Kultūros terpių rengimas, kurį sudaro, tikslai ir žingsniai

The kultūros terpių paruošimas Tai yra įprastinė metodika, naudojama laboratorijose norimų mikroorganizmų augimui. Kultūros terpės yra kieti, skysti arba pusiau kieti preparatai, turintys visas maistines medžiagas, reikalingas mikrobiologinei populiacijai vystyti.

Apskritai, mikroorganizmų auginimo būdai yra daug baltymų ir amino rūgščių ir paprastai turi tam tikrą komponentą, kuris skatina organizmo, kurį norite studijuoti, augimą, pavyzdžiui, vitaminų, kraujo, serumo..

Nėra bendro arba visuotinės kultūros terpės, nes jos sudėtis skiriasi priklausomai nuo mikroorganizmo poreikių. Kai kurios bakterijos gali išsivystyti bet kurioje auginimo terpėje, bet kitose yra specialių reikalavimų.

Indeksas

• 1 Ką sudaro??
  • 1.1 Agaras
  • 1.2 Skysčiai
  • 1.3 Ištraukos
  • 1.4. Peptonai
  • 1.5 Amortizatoriai
• 2 Tikslai
• 3 Žiniasklaidos tipai
  • 3.1 Remiantis jos sudėtimi
  • 3.2 Remiantis mikroorganizmo tipu
• 4 žingsniai
• 5 Nuorodos

Ką ji sudaro??

Mikroorganizmai, pvz., Grybai ir bakterijos, negali būti tiriami atskirai dėl jų mažo dydžio. Todėl jie turi būti auginami dirbtinėmis priemonėmis, leidžiančiomis žymiai padidinti gyventojų skaičių.

Pavyzdžiui, jei norime studijuoti bakterijas, turime suteikti jiems tinkamas sąlygas, kad jos galėtų daugintis ir sudaryti koloniją (kurią galima stebėti plika akimi).

Kultūrų terpės paruošimas labai skiriasi, priklausomai nuo mikroorganizmo tipo, kurį norima auginti. Prieš ją rengiant būtina žinoti pagrindinius darbo grupės mitybos poreikius.

Toliau bus apibūdinti dažniausiai naudojami kultūros terpėse naudojami komponentai, turintys bendrą jų paruošimo idėją:

Agaras

Jis naudojamas augalams, kaip želėnanti medžiaga, ir pridedamas ieškant kietos arba pusiau kietos terpės. Pirmasis kietinimo agentas, naudojamas žiniasklaidos gamyboje, buvo želatina, bet 1883 m. Agaras buvo įvežtas į bakteriologijos pasaulį W. Hesse.

Pagrindinis bakteriologinis agaras yra kompleksinių šakų, išgautų iš dumblių, polisacharidas. Šis junginys naudojamas kaip tirštiklis įprastiems maisto produktams, pvz., Ledams ir uogienėms.

Tai labai vertingas mikrobiologijos elementas dėl kelių priežasčių. Daugiausia dėl to, kad mikroorganizmai negali jo suskaidyti, suskystina esant 100 ° C temperatūrai ir lieka skystoje būsenoje, kol pasieks 45 ° C ar mažiau.

Jei norite paruošti kietą terpę, agaro koncentracija turėtų būti apie 1,5%, o pusiau kietos medžiagos - nuo 0,3 iki 0,5%.

Skysčiai

Patogeninių organizmų auginimui reikalingi kūno skysčiai, kad jie galėtų išsivystyti taip, kaip jie būtų gamtinėje aplinkoje. Dėl šios priežasties pridedamas sveikas arba defibriluotas kraujas. Skystis ekstrahuojamas iš sveiko gyvūno ir, sterilizavus, pridedamas prie auginimo terpės.

Ištraukos

Jie gaunami iš skirtingų gyvūnų dalių (pvz., Mėsos arba kepenų) arba daržovių (sėklų) ir apdorojami, kad gautų kietą koncentratą pastos arba miltelių pavidalu. Dažniausiai yra mielės, salyklas ir mėsa.

Peptonai

Šie organiniai junginiai gaunami fermentiškai arba chemiškai hidrolizuojant gyvūninius arba augalinius audinius. Siekiama pridėti turinio, turinčio daug amino rūgščių, kurios yra pagrindiniai baltymų vienetai.

