MIO laikmenų pagrindas, paruošimas ir naudojimas

The pusė MIO yra biocheminis tyrimas, naudojamas padėti identifikuoti Enterobacteriaceae šeimos bakterijų rūšis. Jis yra gana maistingas ir susideda iš gliukozės, mielių ekstrakto, peptono, tripteino, L-ornitino hidrochlorido, bromkrezolio violetinės ir agaro..

Jo akronimo (MIO) reikšmė apibūdina kiekvieną iš šių terpių stebimų parametrų; judrumas, indolis ir ornitinas. Motyvacija yra mikroorganizmo gebėjimas judėti vėliavomis. Kad ši savybė būtų stebima, terpės konsistencija turi būti pusiau kieta, todėl preparate yra mažiau agaro..

Indolo gamyba rodo, kad yra triptofanazės fermento, kuris veikia aminorūgščių triptofaną, todėl reikia naudoti atskleidžiančio reagento, kad indolo gamyba būtų matoma..

Galiausiai, ornitinas nustato, ar bakterija gali dekarboksilinti aminorūgštį, ty jei ji turi fermentą orinitino dekarboksilazę.

Indeksas

• 1 Fondas
  • 1.1. Peptonas, mielių ekstraktas ir tripteinas
  • 1.2
  • 1.3 Gliukozė
  • 1.4 L-ornitinas
  • 1.5 pH rodiklis
• 2 Sėklos ir vystymo technika
• 3 Paruošimas
  • 3.1 „MIO Medium“
  • 3.2 Kovacs reagentas (Indolo bandymo kūrėjas)
• 4 Naudokite
• 5 Kokybės kontrolė
• 6 Nuorodos

Fondas

Peptonas, mielių ekstraktas ir tripteinas

Šie elementai prisideda prie šios terpės maistinės galios. Jie tarnauja kaip maistinių medžiagų ir būtinų aminorūgščių šaltinis bakterijų vystymuisi.

Be to, tripteinas yra triptofano šaltinis, įrodantis, kad yra fermento triptofanazė, kuri redukuojančiu deaminacijos būdu išskiria triptofaną, išskiriantį indolą, piruvino rūgštį, amoniaką ir energiją..

Indolis yra bespalvis, todėl jo buvimas atskleidžiamas pridedant penkis lašus Ehrlich arba Kovacs reagento, abu su p-dimetilaminobenzaldehidu.

Šio junginio aldehido grupė reaguoja su indolu, generuodama žiedo formos fuksija raudoną produktą ant agaro paviršiaus.

Bet koks spalvos pėdsakas turėtų būti laikomas teigiamu įrodymu. Bandymas turi būti perskaitytas nedelsiant, nes po kurio laiko spalva pablogėja.

Kita vertus, šis tyrimas turėtų būti atskleistas po to, kai užregistruoti ornitino judrumo ir dekarboksilinimo rezultatai..

Aiškinimas

Teigiamas testas: fuksija raudonojo žiedo susidarymas, kai pridedamas Kovacs reagentas.

Neigiamas testas: nėra žiedo susidarymo.

Motyvacija

Bakterijų judėjimo gebėjimas bus įrodytas, jei bus pastebėta drumpa terpė arba jei yra stora augimo linija, plečianti pradinę inokuliaciją.

Neigiamas judrumo testas bus įrodytas stebint ploną augimo liniją, o aplinkui bus be augimo.

Svarbu, kad judrumas būtų perskaitytas prieš atskleidžiant indolą, nes pridėjus reagentą visa terpė debesuoja.

Mobiliosiose, bet lėtai augančiose bakterijose sunku parodyti savo judrumą su šia terpe. Tokiu atveju rekomenduojama naudoti kitus bandymus ar metodus, tokius kaip judrumo terpė arba lašų lašų metodas.

Gliukozė

Gliukozė yra fermentuojamieji angliavandeniai, kurie, be energijos, rūgština terpę, būtina sąlyga, kad aminorūgšties ornitinas būtų dekarboksilintas..

Visada turėtų vykti gliukozės fermentacija, remiantis principu, kad visos Enterobacteriaceae šeimos šeimos bakterijos gliukozės gliukozė.

L-ornitinas

Jei bakterija gamina fermentą ornitino dekarboksilazę, ji gali veikti, kai terpė yra rūgštinta fermentuojant gliukozę..

Ornitino dekarboksilazės fermentas veikia aminorūgšties karboksilo grupę, gaminančią aminą, vadinamą putresinu, kuris vėl šarminia terpę.

Šis testas turėtų būti skaitomas po 24 valandų inkubacijos, nes jei bandysite perskaityti prieš bandydami neteisingai neigiamai įvertinti testą.

Reikia prisiminti, kad pirmoji reakcija yra gliukozės fermentacija, taigi pradinėje fazėje (pirmoji 10-12 valandų) terpė tampa geltona. Jei vėliau atsiranda ornitino dekarboksilinimas, terpė taps raudona.

Svarbu aiškinti ornitino dekarboksilinimo bandymą prieš atskleidžiant indolą, nes Kovacs reagento pridėjimas modifikuoja terpės spalvą..

Aiškinimas

Neigiamas testas: vidutiniškai geltona arba geltona fone.

Teigiamas testas: visiškai violetinė.

