Agaro CLED pagrindas, naudojimas ir paruošimas



The CLED agaras (Cistino-laktozės-elektrolitų nepakankamas) yra diferencinė kieta kultūros terpė, naudojama šlapimo takų infekcijų diagnozei. Kultūrinės terpės sudėtis yra skirta geram šlapimo patogenų augimui ir idealiai tinka kolonijas sudarančių vienetų (CFU) kiekybiniam nustatymui..

CLED kultūros terpė yra neselektyvi, nes jame gali augti gramnegatyvūs ir taip pat ir gramteigiami mikroorganizmai. Tačiau tai nėra problema, nes daugumą šlapimo takų infekcijų sukelia vienas mikroorganizmo tipas.

Polimikrobinių infekcijų atveju galima gauti 2 ar 3 skirtingų bakterijų, tačiau tai yra labai reti ir dažniausiai užteršti mėginiai.

Tarp gramnegatyvių bakterijų, kurios gali augti šioje terpėje, yra šeimos šeimos Enterobakterijos ir kitų enterinių bakterijų, kurių uropatogenai dažniausiai yra išskiriami šlapimo mėginiuose, yra šie: Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Morganella morganii, Pseudomonas aeruginosa, be kita ko.

Be to, tarp gramteigiamų bakterijų, kurios gali augti šioje terpėje, yra Staphylococcus aureus, Staphylococcus saprophyticus, Enterococcus faecalis, Streptococcus agalactiae, Corynebacterium sp, Lactobacillus sp. ir jie gali net augti mieles, kaip ir kompleksas Candida albicans.

Tačiau dėl cheminės terpės sudėties, ji neleidžia augti kai kurių sudėtingų virškinimo patogenų, pvz. Neisseria gonorrhoeae, Gardnerella vaginalis, be kita ko.

Indeksas

  • 1 CLED agaro pamatas
  • 2 CLED agaro (Bevis) įkūrimas
  • 3 Naudojimas
    • 3.1 Šlapimo mėginių sėjimas
    • 3.2 Vertimas žodžiu
    • 3.3 Identifikavimas
  • 4 Paruošimas
  • 5 Nuorodos

CLED agaro pamatas

CLED kultivavimo terpėje yra mėsos ekstraktas, kazeino kasos hidrolizatas ir želatinos hidrolizatas. Jie suteikia maistines medžiagas, skirtas vystyti nereikalingas bakterijas.

Jame taip pat yra cistino, aminorūgšties, leidžiančios augti koliformines formas, kurios skiriasi savo mažu dydžiu.

Taip pat laktozėje yra fermentuojamų angliavandenių, todėl ši terpė yra diferencinė; sugebėti atskirti fermentuojančias bakterijas nuo nerauginamos laktozės.

Fermentuojančios bakterijos vidutinės pH verčiasi rūgščių gamyboje, vystydamos geltonas kolonijas, o nefermentuojančios bakterijos nesukelia pokyčių terpėje, todėl imasi pradinio agaro, žalios spalvos spalvos.

Fermentacijos reakcija atskleidžiama dėl pH indikatoriaus, kuris šioje terpėje yra bromtimolio mėlyna.

Kita vertus, maža terpės koncentracija terpėje slopina tipišką invazinį genties augimą Proteus, vadinamas swarming efektu. Tai sukuria pranašumą kitų priemonių atžvilgiu, nes tai leidžia skaičiuoti UFC, įskaitant, jei yra „Proteus“ gentis.

Tačiau maža elektrolitų koncentracija slopina kai kurių rūšių genties augimą Shigella, tai yra kitokių priemonių trūkumas.

CLED agaro (Bevis) pagrindas

Šią terpę padarė variantas arba modifikacija, kurią sukūrė Bevis, kuri į pradinę kompoziciją įtraukė pradinę fuchsino rūgšties sudėtį (Andrade indikatorius). Jis veikia kartu su bromtimolio mėlyna, kad fermentuotųsi nuo nefermentuojančių bakterijų.

Skirtumas tarp įprastinės ir modifikuotos terpės yra kolonijų priimta spalva. Laktozės fermentuojančių bakterijų atveju kolonijos gauna rausvai oranžinę spalvą su rausvos arba raudonos spalvos halogenais, o nerauginamos - mėlynos pilkos..

Naudojimas

CLED agaras naudojamas tik šlapimo mėginiams sėti. Šios terpės naudojimas yra ypač dažnas Europos laboratorijose, o Amerikoje mažiau naudojamas.

Mėginių rinkimas turi atitikti tam tikrus parametrus, kad gautų patikimus rezultatus, įskaitant:

  • Negalima vartoti antibiotikų prieš imant mėginį.
  • Pageidautina, kad šlapimas būtų paimtas nuo pirmos ryto valandos, nes jis yra labiau koncentruotas, kai neįmanoma paimti mėginių invaziniais metodais.
  • Prieš imant mėginį kruopščiai nuplaukite lytinius organus.
  • Pirmąjį šlapimo srautą išmeskite ir įdėkite indą.
  • Į sterilias etiketes pažymėtas talpyklas surinkite nuo 25 iki 30 ml šlapimo.
  • Nedelsdami paimkite į laboratoriją, apsuptą ledu.
  • Jis turi būti apdorotas prieš 2 valandas arba nešaldomas 4 ° C temperatūroje ne ilgiau kaip 24 valandas.