Amortizatoriai

Buferiai arba buferinės sistemos vengia staigių pH pokyčių ir padeda išlaikyti optimalų kūno toleravimo diapazoną.

Dauguma organizmų gali tinkamai išsivystyti esant pH 7, nors kai kurios bakterijos teikia pirmenybę šarminėms terpėms. Tačiau yra bakterijų, kurios priešinasi pH svyravimams tarp 6 ir 9 verčių.

PH jautrioms rūšims žala nesukelia pernelyg daug vandenilio arba hidroksilo jonų, bet padidėja silpnos rūgštys arba bazės, kurios gali prasiskverbti į ląstelę.

Taip pat pridedami rodikliai, kad pH jį stebėti ir išvengti fermentacijos ar kitų procesų nukrypimų.

Tikslai

Pagrindinis tikslas rengiant auginimo terpę yra pridėti visus reikiamus komponentus, kad būtų galima sėkmingai vystytis organizmui, kuris nori būti izoliuotas. Norint pasiekti norimą terpę, reikia nustatyti efektyviausią komponentų ir maistinių medžiagų derinį.

Siekiant užtikrinti sėkmingą augimą, labai svarbu paruošti ir laikyti terpę, nes šie veiksmai priklauso nuo aplinkos sudėties ir maistinių medžiagų prieinamumo..

Turi būti atsižvelgta į tai, kad mikroorganizmų auginimas yra užduotis, kurią paveikia keletas veiksnių, nepriklausančių nuo auginimo terpės, pvz., Gautos šviesos intensyvumas, temperatūra ir terpės rūgštingumas ar šarmingumas. Todėl reikia atsižvelgti į kiekvieną iš šių kintamųjų.

Žiniasklaidos tipai

Remiantis jos sudėtimi

Remiantis jos sudėtimi, yra trys pagrindiniai pasėlių tipai: natūralios arba empirinės, pusiau sintetinės ir apibrėžtos sintetinės ar cheminės priemonės.

Gamtinė aplinka

Gamtinėje aplinkoje tiksli sudėtis nežinoma. Tai apima tokius ingredientus kaip pienas, atskiestas kraujas, daržovių sultys, mėsos ir peptonų ekstraktai ir užpilai. Dėl ekonominių priežasčių dažnai pridedamos pigių komponentų, tokių kaip sojos ekstraktas, išrūgos, melasa ir kt..

Pusiau sintetinės terpės

Tai vadinama pusiau sintetine terpe, jei jos sudėtis yra iš dalies žinoma. Bet kuri terpė, kurioje yra agaro, tampa pusiau sintetine terpe.

Tarp jų yra papa dekstrozės agaras, czapek-dox agaras, avižų agaras, peptono mėsos agaras, be kitų pavyzdžių..

Sintetinė arba cheminė apibrėžta terpė

Šiuo atveju vidutinės medžiagos sudėtis - anglies, azoto, sieros, fosforo ir kitų augimo faktorių šaltinių kiekis - yra visiškai žinoma. Labai naudinga, jei norite gauti pakartotinų rezultatų kitiems tyrėjams.

Vadinamiesiems „mikroorganizmams su specialiais augimo reikalavimais“ būtina pridėti reikiamus komponentus. Šio tipo pavyzdys yra Lactobacillus.

Remiantis mikroorganizmo tipu

Panašiai yra ir kita kultūros terpių klasifikacija, pagrįsta mikroorganizmo tipu, kuris gali augti joje. Vadovaudamiesi šiuo principu, mes turime tokias bendras praturtinimo, selektyvumo ir diferencialines priemones. Kiekvienas iš jų aprašytas žemiau:

Bendrosios priemonės

Tai pripažįsta įvairių mikroorganizmų vystymąsi. Jei bet kuriam organizmui reikia specialių augimo sąlygų, jis negalės sėkmingai išsivystyti šio tipo augaluose.

Sodrinimo priemonės

Praturtinimo priemonės skatina tam tikro tipo mikroorganizmų augimą, tačiau nebuvo pridėta jokių medžiagų, kad būtų užkirstas kelias kitiems mikrobams augti..

Selektyvi žiniasklaida

Jie ieško specifinio mikroorganizmo augimo, tai vadina grybais, bakterijomis, pirmuoniais. Norėdami tai padaryti, jie slopina kitų vystymąsi.

