Peptono vandens pagrindas, paruošimas ir naudojimas

The peptonada vanduo ji yra neselektyvi skysto sodrinimo terpė, naudojama daugiausia kaip maisto mėginių ar kitų medžiagų skiediklis. Tai reiškia, kad cheminiu požiūriu yra labai paprasta, jame yra mėsos peptono, natrio chlorido ir vandens.

Ji turi tam tikrą maistinę vertę, kuri leidžia praturtinti mėginį. Jei yra bakterijų, tai reiškia, kad ji turi galimybę ištaisyti gyvybingumą. Tai ypač naudinga išgauti Enterobacteriaceae šeimos bakterijas.

Salmonelių atgavimo atveju rekomenduojama naudoti buferinį peptonados vandens variantą; Tai tarnauja kaip pavyzdžio išankstinio sodrinimo priemonė, šiuo atveju jame yra kitų elementų, tokių kaip dinatrio fosfatas ir dikalio fosfatas..

Paprastai peptonados vanduo yra paruošiamas neutraliu pH, tačiau yra ir kitų variantų, kai būtina, kad pH būtų 8,5 ± 0,2 (šarminis), nes izoliuotos bakterijos yra alkalofilinės, pvz. Vibrio cholerae.

Kita vertus, ši terpė gali būti naudojama kaip bazinė terpė angliavandenių fermentacijos bandymams.

Indeksas

• 1 Fondas
• 2 Paruošimas
  • 2.1 Namų ruošimas (nekomercinis)
  • 2.2 Paruošimas naudojant komercinę terpę
  • 2.3 Paruošimas fermentacijos bandymams
  • 2.4 Kiti peptonados vandens variantai
• 3 Naudokite
  • 3.1 Išmatų mėginiai
  • 3.2 Maisto mėginiai
• 4 Kokybės kontrolė
• 5 Apribojimai
• 6 Nuorodos

Fondas

Peptonai užtikrina maistines medžiagas, reikalingas bakterijų vystymuisi, ypač azoto ir trumpos grandinės aminorūgštims, o natrio chloridas palaiko osmosinį balansą.

Be to, terpė leidžia išsklaidyti, homogenizuoti ir remontuoti bakterines ląsteles, kurios buvo pažeistos pramonės procesuose..

Kaip skiediklis yra idealus, veiksmingai pakeičiantis fiziologinį tirpalą (SSF) arba fosfato buferį (PBS)..

Bakterijų augimas akivaizdus stebint jo drumstumą.

Paruošimas

Namų ruošimas (nekomercinis)

Pasverkite 1 g peptono ir 8,5 g natrio chlorido, ištirpinkite 1 litru distiliuoto vandens. PH turėtų būti sureguliuotas iki 7,0. Tam galite naudoti 1 N natrio chloridą.

Paruošimas naudojant komercinę terpę

Pasverkite 15 g dehidratuotos terpės ir ištirpinkite vienu litru distiliuoto vandens. Homogenizuokite mišinį. Jei reikia, mišinys virinamas 1 minutę, kad būtų visiškai ištirpinta. Jei reikia, patiekite 100 ml buteliukuose arba 10 ml mėgintuvėliuose. Autoklave 121 ° C temperatūroje 15 minučių.

Atvėsinkite ir naudokite arba laikykite šaldytuve. Galutinis terpės pH yra 7,2 ± 0,2.

Dehidratuotos terpės spalva yra šviesiai smėlio spalvos ir paruošta šviesiai gintare.

Paruošimas fermentacijos bandymams

Iki ankstesnio preparato - prieš sterilizavimą - angliavandeniai turėtų būti pridedami prie galutinės 1% koncentracijos, taip pat Andrade indikatoriaus (rūgšties fuksino) arba fenolio raudonos (0,018 g / l). Prie mėgintuvėlių turėtų būti dedamas „Durham“ varpelis dujų susidarymui stebėti.

Kiti peptonados vandens variantai

-Peptono vanduo, buferinis arba buferinis

Jame yra kazeino fermentinio hidrolizato, natrio chlorido, kalio dihidrofosfato ir natrio vandenilio fosfato dodekahidrato. Galutinis pH yra 7,0 ± 0,2.

Jo paruošimui pasverkite 20 g dehidratuotos terpės ir ištirpinkite 1 litru distiliuoto vandens. Leiskite pastovėti 5 minutes. 1 minutę kaitinkite, kol visiškai ištirps.

Prireikus supilkite į tinkamus butelius. Sterilizuokite naudojant autoklave 121 ° C temperatūroje 15 minučių.

-Šarminis peptoninis vanduo

Pasverkite 25 g dehidratuotos terpės ir ištirpinkite 1 litru vandens. Vykdykite taip, kaip aprašyta aukščiau. PH svyruoja nuo 8,3 iki 8,7.

Naudokite

Inokuliacija atliekama mėginį dedant tiesiai.

