Pusė SIM pagrindo, paruošimas ir naudojimas

The pusė SIM Tai pusiau kietas ir diferencinis agaras, specialiai suprojektuotas padėti identifikuoti kai kurias bakterijas, daugiausia iš Enterobacteriaceae šeimos. Jį sudaro tripteinas, peptonas, geležies sulfatas, amonio sulfatas, natrio tiosulfatas ir agaras.

Ši terpė leidžia atlikti tris svarbius testus: vandenilio sulfido gamybą (H. \ T₂S), indolo susidarymas ir judrumas, taigi ir akronimas SIM. Dėl savo didelio naudingumo bakteriologijos laboratorijoje jo trūksta.

Skirtingai nuo kitų terpių, tai turi būti pusiau kieta, kad būtų galima nustatyti kai kurių bakterijų judėjimo pajėgumą. Šia prasme šis testas labai gerai veikia Enterobacteriaceae, bet ne gramnegatyviuose, nefermentuojančiuose baciluose, kur pageidautina naudoti kitus metodus, pavyzdžiui, laukiančią lašą.

SIM terpė leidžia atskirti tam tikras specifines savybes, kurios apibūdina kai kurias bakterijas kitų atžvilgiu. Pavyzdžiui Escherichia coli jis pasižymi H₂S (-), indolis (+) ir judrumas (+), o Proteus mirabilis tai H₂S (+), indolo (-), judrumas (+).

Indeksas

• 1 Fondas
  • 1.1 Maitinimo šaltinis
  • 1.2 Vandenilio sulfido gamyba
  • 1.3 Indolo susidarymas
  • 1.4. Motyvumas
• 2 Paruošimas
  • 2.1 Pusė SIM
  • 2.2 Kovac reagentas
  • 2.3 Erlicho reagentas
• 3 Naudojimas
  • 3.1
• 4 Kokybės kontrolė
• 5 Apribojimai
• 6 Nuorodos

Fondas

Tai yra kultūrinė terpė, kuri laikoma diferencine, nes jos panaudojimas leidžia atskirti mikroorganizmus, galinčius gaminti vandenilio sulfidą, nuo tų, kurie neturi; taip pat atkreipia dėmesį į tuos, kurie sudaro indolą iš tų, kurie nesukuria jo triptofano, ir pagaliau atskiria judesį nuo judančių bakterijų.

Maitinimo šaltinis

Kaip bet kuri kultūros terpė, ji turi elementų, kurie suteikia būtinas maistines medžiagas, kad galėtų atsirasti nereikalingi mikroorganizmai. Šiuos elementus vaizduoja peptonai ir tripteinas.

Mikroorganizmo vystymasis aplinkoje yra būtinas, kad būtų galima stebėti, ar nėra šios terpės įvertintų savybių.

Vandenilio sulfido gamyba

Akronimo SIM raidė S reiškia vandenilio sulfido gamybą (H₂S). Bakterijos, galinčios sudaryti vandenilio sulfidą, imsis natrio tiosulfato sieros.

Kai H susidaro₂S - bespalvės dujos - tai reaguoja su terpėje esančia geležies druska, sudarančia geležies sulfidą, aiškiai matomą (juodos nuosėdos). Bakterijos, kurios nėra H₂S, palikite pradinės spalvos vidurį (smėlio spalvos).

Juodųjų nuosėdų buvimas gali trukdyti judrumo interpretacijai. Vis dėlto yra žinoma, kad didžioji dalis H gaminamų enterobakterijų₂S yra teigiamas judrumas, pvz., Salmonella, Proteus ir Citrobacter. Be to, juoda nuosėdos, apimančios beveik visą terpę, rodo teigiamą judrumą.

Indolo mokymas

Antroji raidė „SIM“ yra „I“, kuris reiškia indolo formavimąsi.

Šia prasme tripteína, be to, kad ji yra maistinių medžiagų šaltinis, atlieka kitą pagrindinę funkciją. Šis peptonas turi daug amino rūgščių, vadinamų triptofanu, todėl gali parodyti triptofanazę gaminančias bakterijas..

Šis fermentas yra atsakingas už aminorūgščių triptofano išpjaustymą, todėl susidaro indolis (bespalvė medžiaga), piruvino rūgštis ir amonis..

Štai kodėl, norint parodyti šią reakciją, būtina pridėti atskleidžiančią medžiagą (Ehrlich reagentą arba Kovac reagentą). Bet kuris iš jų reaguoja su indolu, formuodamas žiedo formos raudonos fuksijos medžiagą ant agaro paviršiaus. Jei fuksijos žiedas atrodo, indolo testas yra interpretuojamas kaip teigiamas.

Bakterijos, neturinčios šio fermento, nesukurs žiedo ir bus interpretuojamos kaip neigiamas indolo testas.

Svarbu pabrėžti, kad indolo testas turėtų būti paskutinis, kuris turi būti aiškinamas, nes, pridėjus reagentą, terpė tampa drumsta, todėl sunku vizualizuoti judrumą..

Motyvacija

Galiausiai žodžio „SIM“ raidė „M“ reiškia judrumą. Kad būtų galima įvertinti judrumą, ši terpė yra strategiškai pusiau kieta, nes ši charakteristika yra būtina, kad būtų galima stebėti, ar yra bakterinis judėjimas. Bakterijos, turinčios vėliavą, yra tos, kurios daro šį teigiamą testą.

