Simmons citrato agaro pamatas, paruošimas ir naudojimas

The Simmons citrato agaras Tai kieta terpė, naudojama kaip biocheminis tyrimas mikroorganizmų, ypač gram-neigiamų bacilų, identifikavimui. Pradinę laikmeną sukūrė Koser 1923 m.

Koserio citratinė terpė susideda iš sultinio, kurio sudėtyje yra natrio fosfato, amonio fosfato, monokalio fosfato, magnio sulfato ir natrio citrato..

Kaip matyti, vienintelis anglies šaltinis terpėje yra citratas, o azotas yra amonio fosfatas, baltymai ir angliavandeniai, kurie yra šių elementų šaltinis, paprastai yra kitose terpėse..

Todėl toje terpėje inokuliuojama bakterija gali daugintis tik tada, jei ji gali paimti citrato anglies. Bandymas buvo teigiamas, jei terpėje buvo drumstumas, tačiau jis turėjo trūkumą, kad gali atsirasti nespecifinis drumstumas.

Ši problema buvo išspręsta Simmons pridedant agaro ir bromotimolio mėlynos spalvos į Koserio pradinę formulę. Nors šis principas yra tas pats, jis aiškinamas skirtingai.

Indeksas

• 1 Fondas
  • 1.1 Sėklos režimas
  • 1.2 Vertimas žodžiu
• 2 Paruošimas
• 3 Naudokite
• 4 Galutinės pastabos
  • 4.1 Inokuliacija
  • 4.2
  • 4.3 Spalvų intensyvumas
• 5 Nuorodos

Fondas

Kai kurios bakterijos gali išgyventi be fermentacijos arba pieno rūgšties susidarymo, reikalaujančios energijos, naudojant kitus substratus. Šiame bandyme vienintelis siūlomas anglies šaltinis yra citratas.

Bakterijos, galinčios išgyventi šiomis sąlygomis, greitai metabolizuoja citratą per alternatyvą tradiciniam būdui, naudojant trikarboksirūgšties ciklą arba citrato fermentacijos ciklą.

Citrato bakterijų katabolizmas apima fermentinį mechanizmą be koenzimo A įsikišimo. Šis fermentas yra žinomas kaip citrinazė (citrato oksaloacetato-liazė) arba citrato desmolazė. Reakcijai reikalingas dvivalentis katijonas, kuris šiuo atveju yra tiekiamas iš magnio.

Reakcija generuoja oksaloacetatą ir piruvatą, kuris po to sukelia organines rūgštis šarminio pH viduryje, susidariusį naudojant azoto šaltinį. Šios organinės rūgštys naudojamos kaip anglies šaltinis, gaminantis karbonatus ir bikarbonatus, dar labiau šarminant terpę.

Sėjos režimas

Simmons citrato terpė turi būti lengvai inokuliuojama į žuvų uodegą tiesia kilpa arba adata ir 24 valandas inkubuojama 35-37 ° C temperatūroje. Pasibaigus rezultatams, stebimi rezultatai.

Sėjama tik ant agaro paviršiaus. Nedarykite punkcijos.

Aiškinimas

Jei terpė yra originalios spalvos (žalia) ir nėra matomo augimo, bandymas yra neigiamas, bet jei terpė pasikeičia į mėlyną, tai rodo šarminių produktų buvimą, kuris nustatomas pagal pH rodiklį. Šiuo atveju bandymas yra teigiamas.

Taip atsitinka todėl, kad jei bakterija naudoja citrato anglies kiekį, ji taip pat gali priimti amonio fosfato, su kuriuo jis išskiria amoniaką, azotą, šarmindamas terpę.

Kita vertus, jei bakterijų augimas pastebimas terpėje, tačiau spalvos nekinta, bandymas taip pat turėtų būti laikomas teigiamu, nes jei augimas yra, tai reiškia, kad bakterijos gali naudoti citratą kaip anglies šaltinį, nors šiuo metu nėra pH pasikeitimo (kartais gali pasireikšti).

Jei kyla abejonių dėl galutinės spalvos aiškinimo, jis gali būti lyginamas su neužkrėsto citrato vamzdeliu.

