Agaro BHI pamatas, paruošimas ir naudojimas

The BHI agaras arba smegenų širdies infuzijos agaras yra maistinga kieta kultūros terpė. Ispanų kalba tai vadinama smegenų širdies infuzijos agaru. Tai ne selektyvi auginimo terpė, o tai reiškia, kad gali būti sukurtos visos gramteigiamos ir gramnegatyvinės bakterijos, taip pat kai kurie mielių ir gijiniai grybai.

Jį sudaro veršienos smegenų ir širdies infuzija, gyvūninių audinių peptinis hidrolizatas, kazeino kasos hidrolizatas, natrio chloridas, gliukozė, dinatrio fosfatas ir agaras..

Pažymėtina, kad BHI agaras yra viena iš dažniausiai pasitaikančių bakteriologijos laboratorijų. Jis gali būti naudojamas be papildų kaip pirminė kultūra, kolonijų subkultūra, gauta kitose selektyviose terpėse, arba štamų palaikymui laboratorijoje.

Kita vertus, ji yra ideali terpė, naudojama kaip pagrindas sodrinant terpę, pvz., Kraujo agarą ir šokolado agarą. Abi idealiai tinka reikalaujantiems mikroorganizmams izoliuoti nuo mitybos. Tačiau reikia atsižvelgti į tai, kad, kadangi jame yra gliukozės, nepakanka stebėti hemolizės modelius.

Be to, BHI agarą galima naudoti specialioms priemonėms, skirtoms patogeninių mikroorganizmų, kuriems sunku augti bendroje terpėje, išskirti, tarp jų: Haemophilus sp, Francisella tularensis, Corynebacterium diphtheriae ir Histoplasma capsulatum.

Su antibiotikais BHI agaras tampa selektyvia priemone grybų išskyrimui.

Indeksas

• 1 Fondas
• 2 Paruošimas
  • 2.1
  • 2.2 Plokštės
  • 2.3 Kraujo agaro paruošimas
• 3 Naudojimas
  • 3.1 Naudoti be papildų
  • 3.2. Bazinis agaras, skirtas kitoms terpėms paruošti
• 4 Kokybės kontrolė
• 5 Nuorodos

Fondas

Tai maistinga auginimo terpė, skirta izoliuoti vidutiniškai sunkius mikroorganizmus, padidindama jo sodrinimą, pridedant kraujo ir kitų maisto papildų.

Tai yra neselektyvi auginimo terpė, todėl leidžia augti daugumą gramteigiamų ir gramneigiamų bakterijų, taip pat kai kurių grybų. Tačiau jis gali tapti selektyvus, pridedant antibiotikų.

Terpėje yra veršelių smegenų ir širdies infuzija, peptidų hidrolizatas iš gyvūnų audinių ir kazeino kasos hidrolizatas; visi šie junginiai yra vitaminų, amino rūgščių, azoto ir anglies šaltiniai.

Gliukozė yra angliavandeniai, kurie mikroorganizmams suteikia energijos, kai jie yra fermentuoti. Kadangi natrio chloridas ir dinatrio fosfatas išlaiko osmosinę pusiausvyrą ir užtikrina neutralų pH lygį. Galiausiai, agaras užtikrina kietą nuoseklumą terpei.

Paruošimas

Pasverkite 52 g dehidratuotos terpės ir ištirpinkite 1 litru distiliuoto vandens. Sumaišykite mišinį į šilumos šaltinį, kol jis užvirs, dažnai tirpinimo proceso metu.

Jūs galite paruošti BHI agaro pleištus ar plokštes be priedų.

Pleištai

Pleištams ruošti ruoškite preparatą, kol užpildysite pusę kiekvieno mėgintuvėlio, uždenkite ir sterilizuokite autoklave 121 ° C temperatūroje 15 minučių, kai išeisite ant pagrindo, kol jie sukietės. Tada laikykite šaldytuve iki naudojimo.

Plokštės

Ištirpintas mišinys autoklavuojamas 121 ° C temperatūroje 15 minučių, kai jis paliekamas, jam leidžiama atvėsti iki 50 ° C ir 20 ml terpės tiekiamos steriliuose Petri lėkštelėse. Jiems leidžiama sukietėti, apversti ir laikyti šaldytuve, kol jie bus naudojami. Prieš sodinimą leiskite plokštelėms patekti į kambario temperatūrą.

Terpės pH turi būti 7,4 ± 0,2.

Paruošta terpė yra smėlio ir paruošta šviesiai gintare.

Kraujo agaro paruošimas

Sterilizavus terpę, atvėsinkite iki maždaug 45–50 ° C temperatūros, šiuo metu pridėkite kraują (50 ml), atsargiai sumaišykite, kad homogenizuotumėte ir aseptiškai įpilkite 20 ml kiekviename Petri lėkštelėje. Jei ant plokštelės susidaro burbuliukai, degiklio liepsna turi būti greitai pernešama per burbulus, kad juos pašalintų.

Be to, specialios terpės gali būti paruošiamos pridedant atitinkamus priedus, kai mišinys pasiekia 45–50 ° C temperatūrą.

Medžiaga yra vyšnių raudona.

Naudojimas

Naudokite be papildų

BHI agaras be priedų yra naudingas kaip pirminė kultūra ir grynas mikroorganizmų padermes, kurios yra vidutinės arba vidutiniškai reikalingos vėlesniam identifikavimui..

