Baird Parker Agar pamatas, paruošimas ir naudojimas

The „Baird Parker“ agaras tai yra kieta, selektyvi ir diferencinė kultūros terpė. Jis buvo sukurtas 1962 m., Siekiant aptikti ir koaguluoti teigiamus Staphylococcus skaičiavimus (Staphylococcus aureus).

Jį sudaro kazeino kasos hidrolizatas, mėsos ekstraktas, mielių ekstraktas, ličio chloridas, glicinas, natrio piruvatas, kalio telluras, agaras ir kiaušinio trynio emulsija..

„Baird Parker“ agaras yra pagrįstas S. aureus redukuojančių telurito kiekį ir gaminant lecitinazę. Abi savybės sukuria koloniją su specifinėmis šios rūšies savybėmis. Todėl jis labai veiksmingai aptinka šį mikroorganizmą.

Tipiškos. \ T S. aureus jie yra juodos arba tamsiai pilkos spalvos, su bespalviu kraštu ir aiškia jų apačia, išsiskiriančia nuo kitų mikroorganizmų. Šis patogenas randamas klinikiniuose mėginiuose, vandenyse, kosmetikoje ir žaliaviniuose arba virti maisto produktuose.

Jo diagnozė arba aptikimas yra labai svarbus dėl įvairių jo sukeltų patologijų, pavyzdžiui, apsinuodijimo maistu, odos sindromo, toksinio šoko sindromo, abscesų, meningito, septicemijos, endokardito..

Indeksas

• 1 Fondas
  • 1.1. Maistinė galia
  • 1.2. Atrankinis
  • 1.3 Diferencialas
• 2 Paruošimas
  • 2.1 Kiaušinio trynio emulsija
  • 2.2 Kalio telluritas, esant 1% m / t
  • 2.3. Kultūros terpės paruošimas
• 3 Naudokite
  • 3.1 Klinikiniai mėginiai
  • 3.2 Maisto mėginiai
  • 3.3 Vandens mėginiai
• 4 Kokybės kontrolė
• 5 rekomendacijos
• 6 Nuorodos

Fondas

Maistinga galia

Kazeino kasos hidrolizatas, mėsos ekstraktas ir mielių ekstraktas yra maistinių medžiagų, vitaminų ir mineralų, reikalingų bendram mikrobiologiniam vystymuisi, šaltiniai, o piruvatas ir glicinas yra junginiai, skatinantys specifinį augimą. Staphylococcus aureus.

Selektyvus

„Baird Parker“ agaras yra selektyvus, nes jame yra medžiagų, kurios slopina lydinčiosios floros augimą, kartu skatindamos vystytis. S. aureus. Slopinantys junginiai yra ličio chloridas ir kalio teluritas.

Diferencialas

Tai reiškia, kad leidžia atskirti S. aureus kitų koagulazės neigiamų stafilokokų. S. aureus turi gebėjimą redukuoti teluritą į juodą metalų nemokamą tellūrą, sudarant juodas arba tamsiai pilkas kolonijas.

Panašiai kiaušinio trynys suteikia substratams įrodymų, kad yra lecitinazės ir lipazės fermentas. S. aureus tai yra teigiamas lecitinazė, todėl aplink koloniją bus pastebėtas aiškus halogenas, rodantis, kad lecitinas buvo hidrolizuotas.

Šia prasme juodos arba tamsiai pilkos spalvos kolonijų, kurios yra šviesios, apšviestos juose, atsiradimas šiame agare rodo, kad yra S. aureus. 

Jei susidaro nusodinimo zona, tai rodo, kad yra lipazės aktyvumas. Kai kurie. \ T S. aureus jie yra teigiami lipazės ir kiti neigiami.

Tuo atveju, jei S. aureus Jei lipazė yra teigiama, aplink juodą arba tamsiai pilką koloniją bus matoma nepermatoma zona, o dėl lecitinazės poveikio - aiški halo zona..

Bakterijų kolonijos, išskyrus. \ T S. aureus gali augti bespalviai arba rudi kolonijos, nesukeldami aplinką.

Netipinės juodosios kolonijos taip pat gali būti stebimos be bespalvės sienos, tačiau be aiškios halogeninės. Į šias kolonijas neturėtų būti atsižvelgiama, jos neatitinka S. aureus.

Paruošimas

Kiaušinio trynio emulsija

Paimkite šviežią vištienos kiaušinį, gerai nuplaukite ir įdėkite 2–3 valandas 70% alkoholio. Tada kiaušinis atidaromas aseptiškai, o kiaušinio baltymas kruopščiai atskiriamas nuo trynio. Vėliau imama 50 ml trynio ir sumaišoma su 50 ml sterilaus fiziologinio tirpalo.

Kalio telluritas, esant 1% m / t

Kai kurie komerciniai namai parduoda 1 proc. Jis pridedamas prie terpės, kol terpė sukietėja.

Šio tirpalo paruošimui laboratorijoje pasverkite 1,0 g kalio tellūrito ir ištirpinkite vandenyje. Vėliau vandens kiekis baigiamas iki 100 ml. Tirpalas turi būti sterilizuojamas filtravimo metodu.

Kultūros terpės paruošimas

Pasverkite 60 g dehidratuotos terpės ir ištirpinkite 940 ml distiliuoto vandens. Palikite mišinį maždaug 5–10 minučių.

