Agaro šokolado pagrindas, panaudojimas ir paruošimas



The šokolado agaras tai yra kieta, praturtinta, neselektyvi ir nediferencijuojanti auginimo terpė. Jis daugiausia naudojamas mikroorganizmų, reikalaujančių mitybos požiūriu, išskyrimui, nors jis gali augti bet kokio tipo bakterijas..

Štai kodėl jo naudingumas ypač didėja, kai sėjami paprastai sterilūs mėginiai, tokie kaip CSF ir jungtinis skystis. Nors jis taip pat įtrauktas į priemones, pasirinktas polimerinių mėginių sėjimui, tačiau tokiais atvejais būtina pridėti antibiotikų, kurie slopina kartu vartojamą florą.

Ši terpė yra būdinga rudos spalvos, labai panaši į šokoladą, todėl jos pavadinimas. Preparatas yra labai panašus į kraujo agarą, tik tokiu atveju kraujas turi būti šildomas, kad raudonųjų kraujo kūnelių lūžtų.

Jo paruošimas, kaip ir kraujo agaras, yra labai subtilus, nes jis lengvai užteršiamas. Dėl šios priežasties daugelis laboratorijų pageidauja įsigyti tokią terpę, kurią jau paruošė komercinės paskirties namai, užtikrinantys jų kokybę.

Indeksas

  • 1 Fondas
  • 2 Naudojimas
    • 2.1 Šokolado agaras, paruoštas su Kolumbijos agaru
    • 2.2 Šokolado agaras, paruoštas naudojant GC bazinį agarą (gonokokams)
    • 2.3 Šokolado agaras, paruoštas naudojant Müeller Hinton agarą
    • 2.4 Šokolado agaras, paruoštas naudojant Thayer Martin agarą
  • 3 Paruošimas
    • 3.1 Skaičiavimai
    • 3.2 Pasverkite ir ištirpinkite
    • 3.3 Sterilizuoti
    • 3.4 Kraujo kaupimas
    • 3.5 Kitas būdas paruošti šokolado agarą nenaudojant kraujo
  • 4 Kokybės kontrolė
  • 5 Nuorodos

Fondas

Ši terpė susideda iš agaro, kuriame yra daug maistinių medžiagų ir šildomo kraujo, pagrindo. Raudonųjų kraujo kūnelių hemolizė suteikia X faktorių (hemin) ir faktorių V (NAD), kurie yra būtini kai kurių mikroorganizmų, pvz., Genties, augimui. Haemophilus. Tai taip pat labai naudinga izoliacijai Neisserias sp.

Kaip ir kraujo agaras, skirtingos terpės gali būti naudojamos kaip bazinis agaras, priklausomai nuo poreikio. Tarp naudojamų terpių yra smegenų širdies infuzija ir tryptikazės sojos agaras, nors labiausiai rekomenduojama yra Kolumbijos agaras, Müeller Hinton, GC agaras ir Thayer Martin agaras..

Kai kuriuose šokolado agaro variantuose yra komerciškai prieinamas praturtintas papildas, vadinamas Isovitalex arba Polivitex.

Šiuose prieduose yra vitamino B12, L-glutaminas, adeninas, guanino hidrochloridas, p-aminobenzo rūgštis, nikotinamido adenino dinukleotidas (NAD), tiamino pirofosfatas, geležies nitratas, tiamino hidrochloridas, cisteino hidrochloridas, L-cistinas ir gliukozė.

Svarbu pažymėti, kad šokolado agaras yra labiau praturtintas nei kraujo agaras, tačiau neleidžia stebėti hemolizės modelių.

Naudojimas

Šokolado agaras, paruoštas su Kolumbijos agaru

Šioje terpėje yra kazeino ir širdies kasos virškinimo, virškinto mėsos peptido, natrio chlorido, agaro, mielių ekstrakto ir kukurūzų krakmolo. Taip pat gausu vitaminų, mineralų ir amino rūgščių.

Ši bazė su šildomu krauju idealiai tinka Neisseria genties bakterijų izoliavimui. Kita vertus, jei į terpę pridedamas priedas Brucella, minėtas mikroorganizmas gali būti izoliuotas. Rezultatai pagerinami naudojant arklių kraują.

Šokolado agaras, paruoštas su GC baziniu agaru (gonokokams)

Šioje terpėje yra peptonų, kukurūzų krakmolo, monobazinio ir dvigubo buferio, natrio chlorido ir agaro.

Dauguma komerciškai paruoštų šokolado agaro pristatymų pateikiami su šia baze, jame nėra kaitinamo kraujo, bet sintetinis hemininis mišinys ir augimo faktorių, vitaminų, mineralų, aminorūgščių, V faktoriaus ir gliukozės cheminis priedas..

Šokolado agaras, paruoštas su Müeller Hinton agaru

Jis naudojamas jautrių mikroorganizmų jautrumo bandymui atlikti, pvz., Streptococcus pneumoniae naudojant 5% pašildytą ramio kraują.

Jis taip pat naudojamas pirminiam Neisserias ir Haemophilus izoliavimui, bet ypatingu \ t Haemophilus pirmenybė teikiama žirgų kraujo naudojimui, nes jis yra turtingas X ir V faktoriaus šaltinis.