Šiam tikslui pasiekti gali būti pridedami mirtini cheminiai junginiai daugeliui mikroorganizmų grupei ir nekenksmingi dominančiam organizmui arba pridedami energijos šaltiniai, kuriuos galima prilyginti tik ieškomam mikroorganizmui.

Atliekant medicininius mėginius, siekiant auginti patogeninį mikroorganizmą, naudojamos selektyvios terpės. Čia būtina skatinti patogeno augimą ir slopinti paciento normalios mikrobinės floros vystymąsi.

Bismuto sulfito agaras, pavyzdžiui, neleidžia augti gramteigiamų bakterijų ir daug bakterijų, randamų virškinimo trakto ertmėje. Todėl jis naudojamas grynai bakterijoms, kurios sukelia vidurių šiltinę, auginti, Salmonella typhi išmatų mėginiuose.

Skirtingos žiniasklaidos priemonės

Šis tipas naudoja tam tikrą dominančio organizmo diagnostinę ypatybę (pavyzdžiui, jo metabolizmo ypatumus), kad būtų galima juos identifikuoti nuo kitos tos pačios aplinkos augančios rūšies.

Abu diferencialinės žiniasklaidos ir selektyvus žiniasklaida yra naudinga klinikinės mikrobiologijos ir visuomenės sveikatos srityje, nes šios disciplinos turi aptikti konkrečių mikroorganizmų susijusių ligų arba prastų higienos sąlygų buvimą.

Rodikliai gali būti pridėti prie pasėlių, kurie suteikia norimą kolonijai būdingą savybę. Pavyzdžiui, agaro-eozino-metileno mėlyna (sutrumpinta EMB) ir „MacConkey-agar“ pridedama laktozės ir pH indikatoriaus.

Taigi, kai šiose terpėse sukurta kolonija, gebanti fermentuoti laktozę ir gaminti aldehidus, jie gali būti pastebimi specialioje spalvoje.

Žingsniai

Šiuo metu auginimo terpę galima įsigyti liofilizuota forma. Todėl preparatas palengvinamas ir tik produktas yra rehidratuotas. Turinys turi būti pasveriamas (atsižvelgiant į galutinį kiekį, kurį norite paruošti) ir ištirpintas distiliuotame vandenyje, vadovaujantis visais produkto nurodymais..

Skystųjų terpių kiekis turi būti padalytas į norimus konteinerius (Petri lėkšteles, mėgintuvėlius ir tt) tolesniam sterilizavimui. Norint paskirstyti kietą terpę, būtina ištirpinti ją naudojant mikrobangų krosnelę arba paduodant medžiagą į vandens vonią. Reikėtų reguliuoti terpės pH.

Paprastai agaras naudojamas mėgintuvėliuose arba Petri lėkštelėse. Jei agaras kietėja įstrižoje padėtyje, su atitinkamu kampu, kad galutinis galinis kraštas būtų įstrižainės, šis išdėstymas yra žinomas kaip fleitų smailė arba pakreipti vamzdžiai. Kai agaras kietėja visiškai vertikalioje padėtyje, jis vadinamas „giliu“..

Sterilizavus terpę, naudojant autoklave, jiems leidžiama atvėsti. Jie turi būti tvarkomi aplinkoje, kurioje nėra mikroorganizmų. Dažniausiai dirbama su apšviestu žiebtuvėliu, užtikrinančiu aseptinę aplinką jo apylinkėse.

Nuorodos

1. Celis, J. E. (2006). Ląstelių biologija: laboratorinis vadovas (2 tomas). Elsevier.
2. Finegold, S.M., Bailey, W.R., Baronas, E.J., Fineglod, S.M., & Scott, E.G.. Bailey Scott: mikrobiologinė diagnozė. Pan American Medical.
3. Olivas, E. (2004). Mikrobiologijos praktikos vadovas I ir II bei parazitologija. Ciudad Juárez autonominis universitetas.
4. Schlegel, H. G., ir Zaborosch, C. (1993). Bendroji mikrobiologija. Cambridge University Press.
5. Tortora, G. J., Funke, B. R. ir Case, C. L. (2007). Įvadas į mikrobiologiją. Red. Panamericana Medical.