Kadangi tai yra šviesios spalvos terpė, ji idealiai tinka stebėti pigmentus ir taip pat todėl, kad jame nėra trukdančių medžiagų, ji gali būti naudojama atlikti biocheminius tyrimus, tokius kaip oksidazė ir katalazė, arba kitiems biocheminiams bandymams iš kolonijų, kilusių iš šio agaras.

Be to, BHI agaro pleištai plačiai naudojami tam tikrą laiką laboratorijoje (bakterioteka), kad būtų galima palaikyti tam tikrą laiką..

Plokštelės ar pleištai, pasodinti ant paviršiaus bakterijų padermėmis, inkubuojami 37 ° C temperatūroje 24–48 valandas. Nors grybeliuose temperatūra ir inkubacijos laikas priklauso nuo grybelio tipo, kurio reikia.

Bazinis agaras, skirtas kitoms terpėms paruošti

Su šia baze galima paruošti praturtintą ir selektyviąją terpę.

Praturtintas

Jo pagrindinė funkcija - būti pagrindu paruošiant kraujo agarą įprastiniam mikrobiologijos laboratorijose. Ypač BHI bazė yra palanki padermių izoliacijai Streptococcus sp. Tačiau trūkumas yra tai, kad jis netinka stebėti hemolizės modelius, nes jame yra gliukozės.

Jis taip pat naudojamas ruošiant triušio ar arklio kraujo agarą izoliacijai Haemophilus sp. Norėdami gauti geresnių rezultatų, galite pridėti sodrinimo priedą (IsoVitaleX).

Jei mėginiai iš kvėpavimo takų patenka į agarą, gali būti pridėta bacitracino, kuris slopina lydinčiąją florą ir padidina tikimybę atsigauti. Haemophilus sp.

Kita vertus, kraujo agarą (ėriuką ar žmogų) galima paruošti su tellurito cistinu, kad išskirtų Corynebacterium diphtheriae. Taip pat yra naudinga paruošti triušio kraujo agarą, pridėjus cistiną ir gliukozę, Francisella tularensis.

Kraujo agaro plokštelių sėjimas atliekamas išeikvojant ir inkubuojamas 35-37 ° C temperatūroje 24–48 valandas mikroaerofilinėje medžiagoje (5-10% CO).₂).

Selektyvus

Ši terpė su antibiotikais gali pakeisti Sabouraud agarą grybų izoliacijai.

BHI agaro ir chloramfenikolio - gentamicino arba penicilino, streptomicino ir arklių kraujo derinys idealiai tinka izoliacijai. Histoplasma capsulatum.

Priklausomai nuo izoliuotino mikroorganizmo, rekomenduojama inkubuoti aerobioze 35–37 ° C temperatūroje arba kambario temperatūroje. Kartais yra reikalingas inkubavimas abiejose temperatūrų ribose, naudojant 2 plokšteles.

Patinka kai kurie grybai Trichophyton mentagrofitai jie turi būti inkubuojami kambario temperatūroje iki 7 dienų.

Kokybės kontrolė

Iš kiekvienos paruoštos partijos rekomenduojama 24 valandas inkubuoti 1 plokštelę arba pleištą 37 ° C temperatūroje ir patikrinti, ar nėra augimo; Ypač svarbus ruošiant kraujo agarą, nes jis yra lengvai užteršta terpė.

Kita vertus, terpės kokybę galima įvertinti inokuliuojant žinomus arba sertifikuotus standartinius padermes ir stebint jų vystymąsi.

Šia prasme įvertinti BHI agarą be priedų,. \ T Escherichia coli ATCC 25922, Staphylococcus aureus ATCC 25923 arba Candida albicans ATCC 10231. Jie inkubuojami 37 ° C temperatūroje aerobioze 24–48 valandas. Visais atvejais tikimasi patenkinamo augimo.

Įvertinti kraujo agaro plokšteles,. \ T  Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 arba Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533.

Bakterinės padermės inkubuojamos 37 ° C temperatūroje microaerophilicus 24 valandas, o grybelis inkubuojamas kambario temperatūroje drėgnoje kameroje iki 7 dienų. Visais atvejais tikimasi patenkinamo augimo.

Nuorodos

1. Laboratorijos Britanija. Smegenų širdies infuzijos agaras. 2015 m. Galima rasti adresu: britanialab.com.
2. BD laboratorijos Smegenų širdies infuzijos (BHI) agaras. 2013 m.
3. Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories, S.A. Smegenų širdies infuzijos agaras. 2009 m.
4. Neogeninė laboratorija. Smegenų širdies infuzijos agaras. Pateikiama adresu: foodsafety.neogen.com
5. Gil M. Agaro kraujas: pamatas, panaudojimas ir paruošimas. 2018. Galima rasti adresu: lifeder.com.
6. Vikipedijos kūrėjai. Smegenų širdies infuzija Vikipedija, „Laisvas enciklopedija“. 2018 m. Rugsėjo 19 d., 03:58 UTC. Galima rasti adresu: wikipedia.org. Prieiga prie 2019 m. Kovo 2 d.
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologinė Bailey & Scott diagnozė. 12 red. Redakcija Panamericana S.A. Argentina.