu. Tol, kol, Enterobacter aerogenes ir Klebsiella sp jie turi suteikti gerai išvystytas gleivinės kolonijas melsvai juodos.

Savo ruožtu, Salmonella typhimurium ir Shigella flexneri, jie turi sukurti didelius bespalvius arba šiek tiek gintaro spalvos kolonijas.

Galiausiai žanras Pseudomonas aeruginosa ji auga kaip bespalvės netaisyklingos spalvos kolonijos, o gramteigiamos bakterijos turi būti visiškai slopinamos arba augančios taupiai su labai mažomis kolonijomis..

Galutinės pastabos

Kartais sterilizacija sumažina metileno mėlyną, stebint oranžinę terpę. Kad metileno mėlynas oksiduotųsi ir purpurinė spalva atsigautų, ji turi būti švelniai sumaišoma iki spalvos atsigavimo.

Be to, po sterilizavimo gali nusodinti dažus, todėl prieš patiekiant Petri lėkštelėse, jis turi būti gerai sumaišytas.

Nuorodos

  1. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B ir Velázquez O. 2009. Maisto produktų mikrobiologinės analizės metodai. 2nd ed. Chemijos fakultetas, UNAM. Meksika.
  2. Carranza C, León R, Falcón N, Neumann A, Kromm C. \ t Escherichia coli Potencialiai patogeniniai vištienos broilerių izoliatai iš naminių paukščių ūkių Peru. Rev. veterinarijos gydytojas. Peru 2012 23 (2): 209-219. Galima rasti adresu: scielo.org.
  3. Laboratorijos Conda S.A. Eozino agaras ir metileno mėlynas. 2010. Galima rasti adresu: condalab.com
  4. Laboratorijos Britanija. „Levine E.M.B“ (su „Eosin“ ir „Methylene Blue“) 2011. Galima rasti adresu: britanialab.com
  5. BD laboratorijos BD EMB agaras (Eozino metileno mėlynas agaras), modifikuotas. 2013 m
  6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologinė diagnostika. (5-asis red.). Argentina, Redakcijos Panamericana S.A..
  7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Bailey & Scott mikrobiologinė diagnozė. 12 red. Argentina Panamericana S.A Redaktorius