Šlapimo mėginių sėjimas

Šlapimo mėginys turi būti atskiestas 1:50.

Skiedimui įpilkite 0,5 ml paciento šlapimo ir praskiedžiama 24,5 ml sterilaus fiziologinio tirpalo.

Išmatuokite 0,1 ml atskiesto šlapimo ir sėjama vienam paviršiui su drigalski mentele CLED terpėje. Tai yra sėjimo būdas, nurodytas kolonijų skaičiavimui. Štai kodėl jis naudojamas šlapimo mėginiuose, nes rezultatai turi būti išreikšti CFU / ml.

Norint nustatyti gautas kolonijas, atlikite šiuos veiksmus: skaičiuokite plokštelės kolonijas ir padauginkite iš 10, o vėliau - 50 kartų. Tokiu būdu gaunamas CFU / ml šlapimo kiekis.

Aiškinimas

Skaičiuojant daugiau kaip 100 000 CFU / ml -Indica šlapimo infekcijos

Skaičiuojant žemiau 1000 CFU / ml - nėra infekcijos

Skaičiuojant nuo 1000–10 000 CFU / ml-abejotinas, galimas užteršimas, pakartokite mėginių ėmimą.

Identifikavimas

CLED agare išaugintos kolonijos turėtų būti pagamintos gramais ir priklausomai nuo mikroorganizmo morfetinių savybių, atliekama tam tikra subkultūra..

Pavyzdžiui, jei tai yra gramnegatyvi bacilija, ji bus sėjama ant MacConkey agaro, kur patvirtinama laktozės fermentacija. Be to, oksidazės bandymui atlikti pridedamas maistingas agaras.

Tuo atveju, kai gramas atskleidžia teigiamus gramatinius kokius, jis gali būti subkultūruotas sūriame manitolio agare ir maistiniame agare. Pastaruoju atveju atliekamas katalazės testas. Galiausiai, jei stebimos mielės, ji bus sėjama ant Sabouraud agaro.

Daugelis laboratorijų pašalina CLED terpės naudojimą ir nori naudoti tik kraujo agarą, MacConkey ir maistinį agarą šlapimo mėginiams sėti..

Paruošimas

Buteliuke, kuriame yra vienas litras distiliuoto vandens, ištirpinkite 36,2 g CLED agaro miltelių. Po 5 min. Poilsiu, pašildykite agarą, nuolat maišant, kol virinama 1 minutę.

Tada sterilizuokite 121 ° C temperatūroje 15 minučių autoklave. Pasibaigus laikui, jis pašalinamas iš autoklavo ir leidžiama atvėsti, kol pasiekia 45 ° C temperatūrą. Vėliau kiekviename steriliame Petri lėkštelėje patiekiama 15–20 ml.

Kad būtų išvengta užteršimo, plokštelių aptarnavimo procedūra turi būti atliekama laminarinio srauto gaubte arba prieš Bunseno degiklį..

Patiekiamos plokštelės gali sukietėti, užsakomos plokštelės laikiklyje apverstos ir laikomos šaldytuve (2-8 ° C) iki naudojimo.

Galutinis paruoštos terpės pH turi būti 7,3 ± 0,2.

Nuorodos

  1. Rekomendacijos šlapimo takų infekcijos mikrobiologinei diagnozei. chil infektolis.  2001 m. 18 (1): 57-63. Galima rasti adresu: scielo.org.
  2. Panchi J. Mikrobiologinio agento, sukeliančio šlapimo infekciją, identifikavimas vidiniuose pacientuose, kuriems atliekama šlapimo pūslės kateterizacija. 2016 m. Bakalauro darbas, skirtas kreiptis dėl licencijos išdavimo klinikinėje laboratorijoje. Ambato technikos universitetas. Ekvadoras.
  3. Laboratorijos Britanija. Half CLED. Yra: britanialab.com.
  4. Renylab Laboratories Naudojimo instrukcija, CLED Agar. 2013 m. Galima rasti adresu: www.renylab.ind.br.
  5. Kultivuotos laboratorijos Mikrobiologijos pagrindinis vadovas. Galima rasti adresu: ictsl.net.
  6. „Muñoz P“, „Cercenado E“, „Rodríguez-Créixems M“, „Díaz MD“, „Vicente T“, „Bouza E.“. Prognozuojamas ir lyginamasis vertinimas. Diagnostinis mikrobiolis užkrėsti dis. 1992 m. 15 (4): 287-90.
  7. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktinė klinikinė mikrobiologija. Kadiso universitetas, 2-asis leidimas. UCA leidinių tarnyba.