Paruošimas

Vienam litrui vandens pasverkite 24,2 g dehidratuotos terpės. Sumaišykite ir palikite stovėti 5 minutes. Vidutiniškai tirpinkite terpę tirpinant 1 arba 2 minutes.

Patiekiama 4 ml mėgintuvėliuose ir autoklave 121 ° C temperatūroje 15 minučių. Išvažiuojant iš autoklavo, padėklo pagalba pakreipkite taip, kad agaras sukietėtų kaip fleitos smailė, turinti mažą griovelį arba apačią ir daugiau kampo.

Galutinis citrato terpės pH yra 6,9 (žalia). Ši terpė yra labai jautri pH pokyčiams.

PH 6 arba žemiau terpė tampa geltona. Bandant bakterijas, ši spalva nepastebima.

Ir esant pH 7,6 ar aukštesnei daliai, vidutinė vertė pasikeičia į intensyvų prūsų mėlyną.

Naudokite

Simmons citrato agaras naudojamas tam tikrų mikroorganizmų, ypač Enterobacteriaceae šeimos ir kitų gliukozės neturinčių fermentų, identifikavimui..

Galutinės pastabos

Simmons citrato terpė yra labai subtilus testas, nes gali būti gautas klaidingas teigiamas rezultatas.

Reikia imtis atsargumo priemonių:

Inokuliacija

Nedarykite labai storo ar pakrauto bakterinio inokuliato, nes tai gali sukelti geltonos spalvos spalvos augimą sodinimo vietoje, nepažeidžiant likusios terpės dalies, tačiau jis gali paskatinti augimą. Tas pats nereiškia bandymo teigiamumo.

Be to, storas inokuliatas gali sukelti klaidingą teigiamą rezultatą, nes iš anksto suformuoti organiniai junginiai miršta bakterijų ląstelių sienelėse gali išskirti pakankamai anglies ir azoto, kad sukeltų pH rodiklį.

Todėl idealiai tinka vietoj adatos vietoj platinos rankenos, kad nebūtų per daug medžiagos.

Pasėtas

Kita vertus, kai aptariamas atitinkamas mikroorganizmas identifikuojamas biocheminių bandymų akumuliatorius, svarbu, kad pirmasis būtų inokuliuojamo citrato bandymas, kad būtų išvengta baltymų ar angliavandenių patekimo iš kitos terpės..

Tokiomis aplinkybėmis galima gauti klaidingą teigiamą rezultatą, nes bet kuri iš šių medžiagų, kurios buvo įvestos klaidingai, bus metabolizuojamos ir sukels pH pokyčius..

Kitas būdas išvengti medžiagų nuvalymo yra sudeginti rankeną ir imtis naujo inokuliato tarp vieno bandymo ir kito.

Taip pat reikia atsižvelgti į koloniją, kad atliktumėte inokuliatą, nes reikia vengti agaro dalies ištraukti iš kultūros, iš kurios bakterijos yra, dėl anksčiau paaiškintų.

Šia prasme Matsen, Sherris ir Branson rekomenduoja prieš inokuliuojant citrato bandymą inokuliantą atskiesti fiziologiniame tirpale, kad būtų išvengta kitų anglies šaltinių perdavimo..

Spalvų intensyvumas

Turi būti atsižvelgta į tai, kad teigiamo bandymo metu susidariusios spalvos intensyvumas gali skirtis priklausomai nuo komercinio namo.

Be to, yra mikroorganizmų, kurie bando teigiamus 24 valandas, tačiau yra kitų padermių, kurioms reikia 48 valandų ar daugiau, kad pH pasikeistų..

Nuorodos

1. Mac Faddin J. (2003). Biocheminiai klinikinės reikšmės bakterijų identifikavimo tyrimai. 3-asis red. Redakcinė Panamericana. Buenos Airės Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologinė Bailey & Scott diagnozė. 12 red. Redakcija Panamericana S.A. Argentina.
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologinė diagnostika. 5th ed. Redakcija Panamericana S.A. Argentina.
4. BD laboratorijos BBL Simmons Citrate Agar Slants. 2015 m
5. Laboratorijos Britanija. Simmons Citrate Agar. 2015 m. Galima rasti adresu: britanialab.com
6. Valtek diagnostikos laboratorijos. Simmons Citrate Agar. 2016 m. Galima rasti adresu: andinamedica.com.