Kita vertus, jei sėjamasis mėginys yra gaunamas iš ne sterilios zonos, rekomenduojama antibiotikus papildyti, kad būtų užkirstas kelias normaliai vietovės florai..

Kvėpavimo mėginių pavyzdys, kai įtariamas genties bakterijų buvimas Haemophilus Bacitracinas naudojamas slopinti augimą Staphylococcus, Micrococcus, Streptococcus ir Saprophytic Neisseria.

Jei tai yra genitalijų chancre mėginiai, jei įtariama Haemophilus ducreyi, Toliau aprašytu būdu paruoštas šokolado agaras buvo sėkmingai panaudotas: Müeller-Hinton agaras su 5% chocolatizuoto arklio kraujo, 1% Isovitalex sodrinimo ir 3 μg / ml vankomicino.

Šokolado agaras, paruoštas su Thayer Martin agaru

Ši terpė yra ypatinga Neisseria gonorrhoeae. Jame turi būti antibiotikų, kurie slopina lydinčiąją florą. Naudojamas ėriukų kraujas.

Paruošimas

Turi būti matyti pagrindinio agaro paruošimo indikacijos. Jie yra dehidratuotos terpės pakuotės gale. Jie paprastai apibūdina, kiek reikia pasverti, kad būtų galima paruošti vieną litrą auginimo terpės.

Laboratorijoje galite paruošti tikslią reikiamą kiekį, ji gali būti didesnė arba mažesnė už vieną litrą.

Skaičiavimai

Nustatoma trijų taisyklių taisyklė, siekiant apskaičiuoti, kiek reikia pasverti norimą tūrį. Pavyzdys:

Jei 1 litrui reikia sverti 40 gr ir laboratorijai reikia 800 ml, sakoma:

1000 ml -40 gr

800 ml - X

Formulė bus tokia:

X = 32 gr (kiekis sveria 800 ml).

Pasverkite ir ištirpinkite

Toliau sveriame reikiamą kiekį ir įdedame į fiolą vandeniu.

Šildykite iki vidutinio karščio ir švelniai maišykite sukamaisiais judesiais, kol dehidratuota terpė visiškai ištirps, paliekant virti 1 minutę.

Sterilizuokite

Fiola įterpiama į autoklave, norint sterilizuoti terpę 121 ° C temperatūroje 20 minučių.

Kraujo kiekis

Išvažiuojant iš autoklavo, jis paliekamas pailsėti, kol terpės temperatūra bus maždaug nuo 56 iki 70 ° C, kad būtų patalpintas kraujas ir sumaišoma, kol terpė taps ruda.

Jei ketinate pridėti papildų, tai laikas tai padaryti. Vėliau sumaišoma ir kiekvienam steriliam Petri lėkštelei patiekiama 20 ml.

Visa procedūra turi būti atliekama laminarinio srauto gaubte arba aplink Bunseno degiklį.

Leiskite pastovėti, kol jie sukietėja, ir laikykite apversti šaldytuve.

Kitas būdas paruošti šokolado agarą nenaudojant kraujo

Bazinė terpė paruošiama taip, kaip aprašyta aukščiau, komerciniu būdu gautas dehidratuotas hemoglobinas yra ištirpinamas ir sterilizuojamas autoklave..

Abiem tirpalams leidžiama atvėsti iki 50 ° C, prijungti ir pridėti priedą. Sumaišykite aseptinėmis sąlygomis ir po to patiekite steriliuose Petri lėkštelėse.

Kokybės kontrolė

Svarbu, kad kraujas būtų dedamas į nurodytą temperatūrą, nes jis idealiai tinka raudonųjų kraujo ląstelių lizei ir tuo pat metu išlaikyti V faktorių, kuris yra termiškai jautrus.

Ant agaro paviršiaus neturėtų būti jokių burbuliukų. Kiekviena 100 lėkštelių partija turi būti inkubuojama vieną ar dvi plokšteles viryklėje 37 ° C temperatūroje 24 valandas, kad būtų patikrintas jo sterilumas..

Siekiant geriausių rezultatų, šokolado agaras turi būti naudojamas netrukus po paruošimo.

Laboratorijoje turėtų būti imtasi kontrolinių bakterijų štamų, kad būtų galima įvertinti šviežiai paruoštos terpės veiksmingumą pagrindinių klinikinės svarbos mikroorganizmų augimui..

Nuorodos

  1. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktinė klinikinė mikrobiologija. Kadiso universitetas, 2-asis leidimas. UCA leidinių tarnyba.
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologinė Bailey & Scott diagnozė. 12 red. Argentina Panamericana S.A Redaktorius.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologinė diagnostika. (5-asis red.). Argentina, Redakcijos Panamericana S.A..
  4. Llanes R, Reyes A, Rodríguez C, Guzmán D, Llop A. GC-Biocen Agar bazinės kultūros terpės naudojimo mikrobiologijos laboratorijoje pagrįstumas. Rev Cubana Med Trop,  2004 m. 56 (3): 237-238. Yra: scielo.sld.
  5. Vikipedijos kūrėjai. Šokolado agaras. Vikipedija, „Laisvas enciklopedija“. 2018 m. Gruodžio 17 d., 19:54 UTC. Galima rasti adresu: en.wikipedia.org.