Teigiamas testas bus matomas, kai pastebimas drumstumas tiek pradiniame inokuliate, tiek aplink jį. Nors ne mobiliosios bakterijos išsivysto tik pradiniame inokuliacijos kelyje.

Paruošimas

Pusė SIM

Pasverkite 30 g dehidratuotos terpės ir ištirpinkite vienu litru distiliuoto vandens. Mišinys paliekamas stovėti 5 minutes ir tada kaitinamas iki virimo, dažnai maišant, kol visiškai ištirps..

Paskirstykite mišinį į mėgintuvėlius medvilniniu dangteliu ir autoklave 121 ° C temperatūroje 15 minučių. Išimkite mėgintuvėlį iš autoklavo ir leiskite jam sukietėti vertikalioje padėtyje, kad terpė būtų formos..

Laikyti šaldytuve, kol jis bus naudojamas. Paruošta terpė turi turėti galutinį pH 7,3 ± 0,2.

Inokuliuojant terpę, jis turi būti kambario temperatūroje. Medžiagos spalva yra smėlio spalvos.

Kovac reagentas

Išmatuokite 150 ml amilo arba izoamilo arba butilo alkoholio. (Naudokite vieną iš minėtų trijų).

10 g p-dimetilaminobenzaldehido ištirpinama. Tada lėtai įpilkite 50 ml koncentruotos druskos rūgšties.

Reagentas paruoštas naudoti yra bespalvis arba šviesiai geltonas. Jis turi būti laikomas gintaro butelyje ir laikomas šaldytuve. Nenaudoti, jei jis yra tamsiai rudos spalvos; tai rodo, kad jis sugadintas. Šis reagentas yra pageidautinas, kai naudojamasi enterobakterijomis.

Erlicho reagentas

Pasverkite 2 g p-dimetilaminobenzaldehido ir ištirpinkite 190 ml absoliutaus etilo alkoholio ir lėtai sumaišykite 40 ml koncentruotos druskos rūgšties. Kovac reagentą laikykite taip pat. „Ehrlich“ reagentas naudojamas ne fermentacijai ir anaerobinėms bakterijoms.

Naudojimas

SIM terpė yra labai naudojama bakteriologijos laboratorijose. Jo pranašumas yra tas, kad tame pačiame vamzdyje galima identifikuoti tris esmines Enterobacteriaceae identifikavimo savybes.

Pasėtas

Tinkamas būdas sėti šią terpę yra naudojant adatą, su kuria yra paimta dalis tiriamosios kolonijos dalies ir įterpiama į terpės centrą vertikaliai. Turi būti atlikta viena trauka. Punkcija neturi pasiekti vamzdžio dugno, teisingas dalykas yra padengti tik du trečdalius gylio.

Nerekomenduojama pakartoti inokuliato, nes tai gali sukelti klaidingą teigiamo judrumo interpretaciją. Inokuliuojama terpė inkubuojama aerobioze 37 ° C temperatūroje 24 valandas.

Baigtas laikas, kai jis stebimas, jei buvo arba nėra H gamybos₂Skaityta S ir judrumas. Galiausiai indolas atskleidžiamas, pridedant 3-4 lašus Ehrlicho arba Kovaco reagento, jis sumaišomas ir interpretuojamas.

Kokybės kontrolė

Kaip sterilumo kontrolė, vienas ar du mėgintuvėliai inkubuojami be inokuliacijos orkaitėje 37 ° C temperatūroje 24 valandas. Tikimasi, kad pasibaigus šiam laikui spalvų augimas ar pasikeitimas nebus.

Kaip kokybės kontrolė gali būti naudojami sertifikuoti žinomi padermiai, pavyzdžiui: Escherichia coli ATCC 25922, Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella sonnei ATCC 29930, Proteus vulgaris ATCC 13315.

Laukiami rezultatai: Escherichia coli H₂S neigiamas, indolis ir teigiamas judrumas, Enterobacter aerogenes tik teigiamas judrumas, Salmonella typhimurium H₂S ir teigiamas judrumas su neigiamu indolu. Proteus vulgaris visi teigiami, nors Klebsiella pneumoniae ir Shigella sonnei visi neigiami.

Apribojimai

-Kai kurie. \ T Morganella morganii, tarp kitų padermių gali atsirasti rudos spalvos pigmentas šioje terpėje dėl melanino gamybos, tai neturėtų būti painiojama su geležies sulfido nuosėdomis. Nepatyrę specialistai ši situacija gali sukelti klaidingus teigiamus rezultatus H testo interpretacijoje₂S.

-Griežtos aerobinės bakterijos augs tik ant vamzdžio paviršiaus, todėl sunku interpretuoti judrumą.

Nuorodos

1. BD laboratorijos BBL SIM laikmena. 2008 m
2. Neogen Laboratories SIM laikmena. Prieinamas: foodsafety
3. Difco Francisco Soria Melguizo. SIM laikmena. 2009 m.: Http://f-soria.es
4. Brizuela-Lab laboratorija SIM laikmena. Galima: .brizuela-lab.com
5. Laboratorijos Britanija. SIM laikmena. 2015 m. Galima rasti adresu: studyres.es/doc
6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologinė diagnostika. 5th ed. Redakcija Panamericana S.A. Argentina.