PH indikatorius

Šiuo atveju naudojamas bromkrezolio violetinis; asmuo, atsakingas už atskleidimą, kai viduryje yra pH pokytis. Kai parūgštintas, indikatorius tampa geltonas, o šarminiu paviršiumi tampa violetinė.

Sėklos ir vystymo technika

Norėdami pasodinti MIO terpę, naudojama tiesi kilpa arba adata ir su juo surenkama dalis tiriamosios kolonijos..

MIO terpėje yra tiesi linija. Nerekomenduojama atlikti dvigubo punkcijos, nes ji gali suteikti klaidingą judrumo vaizdą, jei punkcijos nevyksta toje pačioje vietoje.

Inkubuokite 24–48 valandas 37 ° C temperatūroje aerobioze. Stebėkite rezultatus šia tvarka: judrumas, ornitino dekarboksilinimas ir galiausiai atskleidžiamas indolis.

Patartina aseptiškai paimti 2 ml terpės, perkelti ją į sterilų mėgintuvėlį ir ten atlikti indolo testą, kad, jei neigiamas, likusią pirminio mėgintuvėlio dalį galima inkubuoti 24 valandas, kad vėl būtų rodomas indolas..

Indolo vystymasis atliekamas tokiu būdu: 3–5 lašai Kovacs reagento dedami į MIO terpę ir energingai maišomi. Tai pastebima, jei pasirodys raudonos spalvos žiedas.

Paruošimas

Pusė MIO

Pasverkite 31 g MIO terpės ir ištirpinkite vienu litru distiliuoto vandens.

Įkaitinkite, kol mišinys vieną minutę virina, dažnai maišant, kol agaras visiškai ištirps. Paskirstykite 4 ml terpės į 13/100 mėgintuvėlių su medvilniniu dangteliu.

Sterilizuokite autoklave 121 ° C temperatūroje 15 minučių. Išimkite iš autoklavo ir leiskite jam stovėti tiesiai į stelažą taip, kad susidarytų pusiau kietas blokas.

Laikyti šaldytuve 2-8 ° C. Prieš pasodindami bakterijų štamą, leiskite nudeginti.

Dehidratuotos terpės spalva yra smėlio spalvos ir šiek tiek violetinės opalescuojančios terpės spalva.

Galutinis paruoštos terpės pH yra 6,5 ​​± 0,2

Medžiaga tampa geltona su rūgštiniu pH ir purpurinė su šarminiu pH.

Kovacs reagentas (Indolės testo kūrėjas)

Šis reagentas paruošiamas taip:

Išmatuojama 150 ml amilo, izoamilo arba butilo alkoholio (bet kurio iš trijų). Jame ištirpinama 10 g p-dimetilaminobenzaldehido. Po to lėtai įpilama 50 ml koncentruotos druskos rūgšties.

Paruoštas reagentas yra bespalvis arba šviesiai geltonas. Jis turi būti laikomas gintaro butelyje ir laikomas šaldytuve. Tamsiai rudos spalvos rodo jo būklės pablogėjimą.

Taip pat Kovacs reagentą galima pakeisti Ehrlich reagentu. Pastaroji, jautresnė, yra pageidautina atskleisti indolą bakterijose, kurios jį gamina minimaliais kiekiais, kaip ir kai kuriuose gramteigiamuose nefermentuojančiuose baciluose ir tam tikruose anaerobuose.

Naudokite

Ši terpė yra bandymas, papildantis biocheminių bandymų, skirtų Enterobacteriaceae šeimai priklausančių bakterijų identifikavimui, bateriją..

Ornitino de-karboksilinimo duomenys skiriasi Shigella sonnei, tai suteikia teigiamą, iš Shigella boydii, Shigella flexneri ir S. dysenterieae, kurie duoda negatyvus.

Ji taip pat išskiria „Klebsiella“ gentį, kuri suteikia neigiamą „Enterobacter“ gentį, kur dauguma jos rūšių yra teigiamos.

Kokybės kontrolė

Kiekvieną kartą, kai paruošiama MIO terpė, galima atlikti kontrolinį bandymą. Šiuo atveju žinomos arba sertifikuotos padermės naudojamos terpės elgsenai stebėti.

Naudojamos padermės yra Escherichia coli, Morganella morganii, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter aerogenes ir Proteus mirabilis.

Tikėtini rezultatai yra E. coli ir M. morganii. Dan M: +, I: + ir O: +.

Klebsiella pneumoniae suteikia visas neigiamas (M: -, I: -, O :-). Proteus mirabilis ir Enterobacter aerogenes dan M: + I: - ir O: +.

Nuorodos

1. Mac Faddin J. (2003). Biocheminiai klinikinės reikšmės bakterijų identifikavimo tyrimai. 3-asis red. Redakcinė Panamericana. Buenos Airės Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologinė Bailey & Scott diagnozė. 12 red. Redakcija Panamericana S.A. Argentina.
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologinė diagnostika. 5th ed. Redakcija Panamericana S.A. Argentina.
4. Laboratorijos Britanija. „MIO Medio 2015“. Prieinama adresu: britanialab.com
5. BD laboratorijos BBL Motility Indole ornitino (MIO) terpė. 2007 m
6. Valtek Laboratories Medium M.I.O. Motilumas, indolas, ornitinas. 2010 m. Galima rasti adresu: andinamedica.com