Jis naudojamas mėginiams atskiesti, ypač kai įtariama, kad gali būti pažeistos bakterijos. Paprastai skiedimai yra 1:10 ir 1: 100.

Inkubuokite 24 valandas aerobioze 35-37 ° C temperatūroje.

Išmatų mėginiai

Išmatuotiems mėginiams, ieškantiems salmonelių, rekomenduojama naudoti buferinį arba buferinį vandenį kaip priešpriešinimo terpę..

Norėdami tai padaryti, atlikite šiuos veiksmus:

Jei išmatos susidaro, paimkite 1 g mėginio. Jei jie yra skysti, paimkite 1 ml išmatų ir suspenduokite į mėgintuvėlį 10 ml buferinio peptoninio vandens. Iš tiesiosios žarnos tamponų ištraukite tamponu esančią medžiagą į mėgintuvėlį buferiniu peptoniniu vandeniu.

Visais atvejais mėginį gerai sumaišykite ir homogenizuokite.

Inkubuokite 37 ° C temperatūroje 18–24 valandas. Vėliau subkultūruokite sodrinimo sultinyje, tokiame kaip selenito cistino sultinys arba tetrationato sultinys, 37 ° C temperatūroje 18-24 valandas. Galiausiai auginkite selektyviose terpėse, pavyzdžiui, SS agare, XLD agare, Hektoen agare, tarp kitų.

Maisto mėginiai

Peptono vanduo yra naudojamas kaip sodrinimo terpė arba kaip paprastas skiediklis, bet jei siekiama salmonelių rūšių, ji naudojama kaip priešpriešinimo terpė, kaip jau aprašyta..

Maisto produktai atliekami taip:

Kietiems maisto produktams sveriama 25 g mėginio, o skystiems maisto produktams - 25 ml. Įdėkite minėtą dalį į kolbas, kuriose yra 225 ml peptonuoto vandens. Mėginys sumaišomas ir homogenizuojamas.

Jei įtariama, kad mikrobinė apkrova yra didelė, gali būti atliekami nuoseklūs skiedimai arba dešimtainiai tikslai, siekiant palengvinti kolonijas sudarančių vienetų (CFU) skaičiavimą..

Skiedimų skaičius priklausys nuo mėginio tipo ir analitinės patirties.

Priešingai, įtariama, kad mikrobinė apkrova yra labai maža, nebūtina atlikti skiedimų. Vėliau subkultyvuokite selektyvioje terpėje.

Maisto produktų iš jūros, pavyzdžiui, jūros gėrybių, žuvų, be kita ko, ieškoti Vibrio cholerae arba kitos Vibrio rūšys, turi būti naudojamas peptono vanduo, pakoreguotas iki pH 8,5 (šarminis peptonuotas vanduo).

Kokybės kontrolė

Iš kiekvienos paruoštos partijos vieną ar du mėgintuvėlius reikia inkubuoti be inokuliacijos 24 valandas aerobioze 37 ° C temperatūroje. Pasibaigus laikui, nereikėtų stebėti drumstumo ar spalvos pokyčių.

Be to, galima įvertinti gerai žinomus kontrolinius padermes jų veiksmingumui įvertinti:

Tam gali būti naudojami šie bakterijų kamienai: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 8927, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Salmonella typhimurium ATCC 1428, Salmonella enteritidis ATCC 13076.

Visais atvejais tikimasi patenkinamo mikrobiologinio vystymosi, kurį stebi terpės drumstumas.

Apribojimai

-Dehidratuota terpė yra labai higroskopinė, todėl ji turi būti laikoma atokiau nuo drėgmės.

-Terpė neturėtų būti naudojama, jei pastebimas tam tikras nusidėvėjimas.

-Dehidratuota terpė turi būti laikoma nuo 10 iki 35 ° C

-Paruošta terpė turi būti laikoma šaldytuve (2-8 ° C)..

Nuorodos

1. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B ir Velázquez O. Maisto produktų mikrobiologinės analizės metodai. 2009, 2nd ed. Chemijos fakultetas, UNAM. Meksika Chemijos mokslų fakulteto UNAM vadovų ir dokumentų administratoriaus versija (AMyD) 1. Galima rasti adresu: http://depa.fquim.unam.mx
2. Laboratorijos Britanija. Buferuotas peptonada vanduo. 2015 m. Galima rasti adresu: britanialab.com
3. Neogen Laboratories Peptono vanduo. Pateikiama adresu: foodsafety.neogen.com
4. Laboratorijos Britanija. Peptono vanduo. 2015 m. Galima rasti adresu: britanialab.com
5. „Merck Laboratories“ Buferuotas peptono vanduo. Galima rasti adresu: merckmillipore.com
6. Laboratorijos Conda Pronadisa. Šarminis peptoninis vanduo. Galima rasti adresu: condalab.com
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologinė Bailey & Scott diagnozė. 12 red. Redakcija Panamericana S.A. Argentina.