Jei norite pagerinti tirpinimo procesą, dažnai įmaišykite šilumą, maišydami terpę. Leiskite virti minutę. Autoklave 15 minučių sterilizuokite 121 ° C temperatūroje.

Leiskite pastatyti, kol pasiekia 45 ° C temperatūrą, ir įpilkite 50 ml kiaušinio trynio emulsijos ir 10 ml 1% telurito. Gerai sumaišoma ir sterilizuotuose Petri lėkštelėse patiekite 15–20 ml.

Leiskite sukietėti, pasukti į apvalkalus ir laikyti šaldytuve iki naudojimo.

Galutinis paruoštos terpės pH turi būti 6,8 ± 0,2.

Prieš pasodinant mėginį, palaukite, kol plokštelė užims aplinkos temperatūrą. Plokšteles sėti arba sėti ant paviršiaus su Drigalski mentele.

Dehidratuotos terpės spalva yra šviesiai rudos spalvos, o paruoštos terpės spalva yra šviesiai gintarinė.

Naudokite

Klinikiniai mėginiai

Klinikiniai mėginiai sėjami tiesiai, iš vienos medžiagos plokštelės galo išleidžiant dalį medžiagos, ir iš ten jis išnyksta. Inkubuokite 24–48 valandas 35-37 ° C temperatūroje.

Maisto mėginiai

Pasverkite 10 g maisto mėginio ir homogenizuokite 90 ml 0,1% peptonuoto vandens, jei reikia, paruošiami skiediniai. Plokštelės inokuliuojamos tris kartus su 0,3 ml paruoštų tirpalų ir sėjama ant paviršiaus Drigalski mentele. Inkubuokite 24–48 valandas 35-37 ° C temperatūroje.

Ši metodika leidžia skaičiuoti gautas tipines kolonijas ir yra idealus, kai yra S. aureus viršija 10 CFU / g mėginio.

Jei įtariate, kad S. aureus jis yra mažas arba yra daug lydinčios floros, siūloma praturtinti mėginį tripticase sojos sultinyje su 10% NaCl ir 1% natrio piruvatu. Tai paskatins augimą S. aureus ir slopins lydinčios floros vystymąsi. Debesuotieji vamzdžiai bus sėti ant Baird Parker agaro.

Vandens mėginiai

Vakuuminio filtravimo sistemoje ir sterilizavus filtruojama 100 ml vandens, o po to 0,4 mikrono mikroporozinė membrana pašalinama steriliu spaustuvu ir dedama ant Baird Parker plokštės. Inkubuokite 24–48 valandas 35-37 ° C temperatūroje. Šis metodas leidžia skaičiuoti tipines kolonijas S. aureus.

Kokybės kontrolė

Siekiant įvertinti Baird Parker agaro kokybę, gali būti naudojami žinomi kamienai, pvz Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 arba Proteus mirabilis ATCC 43071.

Jei tai yra. \ T S. aureus Yra žinoma, kad ATCC mažina teluritą ir yra teigiama lipazė ir lecitinazė. Todėl turi būti patenkinamas vystymasis ir išgaubtos kolonijos su juodu centru ir bespalviu kraštu, su nepermatoma halo ir kita išorine šviesa..

Kita vertus, S. epidermidis šioje terpėje tikimasi prastos raidos, pilkai rudos iki juodos kolonijos, be aiškios halo.

Į E. coli ir P. mirabilis tikimasi, kad jis bus visiškai arba iš dalies slopinamas. Jei auga, rudos kolonijos išsivystys be nepermatomos zonos, nei aiškios žolės.

Rekomendacijos

-Medžiaga neturėtų būti šildoma pridedant tellurito ir trynio.

-Kiaušinio trynio emulsijos paruošimas ir pridėjimas terpėje yra labai pažeidžiamas taršos etapas. Ypatingas dėmesys turi būti skiriamas.

-Jei yra tipiškų. \ T S. aureus turi būti patvirtintas sumontavus koagulazės testą į tą kamieną.

-Jei kyla abejonių dėl koagulazės, reikia atlikti kitus patvirtinančius bandymus.

-Būkite atsargūs, kad nesupainiotų tipiškų S. aureus su netipinėmis juodos spalvos kolonijomis.

Nuorodos

1. Vikipedijos kūrėjai. „Baird-Parker“ agaras. Vikipedija, „Laisvas enciklopedija“. 2017 m. Kovo 15 d., 19:36 UTC. Galima rasti adresu: wikipedia.org/ Prieiga prie 2019 m. Vasario 18 d.
2. BD laboratorijos. Baird Parker Agar. 2006 m
3. Laboratorijos Britanija. „Baird Parker“ agaro bazė. 2015 m. Galima rasti adresu: britanialab.com
4. Francisco Soria Melguizo Laboratories. 2009. Baird Parker Agar. Pateikiama adresu: http://f-soria.es/Inform
5. Laboratorijos Britanija. Kalio tellūritas. 2015 m. Galima rasti adresu: britanialab.com
6. Alarcón-Lavín M, Oyarzo C, Escudero C, Cerda-Leal F, Valenzuela F. \ t Staphylococcus aureus A tipo enterotoksigeninis poveikis, gydant nosies gleivines. Rev Med Čilė 2017; 145: 1559-1564
7. Venesuelos standartas Covenin 1292-89. (1989). Maistas Izoliacija ir skaičiavimas Staphylococcus aureus. Yra:sencamer.gob.ve